慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪TXB2、6?K?PGF1α与心功能的变化及其相关性研究

【摘要】  目的：探讨慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪血中血栓素B2(Thromboxane B2,TXB2)、6?酮?前列腺素F1α(6?Keto?PGF1α，6?K?PGF1α)、肿瘤坏死因子?a(TNF?α)浓度与心功能等指标的变化及其相关性。方法：采用病证结合的方法即动物左冠状动脉前降支第一间隔支起始部远端放置Ameroid缩窄环的方法复制慢性心肌缺血血瘀证模型。小型猪随机分为假手术组、模型组。应用心脏超声心动图测定心功能和心室重构;应用放免法测定血中血栓素TXB2、6?K?PGF1和TNF?α的浓度。结果:小型猪慢性心肌缺血后，血中TXB2、6?K?PGF1α、TNF?α浓度与假手术组相比都发生了明显变化。结论：TXB2与EDV呈负相关、与TNF?α呈正相关,TNF?α表达水平与EDV、ESV均呈负相关，随心功能的恶化，其表达量增高。说明血小板的激活程度与心功能有关，心功能越差，血小板的活性越高，血栓形成的危险性就越大，尤其易造成微血栓。

【关键词】  心肌缺血 血瘀证 心功能 TNF?α 血栓素B2 6?酮?前列腺素F1α

　　The Study on the Change of TXB2，6?Keto?PGF1α and Cardiac Function and the Relation Between Them of Miniature Pig Which was the Syndrome of Blood Stasis Model Made by Chronic Myocardial Ischemia

　　［Abstract］Object:To inquire into the change of the concentration of TXB2,6?Keto?PGF1α,TNF?a in blood plasma of miniature pig which was the syndrome of blood stasis model made by chronic myocardial ischemia and the relation between them.Methods:We adopted the syndrome of blood stasis model of chronic myocardial ischemia by laying the Ameroid condensation ring surrounded the origainate region of the first septum of animals' front-fall branch of left coronary attery as the integrate illness with syndrome.And the pigs were divided into uncontrolled group and model grouprandomly.We tested the cardiac function and ventriculus cordis re?establishment by ultrasonic cardiogram,and tested the value of TXB2，6?Keto?PGF1α and TNF?a by radioimmunoassay in blood plasma..Results:The concentration of TXB2，6?Keto?PGF1α,TNF?a all obviously changed compared with model group made by chronic myocardial ischemia of miniature pig.Conclusions:The value of TXB2 and EDV presented negative correlation,it and that of TNF?a presented positive correlation.The express of TNF?a and EDE,ESV presented negative correlation,and with the deteriorate of cardiac function,it increased.These showed that the level of activation of Plt were related with cardiac function.The worse of cardiac function,the higher of the activity of Plt,and the more of dangerous of the thrombosis,and easier of mini-thrombosis especially.
   
　　［Key words］Heart muscle ischemia;disease with syndrome and sign;Cardiac Function;TNF?a;TXB2;6?Keto?PGF1α

　　目前认为，许多心血管疾病的发生与PGI2／TXA2平衡失调有关。凡倾向于血栓形成的因素均TXA2生成增多或PGI2减少有关，是血瘀病理的重要标志。通常情况下，二者保持着平衡，相互拮抗、相互协调，这对于维持微循环血流和细胞许多功能方面均起着重要的作用。

　　TNF?α是参与心室重塑的最为密切的细胞因子之一，而且是随心功能的恶化，血中TNFα的浓度明显升高［1］。但有关TXB2、6?K?PGF1α水平与心功能、TNFα相关性的报道很少。本实验主要探讨慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪，血中血栓素B2、6?酮?前列腺素F1α、TNF?α的浓度与心功能等指标的变化及其相关性。

　　1  实验材料

　　1.1  动物与分组
 
　　动物为农业大学育种健康中华小型猪，体重25kg左右，月龄6-10个月，雌雄不限。随机分为假手术组和模型组，每组6只。

　　1.2  材料、试剂与仪器 

　　内径2.75mm的Ameroid缩窄环(Research Instrument SW,USA)；安尔碘(上海利康消毒高科技有限公司，批号：20050808)；盐酸氯胺酮注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：KH050302)；TXB2、6?Keto?PGF1α、TNF?α，放免试剂盒(北京华英生物技术研究所)；超声诊断仪(惠普Agilent sonos 5500)。

　　2  实验方法
       
　　猪右侧卧位，左侧第4肋间前外侧切口，逐层进胸，注意保护左肺，剪开心包，以无损伤卵圆钳夹住上提左心耳，暴露冠状动脉的左回旋支，剪开此处的心外膜，在近左前降支分离左回旋支起始部表面的脂肪组织，游离出左回旋支长约1cm，避免损伤伴行的冠状静脉,用两线平移牵引法将冠状动脉的左回旋支与Ameroid环的缺槽平行对齐,立即将两者同时做相反方向的运动，迅速将其套入直径2.75mm的Ameroid环内［2］。缝合心包,放置胸腔闭式引流管，逐层关胸。假手术组动物不放置Ameroid环，其他操作均与模型组一致。

