射频治疗子宫平滑肌瘤组织中survivin,c?fos的表达和原位凋亡的意义
【摘要】 目的： 射频子宫平滑肌瘤组织中survivin 和c?fos的表达和原位凋亡检测及其意义研究. 方法: 应用免疫组化SP法及原位凋亡Tunel试剂盒检测10例子宫肌正常组织和60例射频治疗子宫肌瘤组织中治疗区域、交界区及正常区域survivin和c?fos的表达和原位凋亡，观察射频治疗子宫肌瘤组织中survivin，c?fos的表达及原位凋亡. 结果: 60例子宫肌瘤组织survivin在射频治疗区域、交界区及正常区域的阳性表达率分别为40.0%（24/60），18.3%（11/60）和15.0%（9/60）. c?fos在射频治疗区域、交界区及正常区域的阳性表达率分别为11.7%（7/60），3.3%（2/60）和3.3%（2/60）. 原位凋亡检测在射频治疗区域、交界区及正常区域的阳性率分别为86.7%（52/60），28.3%（17/60）和18.3%（11/60）. 子宫肌正常组织10例均未检出. 结论： 子宫肌瘤的发生与survivin，c?fos的表达和原位凋亡有关系. 射频治疗不同区域与原位凋亡阳性关系密切，子宫肌瘤不同区域与survivin和c?fos表达关系不密切.
【关键词】 平滑肌瘤 子宫肌瘤 导管消融术 survivin c?fos 细胞凋亡
0引言
我们将免疫组化技术与射频治疗（RFA）结合，研究子宫肌瘤RFA组织中survivin，c?fos的表达和原位凋亡及其意义，探讨子宫肌瘤组织凋亡机制在射频治疗子宫肌瘤的作用.
1对象和方法
1.1对象
2006?08/2007?06住院多发性子宫肌瘤患者60例，有手术指征，不合并其他盆腔疾病，无严重内科疾病，心电图正常，近3 mo 未采用其他治疗措施，均于月经周期前14 d行子宫切除术. 抗体survivin和c?fos与实验中所用其他试剂购自福州迈新生物技术公司，原位凋亡Tunel试剂盒为德国宝来曼?罗氏公司产品.
1.2方法
手术中行射频治疗，术后立即切除子宫作为急性处理组，10例征得患者同意,于射频治疗后3 d切除子宫作为慢性处理组，取同一患者子宫上未做射频治疗的肌瘤作为对照组. 所有标本术后病理检查均确诊为寻常组织学类型子宫肌瘤，无肌瘤变性，子宫内膜为增殖期改变.60例患者全子宫切除术于连续硬膜外麻醉后，开腹暴露子宫，选择直径3～6 cm 的浆膜下肌瘤或向浆膜面突出的肌壁问肌瘤，直视下行单点射频消融治疗. 分别用末端裸露0.5 cm和1.2 cm长的刀头，插入肌瘤内，当被治疗的肌瘤组织阻抗达100%时，治疗仪自动报警，提示局部消融完全，此时停止射频消融治疗，取出刀具，肌瘤射频消融后切除子宫立即固定标本作为研究组，沿射频刀穿刺走向切开肌瘤，平行取材，依次切取消融灶中心（治疗区）、消融灶边缘（交界区）、距消融灶边缘外子宫上未做射频治疗的肌瘤组织作为对照组（正常区）. 组织包埋后，蜡块以4～5 μm厚度连续切片5张，贴片后置55℃烤箱中3 h 后取出备用. BBT?RF?B型自凝刀射频治疗仪由西安半边天医疗器械有限公司产，工作频率（550±50） kHz，发生器输出功率为0～60 W，治疗肌瘤时，射频仪功率参数设置20 W，治疗电极为较锐的刀具，仅远端裸露0.5～1.2 cm，其余被绝缘材料包裹.采用免疫组化染色SP法，操作按原位凋亡Tunel试剂盒说明书进行. survivin和c?fos阳性结果为细胞胞核内出现棕黄色颗粒，原位凋亡的阳性细胞为细胞核内出现棕黄色颗粒.
统计学处理：用SPSS11.0软件包进行统计分析，组间率的比较用χ2检验. P＜0.05为差异有统计学意义.
2结果
2.1子宫平滑肌瘤组织survivin和c?fos及原位凋亡子宫平滑肌瘤组织60例survivin在射频治疗区域、交界区及正常区域的阳性表达率分别为40.0%，18.3%和15.0%. 三者比较，差异无统计学意义(P>0.05). c?fos在射频治疗区域、交界区及正常区域的阳性表达率分别为11.7%，3.3%和3.3%. 三者比较，差异无统计学意义(P>0.05). 原位凋亡检测在射频治疗区域、交界区及正常区域的阳性率分别为86.7%，28.3%和18.3%. 三者比较，差异有统计学意义(P<0.05).10例对照均未检出.
