亚洲带绦虫烯醇酶基因及其蛋白质的结构与功能
【摘要】 分析和预测亚洲带绦虫烯醇酶基因及其编码蛋白的结构和特性，用于指导其生物学功能的实验研究。【方法】 利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具，结合其他生物信息学分析软件包，如Ｐｃｇｅｎｅ和Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ ｓｕｉｔｅ， 从亚洲带绦虫全长ｃＤＮＡ质粒文库中识别烯醇酶基因及其编码区，分析、预测该基因编码的蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等。【结果】 该基因全长１７３７ ｂｐ，编码区为第２０５～１５０３ ｂｐ，编码４３３个氨基酸，为全长基因。ＧｅｎＢａｎｋ中与棘口吸虫烯醇酶氨基酸序列同源性最高，达７８％。相对分子量理论预测值为４６６５３．５ Ｋｕ。没有质体、线粒体定位序列。预测编码蛋白有１个跨膜区，３个亲水性部位。与吸虫属的烯醇酶进化关系最近。 【结论】 应用生物信息方法从亚洲带绦虫成虫ｃＤＮＡ文库中筛选出了亚洲带绦虫烯醇酶ｃＤＮＡ全长序列并预测得到其结构与功能方面信息。
【关键词】 亚洲带绦虫 烯醇酶 结构 能 生物信息学
Ａｂｓｔｒａｃｔ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 Ｔｏ ｇｅｔ ｔｈｅ ｍｅｓｓａｇｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｅｎｏｌａｓｅ ｆｒｏｍ Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ（Ｔ．ａ．ＥＮＯ） ｂｙ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ． 【Ｍｅｔｈｏｄｓ】 Ａ ｆｕｌｌ-ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｅｎｏｌａｓｅ ｆｒｏｍ ｃＤＮＡ ｐｌａｓｍｉｄ ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｏｏｌｓ ｏｆ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｔ ｗｅｂｓ ｓｉｔｅｓ ｏｆ ＮＣＢＩ． Ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｐｈｙｓｉｃｏ-ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ， ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ， ｄｏｍａｉｎｓ， ｓｕｂｃｅｌｌｕａｒ ｌｏｃａｔｉｏｎ， ｔｏｐｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ， ａｎｄ ３Ｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｂｙ ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ ｓｕｐｐｌｉｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｗｅｂｓｉｔｅ ｏｆ ＥｘＰａＳｙ． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】 Ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ Ｔ．ａ．ＥＮＯ ｉｎｃｌｕｄｅｓ ａ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｏｆ １２９９ｂｐ ｗｈｉｃｈ ｅｎｃｏｄｅｄ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ４３３ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ． Ｔｈｅ ｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ ｉｓ ２０５ ｂｐ ～ １５０３ ｂｐ． Ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｈａｓ ａ ｈｉｇｈ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｉｔｈ ｅｎｏｌａｓｅ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈａｓ ｏｎｅ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｇｉｏｎ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｐｈｙｓｉｃｏ-ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ． Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ Ｔ．ａ．ＥＮＯ ｉｓ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｔｏ ｂｅ ４６６５３．５ｕ． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈａｓ ｔｈｒｅｅ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ． Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔ．ａ．ＥＮＯ ａｎｄ ｅｎｏｌａｓｅ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｔｒｅｍａｔｏｄｅｓ ｉｓ ｃｌｏｓｅ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】 Ｔｈｅ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｅｎｏｌａｓｅ ｗａｓ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｆｒｏｍ ｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ａｄｕｌｔ Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ ｂｙ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ． Ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｔ．ａ．ＥＮＯ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ； Ｅｎｏｌａｓｅ； ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ； ｆｕｎｃｔｉｏｎ；ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ
亚洲带绦虫（Ｔａｅｎｉａ ａｓｉａｔｉｃａ，Ｔ．ａ．）广泛分布于东南亚，包括我国西南地区及， 韩国、泰国、印尼和菲律宾等地［１-３］。人们通过食生或半生含有亚洲带绦虫囊尾蚴的猪、或野猪的内脏， 特别是肝脏而感染，对劳动生产力和畜产品破坏极大。亚洲带绦虫成虫形态与牛带绦虫成虫相似，但其幼虫却与猪带绦虫的囊尾蚴相似。亚洲带绦虫成虫与牛带绦虫成虫的形态极为相似，人们长期以来把亚洲带绦虫误认为是牛带绦虫。上世纪８０年代以来人们对其形态学、流行分布、中间宿主及实验动物感染、遗传学进行了研究，但大部分工作仍局限在细胞水平［４］。本课题组构建了亚洲带绦虫成虫的ｃＤＮＡ质粒文库，获得了大量的Ｕｎｉｇｅｎｅ，在这些工作的基础上开展了对亚洲带绦虫基因组及蛋白质组学的研究，以期从分子水平寻求３种带绦虫的起源、演化和彼此间的亲缘关系及宿主选择性的形成等问题的答案。本文分析的烯醇酶（ｅｎｏｌａｓｅ， ＥＮＯ）是进行这方面研究中感兴趣的分子之一。
１ 材料与方法
１．１ 材 料
亚洲带绦虫成虫全长ｃＤＮＡ质粒文库， 由上海联合基因公司构建。大规模测序得到多个表达序列标签（ＥＳＴ），Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＢＬＡＳＴ（ＷＵ-ＢＬＡＳＴＸ）方法归并ＥＳＴ获得ＵｎｉＧｅｎｅ［５］， 由本课题组与该公司合作完成。编码亚洲带绦虫烯醇酶（Ｔ．ａ．ＥＮＯ）基因的文库质粒编号为ＨＣ１-Ｇ６。其他寄生虫及其他物种的ＥＮＯ氨基酸序列源自ＧｅｎＢａｎｋ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｇｅｎｂａｎｋ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）：肝片形吸虫烯醇酶基因（Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ ＥＮＯ，登录号ＡＡＡ５７４５０），棘口吸虫烯醇酶基因（Ｅｃｈｉｎｏｓｔｏｍａ ｃａｐｒｏｎｉ ＥＮＯ，登录号ＡＢＩ２６６１９），秀丽隐杆线虫烯醇酶基因（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ ＥＮＯ，登录号ＣＡＨ１０７８３），布氏锥虫烯醇酶基因（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ ＥＮＯ，登录号ＥＡＮ７７７１４），人烯醇酶基因（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＥＮＯ１，登录号ＡＡＹ４３１２８；Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＥＮＯ２，登录号ＡＡＨ０２７４５；Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＥＮＯ３ 登录号ＡＨ１７２４９），褐鼠（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ ＥＮＯ 登录号ＡＡＨ８３５６６）， 牛烯醇酶基因（Ｂｏｓ ｔａｕｒｕｓ ＥＮＯ 登录号ＡＡＩ０２９８９），野猪烯醇酶基因（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ＥＮＯ 登录号ＡＢＣ７５８２９）。
１．２ 方 法
１．２．１ Ｔ．ａ．ＥＮＯ基因的识别
通过美国国家生物技术信息中心（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ， ＮＣＢＩ， ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）网站的基本局部比对搜索工具（ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ，ＢｌａｓｔＸ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／）程序［６］，将文库质粒编号为ＨＣ１-Ｇ６的插入序列与ＧｅｎＢａｎｋ中的序列进行比对，分析该基因的翻译序列与其他蛋白质氨基酸序列的一致性、判断其是否为全长基因。利用ｒｐｓｂｌａｓｔ分析其保守功能域。
