“针刺五脏俞穴调五脏神”针法对失眠大鼠脑内细胞因子调节作用及其机制的研究

【摘要】  目的：观察针刺五脏俞穴对失眠大鼠脑内细胞因子的影响。方法：Wistar大鼠，雄性，体重180～220 g，40只随机分为4组，空白组：空白对照；模型组：腹腔注射PCPA；安定组：腹腔注射PCPA后，连续5个周期给予安定灌胃；针刺组：腹腔注射PCPA后，连续5个周期给予针刺治疗。分别观察各组大鼠下丘脑内IL?1、TNF含量的变化。结果：模型组脑内IL?1、TNF含量明显降低，与空白组比较有显著性差异(P＜0.05)。安定组脑内IL?1、TNF含量均有明显升高，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。针刺组脑内IL?1、TNF含量有明显升高，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。结论：针刺五脏俞穴对失眠大鼠脑内细胞因子的影响显著,针刺五脏俞是治疗失眠症的一种有效方法。

【关键词】  失眠 针刺疗法 细胞因子 穴 背俞 大鼠

    基金项目:吉林省技术厅课题(课题编号20050574)    　　失眠症中医称之不寐、不得卧，是临床常见病症之一，常因脏腑功能紊乱、气血亏虚、阴阳失调导致。持续失眠可影响自主神经系统、内分泌系统和免疫功能。白细胞介素?1(IL?1)和肿瘤坏死因子(TNF)是具有多种生物学功能的细胞因子，现已证明，IL?1和TNF是参与睡眠的免疫调节中有代表性的细胞因子，内源性的IL?1和TNF随着睡眠的变化而呈现节律性的含量改变，外源性的IL?1和TNF则均可诱发动物睡眠［1］。笔者在导师东贵荣教授“调五脏神治疗失眠”经验的基础上［2］，观察了“针刺五脏俞穴调五脏神”针法对失眠大鼠下丘脑内IL?1和TNF含量的影响，进一步研究了“针刺五脏俞调五脏神”针法干预失眠的机制，为“调五脏神治疗失眠”学说提出实验依据。

    1  实验材料

    1.1  实验动物  健康Wistar大鼠，雄性，体重180～220 g［长春高新动物实验中心提供，为普通级动物，许可证号：SCKE—(吉)2003］。在长春中医药大学第一附属新药研究开发实验室常温下饲养1周后用于实验。

    1.2  动物分组  空白组不做任何处置，每日空抓，反映未做任何处置大鼠下丘脑内IL?1、TNF的含量。模型组腹腔注射PCPA造模成功后，不作任何处理，反映大鼠治疗前下丘脑内IL?1、TNF的水平。安定组腹腔注射PCPA后，给予安定灌胃治疗，观察造模后安定对大鼠下丘脑内IL?1、TNF的影响。针刺组取肺俞(双)、心俞(双)、脾俞(双)、肾俞(双)，观察针刺对失眠大鼠下丘脑内IL?1β、TNF的影响。

    2  实验方法

    2.1  造模方法  采用PCPA腹腔注射的方法，临用前按大鼠450 mg/kg用量，用弱碱性生理盐水配置成混悬液备用。除空白组外，其余3组腹腔注射PCPA混悬液，连续注射2 d，空白组不做任何处理，于第1次腹腔注射28～30 h后，大鼠出现昼夜节律消失，白天夜晚活动不停，表示模型复制成功。

    2.2  针刺疗法  参照华兴邦大鼠穴位图谱，于第3胸椎棘突下旁开7 mm取肺俞(双)，于第5胸椎棘突下旁开7 mm取心俞(双)，于第12胸椎棘突下旁开7 mm取脾俞(双)，于第2腰椎棘突下旁开7 mm取肾俞(双)。

    　　操作：常规消毒后，采用0.35 mm×20 mm不锈钢毫针，直刺6 mm，将Hj6805?1型经穴治疗仪，正极接肺俞的毫针，负极接肾俞的毫针，疏密波(8/80 Hz，疏密波转换14次/min，电压强度从1V随针刺时间和次数逐渐增加，保持局部轻微抖动为度，终强度为3V电流为1mA)。通电时间为10 min，留针20 min为一个针刺周期，连续重复5个针刺周期共计2.5 h，出针后0.5 h处死大鼠。