2.2射频电极与survivin和c?fos及原位凋亡表达的关系射频电极为0.5 cm和1.2 cm时，30例survivin表达分别为33.3%和46.7%，两者比较，差异无统计学意义(P＞0.05). c?fos表达分别为0.0%，6.7%，两者比较，差异无统计学意义(P＞0.05). 原位凋亡阳性检出率分别为93.3%，80.0%，两者比较，差异无统计学意义(P＞0.05).
2.3年龄与survivin和c?fos及原位凋亡表达的关系20~29，30~39，40~49岁组survivin表达率为58.3%（7/12），40.8%（11/27），28.6%（6/21），三者比较， 差异无统计学意义(P＞0.05). c?fos表达率：0（0/12），14.8%（4/27），14.3%（3/21），三者比较，差异无统计学意义(P＞0.05). 原位凋亡检出率：83.3%（10/12），88.9%（24/27），85.7%（18/21），三者比较，差异无统计学意义(P＞0.05).
3讨论
目前，射频子宫肌瘤在临床应用方面初步取得成绩，有关射频消融治疗子宫肌瘤的实验基础性研究还相对较少. 从射频致细胞凋亡及凋亡相关基因的影响方面阐述其作用机制目前尚未明确.
RAF所致射频透热治疗疗效主要依赖热对肿瘤的杀伤作用．热诱导细胞死亡有两个独特的模型：慢死亡和快死亡，慢死亡的机制可能与热诱导凋亡有关. 快死亡则是高热对肿瘤中心处缺氧状态的癌细胞直接杀伤，使组织发生凝固性坏死［1］.
Falleni等［2］和Vallbohmer等［3］在对恶性间皮细胞瘤和食管癌的研究中发现，survivin在正常组织、炎性组织、肿瘤组织中的表达量逐步显著增加，提示肿瘤的发生与survivin相关. 从这些研究结果我们可以推测，survivin基因在肿瘤组织中的再激活和异常表达而导致的细胞凋亡减少或逃避参与了肿瘤的发生、. 本组研究显示，survivin在子宫平滑肌瘤射频治疗区域、交界区及正常区域的阳性表达率，统计学无显著性差异，提示，survivin在子宫平滑肌瘤发生发展中起一定作用，但不是关键作用，对于射频治疗观察不是敏感指标.
在Burkitt淋巴瘤中，热诱导的凋亡伴有c?fos mRNA升高，43℃加热30 min后6 h测定，60%的肿瘤细胞出现凋亡，如加热与稳定状态的c?fos mRNA表达联合运用，可增加l0倍凋亡作用，c?fos mRNA可上调热诱导的凋亡作用［4-5］. 本组研究显示， c?fos在射频治疗区域、交界区及正常区域的阳性表达率，差异无统计学意义，提示，c?fos在子宫平滑肌瘤发生发展中起一定作用，但不是关键作用，c?fos基因可能不参与射频治疗引起的凋亡.
本实验结果表明RFA治疗后，可以大量诱导子宫肌瘤细胞凋亡，其发生的部位主要是中心区域. 子宫平滑肌瘤组织原位凋亡检测在射频治疗区域、交界区及正常区域的阳性率的比较，差异有统计学意义. 本组研究提示射频治疗主要作用是诱导细胞凋亡，通过诱导细胞凋亡，达到治疗目的. 但本组原位凋亡研究结果与Nikfarjam 等［1］报道RFA治疗后除造成组织变性、坏死、崩解、液化、炎性细胞浸润等病理现象外，诱导肿瘤细胞的凋亡发生的部位主要是肿瘤的周边区域有所不同，即我们的实验原位凋亡主要的发生部位是中心区域. 分析其原因，可能与本组实验取材的时间在RFA疗后30 min内，而Nikfarjam 等［1］在RFA治疗后24 d及14 d，以及实验方法、评价标准和病例选择等不同有关.
通过对比实验研究，RFA的确能诱导平滑肌瘤细胞大量凋亡，是评价RFA直接治疗效果的重要指标. 诱导肿瘤细胞凋亡亦是射频消融治疗肿瘤的一项重要机制. 对RFA临床治疗平滑肌瘤具有重要价值. 关于RFA治疗后如何影响平滑肌瘤凋亡相关基因的表达，尚有待于进一步研究.
【参考】
［1］Nikfarjam M, Malcontenti MV, Wilson C,et a1. Progressive mierovascular injury in liver and coloreetal livermetastases following laser induced focal hyperthermia therapy［J］. Lasers Surg Med，2005,37（1）：64-73.
［2］Falleni M， Pellegrini C， Marchetti A， et a1. Quantitative evaluation of the apoptosis regulating genes Survivin,Bcl-2 and Bax in inflammatory and malignant pleural lesions［J］. Lung Cancer,2005，48（2）：211-216.
［3］Vallbohmer D， Peter J H， Oh D， et a1. Survivin,a potential biomarker in the development of Barrett s adenocarcinoma［J］. Surgery,2005,38（4）:701-707.
［4］Johnstone RW， Ruefli AA， Lowse SW. Apoptosis：a link between cancer genetics and chemotherapy［J］. Cell，2002，108（2）：153-155.
