抵当汤化裁方对荷瘤小鼠抑瘤作用及对T淋巴细胞亚群的影响

【摘要】  目的：探讨抵当汤化裁方对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及对T淋巴细胞亚群的影响。材料与方法：建立小鼠克洛氏(S180)肉瘤动物模型,将荷瘤小鼠分为抵当汤化裁方高、中、低剂量组，连续灌胃10d，同时设阴性对照组和正常组,观察抑瘤率。结果：抵当汤高、中、低剂量组对荷瘤小鼠瘤重的抑瘤率分别为56.25%、36.51%和18.42%，与阴性对照组比较有显著差异，尤以高剂量组为明显;CD+4T淋巴细胞数量、CD+8T淋巴细胞数量及CD+4/CD+8比值与阴性对照组比较均明显升高，尤以高剂量组最为明显。结论：抵当汤化裁方能抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长，并能缓解和改善S180荷瘤小鼠免疫力低下和免疫紊乱状态，抵当汤化裁方高剂量组疗效最佳。

【关键词】  抵当汤 荷瘤小鼠 抑瘤 T淋巴细胞亚群

    　　近年来中药的防癌作用备受关注，利用中药提高机体免疫功能，抑制肿瘤生长，达到肿瘤的目的，是目前中医药研究的热点话题［１］。抵当汤化裁方是在《金匮要略》原方的基础上减大黄加党参、白术、白芍经处理制成的纯中药制剂，具有活血化瘀、缓中补虚、攻补兼施之功效。本实验以荷瘤小鼠为对象，观察不同浓度的药物对S180肉瘤的作用，从抑瘤和免疫功能方面进行随机对照试验，现将结果报告如下。

    1  实验材料

    1.1  动物  昆明种小鼠40只，4-6周龄，体重18-22g，雌雄各半，由辽宁中医药大学实验动物中心提供。

    1.2  药品与制剂  抵当汤化裁方组成:水蛭9 g，虻虫9 g，桃仁12 g，党参15 g，白术15 g，白芍15 g。以上药物由辽宁中医药大学附属中药房一次性购齐，经生药鉴定为真品，上方水煎煮3次，合并滤液浓缩制成高、中、低剂量组，生药含量分别为1.97 g/mL，0.9 g/mL，0.45 g/mL，灭菌，冰箱冷藏备用。小鼠淋巴细胞分离液由院生物工程研究所提供，批号为LTS1092。小鼠T淋巴细胞单克隆抗体CD4、CD8由北京天象-邦定公司提供。

    1.3  瘤株  腹水型克洛氏肉瘤(S180)瘤株由沈阳药科大学提供。

    2  实验方法

    2.1  对小鼠S180肉瘤的抑瘤作用  取腹腔接种S180瘤株8d的荷瘤小鼠，无菌操作下抽取腹腔瘤液，以灭菌生理盐水1:1稀释，经0.2%胎盼蓝染色细胞计数板计数后,活细胞数＞95%，调整瘤细胞悬液数约为1×106/mL，再按0.2 mL/鼠的剂量在32只小鼠右前肢腋窝皮下接种。接种后24 h称重,随机分为阴性对照组及给药组(分为高、中、低剂量组)，并开始给药，1次/d，给药容积均为0.2 mL/10 g·d［2］，连续10 d，末次给药后24 h，眼眶取血，颈椎脱臼处死动物，称体重，剥瘤称重计算抑瘤率，并将各组结果进行统计学处理。疗效评价公式：

    抑瘤率(%)=(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%

    2.2  对外周血T淋巴细胞亚群的影响  实验小鼠处死以前,进行眼眶取血,用事先标记好加有抗凝剂的试管收集标本,然后采用间接荧光染色法检测各实验组动物T淋巴细胞亚群,计算出CD+4T淋巴细胞数量、CD+8T淋巴细胞数量及CD+4/CD+8比值。

    3  实验结果

    3.1  对小鼠S180肉瘤的抑瘤作用  见表1表1  抵当汤化裁方对荷瘤小鼠的抑瘤作用注：与阴性对照组比较﹡，#P＜0.05，##P＜0.01。

    3.2  对T淋巴细胞亚群的影响  见表2表2  抵当汤化裁方对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响注：与正常组比较，△P＜0.01；与阴性对照组比较，#P＜0.05；与阴性对照比较，##P＜0.01。

    4  讨论

    　　肿瘤的发生受多种因素的调节，同时与机体的免疫状况密切相关，肿瘤病人的机体免疫不同程度的发生紊乱［3-4］，肿瘤免疫与研究表明，保护免疫器官、提高免疫功能是抗肿瘤、抑制肿瘤生长、防止扩散的重要措施［5］。S180是一种具有免疫原性的肿瘤，其在生长过程中能明显抑制机体的免疫功能，而T淋巴细胞是构成机体抗肿瘤免疫功能的重要因素，有明显异质性。

    　　本实验通过给S180荷瘤小鼠灌服抵当汤化裁方发现，抵当汤化裁方可以明显抑制肿瘤生长，且随剂量的增加而呈依赖性。能够增加荷瘤小鼠外周血CD+4T淋巴细胞、CD+8T淋巴细胞数量，调节CD+4/CD+8比例，提高荷瘤小鼠T淋巴细胞的增殖能力。抵当汤原方中水蛭、虻虫、桃仁攻下祛瘀，软坚散结，即“坚者消之”，“结者散之”之义［6］。而所加的党参、白术、白芍能扶正祛邪，健脾益气，即“衰者补之”之义。抵当汤化裁方通过提高荷瘤小鼠T淋巴细胞的增殖能力，从而调节了S180荷瘤小鼠的免疫功能，抑制了荷瘤小鼠肿瘤的生长。

    　　此外本方中水蛭、虻虫、桃仁等活血消肿祛瘀通络去?，改善局部细胞缺氧的情况从而抑制肿瘤新生血管的形成，而且水蛭、虻虫等虫类药释放大量的纤维蛋白酶原，能够抑制血管内皮生长作用，从而抑制肿瘤血管生成。

【】
  ［1］杜维霞.复方洋参多糖免疫增强剂对荷瘤和辐射小鼠T淋巴细胞亚群的影响［J］.实验临床免疫学杂志，2005，9(4)：58-61.

［2］苗明三.实验动物学［M］.北京：中国中医药出版社，1997，1：127.

［3］贾宗良，白建华，王清丽，等.甲状腺癌患者血清中SIL?2R测定的临床意义［J］.西安医科大学学报，2000，21(2)：164-165.

［4］Tinlakos D，Spandidos DA，Yiagnisis M et a1.Expression 0f ras and C myc onco-protein and hepatitis B surface antigen in human liver disease ［J］. Hepatogastroenterology， 1993，(40)：56.

［5］龚非力主编.医学免疫学［M］.北京：北京出版社，2004：374.

［6］范永升.金匮要略［M］.北京：中国中医药出版社，2003：73.