    2.3  西药疗法  安定片，按成人催眠剂量10 mg/d，用大鼠给药剂量体表面积公式算出大鼠给药剂量为0.92 mg/kg，连续5 d给药后处死。

    2.4  测定方法  用放射免疫检测法测定各组大鼠下丘脑内的IL?1β、TNF的含量。

    3  实验结果

    　　各组大鼠实验结果采用(±s)表示，所有实验数据结果采用SPSS 11.0软件进行统计分析。

    3.1  针刺对失眠大鼠下丘脑内IL?1β含量的影响  见表1。表1  针刺对失眠大鼠下丘脑内IL?1β含量的影响注：与模型组比较，△P＜0.05

    　　由表1可见，模型组下丘脑内IL?1β含量与空白组比较无显著性差异(P＞0.05)。针刺组下丘脑内IL?1β含量升高明显，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。安定组下丘脑内IL?1β含量亦略有升高，但与模型组比较也无显著性差异(P＞0.05)。

    3.2  针刺对失眠大鼠下丘脑内TNF含量的影响  见表2。表2  针刺对失眠大鼠下丘脑内TNF含量的影响 注：与模型组比较△P＜0.05

    由表2可见，模型组下丘脑内TNF含量与空白组比较无显著性差异(P＞0.05)。针刺组下丘脑内TNF含量升高明显，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)。安定组下丘脑内TNF含量亦略有升高，但与模型组比较无显著性差异(P＞0.05)。

    4  讨论

    　　细胞因子是机体免疫细胞产生的，是一小分子多肽类糖蛋白质，极微量就能发挥作用，有靶细胞的特异性。近年对睡眠的免疫调节研究甚多，均证实人在睡眠中其免疫功能也发生了许多改变，剥夺睡眠会影响免疫细胞及细胞因子的活性［3］。细胞因子不但是重要的免疫调节因子，而且具有广泛的中枢调节作用，它们在对神经活性和影响输入、输出关系的反应环路中产生诱导局部状态的改变，同时也影响突触的可塑性。细胞因子不仅在外周血液单核细胞中释放并存在，而且外周神经和大脑中也存在，因此细胞因子能通过不同线路影响中枢神经系统的睡眠过程［4］。目前研究较多的细胞因子主要有IL?1、TNF。

    　　IL?1和TNF是具有多种生物学功能的细胞因子，在炎症反应、免疫反应中发挥着重要的作用，是神经?内分泌?免疫三大系统的共同语言信号。TNF促进大鼠、小鼠脑内5?HT的合成，提高5?HT及其代谢产物5?HIAA的含量，这可能是它促进SWS(慢波睡眠)的机制［5］。

    　　许多免疫增强剂及免疫调节剂具有调节睡眠时相，改善睡眠质量的作用。异丙肌苷、转移因子、胞壁酰二肽等免疫增强剂在使脑内IL?1、TNF分泌增加的同时，也延长了家兔的睡眠时间；应用免疫抑制剂环磷酰胺降低家兔免疫功能的同时，可明显抑制SWS［6］。

    　　腹腔注射PCPA后，模型组下丘脑内IL?1β含量略低于空白组，模型组下丘脑内TNF含量略高于空白组，但组间比较不具有统计学意义。安定对腹腔注射PCPA所致失眠大鼠下丘脑内IL?1β和TNF含量的影响不明显，说明安定失眠的机理不是通过提高免疫细胞因子的活性实现的，其治疗作用途径较为单一。

    　　“针刺五脏俞调五脏神”针法提高了IL?1β和TNF的含量，说明该针法具有调节免疫系统的作用，进一步证实免疫细胞因子参与了睡眠调节过程，为验证“调五脏神治疗失眠”学说提供了实验证明。

【】
  ［1］Recht schaffen A,Bergmann BM.Sleep deprivation and host de2 fense［J］Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2001,280(2):6 021.

［2］胡金凤.从五脏藏神的理论内涵探讨膀胱经五脏俞穴治疗失眠症的立法原则［J］.针灸,2006,26(1):69?71.

［3］肖 雁.睡眠的免疫调节研究进展［J］.医师进修杂志,2003,26(6):57?59.

［4］王春燕,赵忠新.细胞因子与睡眠/剥夺的研究进展［J］.脑与神经疾病杂志,2004,12(2):154?156.

［5］李树新,库宝善,李中华,等.肿瘤坏死因子对睡眠的影响及其机制分析［J］.神经,1997,4(4):157?160.