雌二醇诱导肝内胆汁淤积孕鼠心肌酶谱变化的研究

               作者：葛环　戚美华 岳虹霓 魏红

【摘要】  目的探讨妊娠肝内胆汁淤积(ICP) 鼠心肌酶谱和胎鼠心肌细胞超微结构的变化及其发病机制。方法取孕14 d大鼠40只，随机分为4组，每组10只。3个实验组分别注射剂量5.0、2.5、1.2 mg/(kg.d)的苯甲酸雌二醇(EB)，以诱导孕鼠产生不同程度的肝内胆汁淤积，测定孕晚期血清心肌酶谱的变化，用电镜观察胎鼠心肌超微结构的变化。对照组注射同体积的生理盐水。结果实验组胎鼠心肌细胞核内染色质分布异常,胞质稀疏,线粒体肿胀、嵴断裂或消失，出现膜样退变，闰盘间隙增大。各实验组总胆酸与注射EB前和对照组相比有所升高，高、中剂量组差异有显著性(P＜0.01，P＜0.05)；与对照组比较，谷草转氨酶明显升高(均P＜0.05)；乳酸脱氢酶也不同程度升高，高、中剂量组差异均有显著性(P＜0.05)；高剂量组的肌酸激酶同工酶显著升高(P＜0.05)。结论 EB诱导的ICP可以引起孕鼠胆酸升高、心肌酶谱变化以及胎鼠心肌超微结构的改变，提示这可能是ICP导致突发不明原因死胎的原因之一。

【关键词】  肝内胆汁淤积； 心肌酶； 胆酸; 胆红素; 大鼠

  妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)主要特征为皮肤瘙痒和胆酸升高，临床症状和实验室异常通常在分娩后数小时至数天恢复正常。该病对母婴均有不良影响，对围产儿影响更大，可导致早产、胎心率异常及突发性不明原因的死胎、死产等，使围产儿患病率和病死率增高［1］。本研究在建立动物模型的基础上，观察不同程度ICP胎鼠心肌细胞超微结构，并检测孕晚期大鼠血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK?MB)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)等心肌酶谱的变化，以了解胆酸的升高对孕、胎鼠心肌的影响,从而探讨ICP引起不明原因死胎、死产的可能机制。

    1材料和方法

    1.1 材料

    实验用清洁级SD雌性大鼠(由江苏省实验动物中心提供)，体重200～220 g，年龄150～170 d；室温18～20℃，相对湿度40％～70％；不限制饮水和饮食；于发情期与雄性SD大鼠1∶1合笼饲养，每天观察粪盘内有无脱落的阴栓蜡块，阴栓脱落日定为妊娠第1天，分笼饲养待用。主要实验仪器为JEM?1010透射电镜、OLYMPUS AU2700型全自动生化分析仪；试剂为苯甲酸雌二醇(2 mg/2 ml)，上海第九制药厂，批号20031026。

    1.2方法

    1.2.1 动物模型制备［2］

    取孕14 d，SD大鼠40只，随机分为高、中、低雌激素组和对照组，每组10只，分别在后肢内侧皮下注射剂量为5.0(高剂量)、2.5(中剂量)、1.2 mg/(kg.d)(低剂量)苯甲酸雌二醇和2 ml/(kg.d)的生理盐水，1次/d，连续5 d。

    1.2.2标本采集及处理

    每组孕鼠均于孕20 d乙醚麻醉后从眶静脉采取全血1.5 m1，室温下静置3 min，3 000 rpm离心15 min，取血清约0.5 ml，生化分析仪检测各项血清指标。

    1.3 观察指标

    主要指标为胎鼠心肌超微结构,孕鼠血清CK、CK?MB、AST、LDH以及总胆酸(TBA)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)。

    1.4统计学处理

    统计数据用±s表示，计量资料采用t检验，运用SPSS 10.0 forWindows软件进行统计分析。

    2结果

    2.1 胎鼠心肌超微结构变化

    胎鼠对照组心肌细胞核膜完整，核仁明显，线粒体嵴清晰，闰盘结构清晰正常；实验组心肌细胞核内染色质分布异常，胞质稀疏，线粒体肿胀、嵴断裂或消失，出现膜样退变，闰盘间隙增大。

    2.2孕鼠血清TBA、ALT、TBIL、DBIL变化见表1。表1各组用药前后TBA、ALT、TBIL、DBIL变化情况注：与用药前相比，★P＜0.05，★★P＜0.01;与对照组相比＃P＜0.05，＃＃P＜0.01

    2.3孕鼠血清心肌酶谱变化见表2。表2各组用药前后AST、LDH、CK、CK?MB变化情况注：与用药前相比，★P＜0.05；与对照组相比＃P＜0.05，＃＃P＜0.01

    3 讨论

　　ICP是妊娠期特发的胆汁淤积，其病因复杂，目前尚不清楚。不少学者认为ICP与体内雌激素水平升高或肝酶对妊娠期生理性增加的雌激素产生异常代谢应答，使肝细胞膜的功能发生了改变，还可通过影响肝脏的转运蛋白而引起胆酸转运损害、胆汁淤积［3-5］。血清胆酸水平的升高不仅影响母体的健康状况，还可能沉积于胎盘，造成合体滋养层细胞增生和肿胀、绒毛间质水肿、绒毛间隙狭窄［6］，导致胎盘氧储备量减低，引起胎儿宫内缺氧。胆酸还可通过滋养细胞的转运进入胎儿血液循环，导致胎儿血清胆酸水平的增加，直接影响胎儿的生理功能。AST、LDH、CK、CK?MB等酶通常称为心肌酶谱，主要存在于骨骼肌、心肌和脑组织中，通过监测心肌酶谱的变化情况可以初步了解心肌损害的有无。且心肌是体内惟一含较多CK?MB的器官，,因此该酶在血清中的升高与否，对心肌损伤具有更为重要的诊断与鉴别诊断意义。本研究中各实验组均出现不同程度的AST、LDH的变化，注射高剂量雌激素后CK?MB明显升高，随着胆酸的升高伴有一些胎鼠心肌超微结构的改变，提示胆酸对心肌有一定的损害，可能是ICP常引起胎儿不明原因突然死于宫内的原因之一。临床中可以通过监测血清心肌酶谱的变化预测病情的变化和对胎儿的影响。

【】
  1Mullally BA，Hansen WF．Intrahepatic cholestasis of pregnancy：review of the literature．0bstet Gynecol Surv,2002，57(1)：47?52.

2 葛环，徐昌芬，焦中秀，等.妊娠肝内胆汁淤积症动物模型的建立.中华腹部疾病杂志，2003，3(3)：157?160.

3 Leslie KK，Reznikov L，Simon FR，et al.Estrogensin in intrahepatic cholestasis of pregnancy.0bstet Gynecol，2000，95(3)：372?376.

4 Reyes H.Intrahepatic cholestasisof pregnancy：an estrogen related diseasee.Semin Liver Dis，1993，13(3)：289.

5Stieger B，Fattinger K，Madon J，et al.Drug?and estrogen?induced cholestasis through inhibition of the hepatocellular bile salt export pump(Bsep)of rat liver．Gastroenterology,2000，118(2):422?430.

6 Rioseco AJ，et al.Intrahepatic cholestasisof pregnancy： a retrospective case?control study of perinatal outcome.Am J Obstet Gynecol，1994，101(1)：64?65.