　　2.1  心功能的测定 

　　采用二维、M型及多普勒超声心动图，检测左室舒张末容积(End?diastolic volume,EDV)，左室收缩末容积(End?systolic volume,ESV)、射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、每搏输出量(SV)、E/A等指标。

　　2.2  TXB2、6?K?PGF1α、TNF?α的测定

　　颈部前腔静脉采血6ml，3ml采用EDTANa2?消炎痛抗凝，另外3ml不加抗凝剂，4℃，3500转/min，离心25min，收集上清，分装后?80℃保存，血浆用于检测血栓素B2(Thromboxane B2,TXB2)、6?酮?前列腺素F1α(6?keto?PGF1α，6?K?PGF1α)，血清用于检测TNF?α。样品在室温复溶后，采用放免法检测。操作严格按照放免试剂盒说明书。

　　3  实验结果

　　3.1  心功能的变化 

　　术后模型组4周、8周ESV和EDV值与同期假手术组相比有显著差异(P＜0.05)，SV、EF、E/A比均无明显的变化，提示心功能仍处于代偿期，见表1。表1  手术4周、8周超声心功能指标的变化(略)

　　3.2  TNF?α浓度的变化 

　　术后4周和8周模型组TNF?α浓度与同期假手术组相比显著增高，有极显著差异(P＜0.01)，见表2。表2  术后4周、8周血中TNF?α浓度的变化(略)

　　3.3  血浆6?K?PGF1α、TXB2浓度变化 

　　术后8周模型组6?K?PGF1α、TXB2浓度与同期假手术组相比显著增高，有显著差异(P＜0.05)，见表3。表3  手术后4周、8周血浆6?K?PGF1α、TXB2、K/T的变化(略)

　　3.4  相关性分析 

　　将ESV、EDV、 SV、EF、E/A和TNF?α浓度与6?K?PGF1α、TXB2浓度进行相关性分析，结果表明，EDV与TXB2呈负相关(r=-0.488,P＜0.05)，TNF?α与TXB2呈正相关(r=0.636,P＜0.05)。TNF?α与EDV、ESV呈负相关(r=-0.586,P＜0.05；r=-0.557,P＜0.05)。

　　4  讨论

    血栓素(Thromboxane，TXA2)、前列环素(Prostacyclin,PGI2)均为花生四烯酸的代谢物，是前列腺素(Prostaglandins，PG)中生物活性最强的一对，PGI2可舒张血管及抗血小板聚集、防止血栓形成；TXA2可使血管痉挛、促进血小板聚集和血栓形成。通常情况下，二者保持着平衡，相互拮抗、相互协调，这对于维持微循环血流和细胞许多功能方面均起着重要的作用。由于TXA2和PGI2在循环中极不稳定，目前很难测定，通常采用测定它们的代谢物TXB2和6?K?PGF1α水平来反映TXA2和PGI2水平。6?K?PGF1α和TXB2能间接反映血小板和血管内皮细胞的功能状况。

    心脏既是TNF?α作用的靶器官,也是其生物合成的场所。心肌组织缺氧可促使心肌组织合成TNF?α［3］。本实验主要探讨慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪，血中TXB2、6?K?PGF1α、TNF?α浓度与心功能等指标的变化及其相关性。本实验结果显示，慢性心肌缺血血瘀证模型小型猪，血中TXB2、6?K?PGF1α、TNF?α浓度和心功能等指标与假手术组相比都发生了明显变化；TXB2与EDV呈负相关、与TNF?α呈正相关，TNF?α表达水平与EDV、ESV均呈负相关，随心功能的恶化，其表达量增高。说明血小板的激活程度与心功能有关，心功能越差，血小板的活性越高，血栓形成的危险性就越大，尤其易造成微血栓。提示血小板的激活指标可以作为反映心功能状态的指标之一。

【】
  　　［1］王先梅，杨丽霞等.肿瘤坏死因子α和基质金属蛋白酶家族与左室重构的关系［J］.中华内科杂志,2004,11(43):828-831.

　　［2］Cohn JN,Ferrari R,Sharpe N,et al.Cardiac remodeling-concepts and clinical implications:a consensus paper from an international forum on cardiac remodeling［J］.J Am Coll Cardiol,2000,35:569-582.

　　［3］Feldman AF,Combes A,Wagner D,et al.The role of tumor necrosisfactor in the pathophysiology of heart failure［J］.J Am Coll Cardiol,2000,35:537-544.