１．２．２ Ｔ．ａ．ＥＮＯ核酸和氨基酸序列分析
综合性蛋白核酸分析工具包（ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ ｓｕｉｔｅ）中的ＯＲＦ Ｆｉｎｄｅｒ确定其完整的编码序列（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｃｏｄｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｃｄｓ），然后用Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ程序推导并输出氨基酸序列。ＡｌｉｇｎＸ对Ｔ．ａ．ＥＮＯ与ＧｅｎＢａｎｋ中其他物种的同源蛋白氨基酸序列进行比对分析，构建分子进化树。
１．２．３ Ｔ．ａ．ＥＮＯ蛋白理化性质及结构分析
通过瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统（Ｅｘｐｅｒｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｒｍ，ＥｘＰＡＳｙ， ｈｔｔｐ：／／ｃａ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／）所提供的蛋白组学和序列分析工具， 对目的基因及其产物进行生物信息学分析。 预测Ｔ．ａ．ＥＮＯ的理化性质，如分子量、等电点、氨基酸组成、摩尔消光系数、重组产物在细菌、酵母和哺乳动物细胞中的半衰期、在溶液中的稳定性等。预测Ｔ．ａ．ＥＮＯ一级结构中糖基化、脂酰化、磷酸化、硫酸化等修饰位点、亚细胞定位。预测氨基酸序列的跨膜区和拓扑结构以及二级结构、分子的亲水性、溶液中的分子形态等， 通过二级结构比对和折叠，对蛋白质的空间构象建模。
１．２．４ Ｔ．ａ．ＥＮＯ的亲水性分析
Ｐｃｇｅｎｅ软件分析绘制氨基酸亲水性分布图，确定强亲水性的线性表位位置。
２ 结 果
２．１ 文库质粒编号为ＨＣ１-Ｇ６插入序列的Ｂｌａｓｔｘ分析
该基因是烯醇酶的同源基因，与ＧｅｎＢａｎｋ中棘口吸虫（Ｅｃｈｉｎｏｓｔｏｍａｔｉｄａｅ ｃａｐｒｏｎｉ）的烯醇酶同源性高达７８％。该克隆基因的５＇端序列长于棘口吸虫烯醇酶的完整编码序列，所以该基因应该是亚洲带绦虫烯醇酶的全长基因序列，其最大的ＯＲＦ就是其完整的编码区（图１）。用ｒｐｓｂｌａｓｔ分析发现有完整的烯醇酶的保守结构域（图２）。
２．２ Ｔ．ａ．ＥＮＯ蛋白质的理化性质
Ｔ．ａ．ＥＮＯ的相对分子量理论值和等电点分别为４６ ６５３．５和６．７７。含有５个半胱氨酸，预测这５个半胱氨酸之间形成二硫键的可能性较小，该蛋白在水溶液中２８０ ｎｍ处的摩尔消光系数为３３ １４０ ｍｏｌ·Ｌ－１·ｃｍ－１；蛋白浓度为１ ｇ／Ｌ时，半胱氨酸未形成二硫键时吸光系数（Ａｂｓ）为 ０．７０８。若其成熟肽Ｎ端为蛋氨酸时，在哺乳动物网状红细胞体外表达的半衰期为３０ ｈ， 在酵母和大肠埃希菌中表达的半衰期分别大于２０ ｈ和１０ ｈ。在溶液中的不稳定指数为３２．３３， 在溶液中性质稳定。疏水指数为８９．４７， 疏水性较高。
２．３ Ｔ．ａ．ＥＮＯ翻译后修饰、亚细胞定位的预测
用Ｍｏｔｉｆ ｓｃａｎｎｉｎｇ（Ｍｏｔｉｆｓｃａｎ）分析Ｔ．ａ．ＥＮＯ特定位点结果显示，Ｔ．ａ．ＥＮＯ含有６个潜在的酪蛋白激酶Ⅱ（ＣＫ２）磷酸化位点， ５个潜在的蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）磷酸化位点，２个酪氨酸激酶磷酸化位点，１０个潜在的Ｎ－肉豆蔻酰位点， １个潜在的天冬氨酸糖基化位点。Ｔ．ａ．ＥＮＯ没有分泌信号肽序列和质体以及线粒体定位序列。
２．４ Ｔ．ａ．ＥＮＯ的拓扑结构、二级结构和亲水性特征
用Ｐｒｅｄｉｃｔ ｐｒｏｔｅｉｎ预测结果如图３所示。Ｈｔｍ预测该蛋白是一个膜蛋白，有１个跨膜区（Ｍ），Ｎ端位于膜内（ｉ），Ｃ端位于膜外（ｏ）。Ｓｅｃ预测α螺旋（Ｈ）、β折叠（Ｅ）和无规卷曲（空白部分）的比例分别是４０．４２ ∶ ２１．１５ ∶ ３８．４３。
２．５ Ｔ．ａ．ＥＮＯ的亲水性分析
利用 Ｐｃｇｅｎｅ软件包预测Ｔ．ａ．ＥＮＯ氨基酸的亲水性分布（图４）。推导其线性抗原决定簇的位置分别是：①Ａｈ ＝ ２．０３ Ｆｒｏｍ ５０ ｔｏ ５５：Ａｒｇ-Ａｓｐ-Ｇｌｙ-Ａｓｐ-Ｌｙｓ-Ａｓｎ；②Ａｈ ＝ １．７３ Ｆｒｏｍ ８６ ｔｏ ９２： Ａｓｐ-Ｇｌｎ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｉｌｅ-Ａｓｐ-Ｇｌｕ；③Ａｈ ＝ １．４８ Ｆｒｏｍ ３７３ ｔｏ ３８０：Ａｒｇ-Ｓｅｒ-Ｇｌｙ-Ｇｌｕ-Ｔｈｒ-Ｇｌｕ-Ａｓｐ-Ｓｅｒ（Ａｈ，ａｖｅｒａｇｅ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ，平均亲水性）。
根据拓扑图，其中①和②序列位于膜内，③序列位于膜外，是另一个高亲水性的线性表位。该序列位于膜外区域，而且③的序列是ＥＮＯ蛋白质特征指纹序列。
２．６ Ｔ．ａ．ＥＮＯ的三维结构图和酶关键氨基酸的位置
利用同源建模法服务器（ＳＷＩＳＳ-ＭＯＤＥＬ）将Ｔ．ａ．ＥＮＯ 与蛋白结构数据库中的蛋白质三维结构进行匹配，输回模拟的Ｔ．ａ．ＥＮＯ三维结构图，文件在综合性蛋白核酸分析工具包中打开该蛋白质结构文件，将构成酶活性中心的关键氨基酸标示在结构图上：ＥＮＯ的关键氨基酸分别为第２１１位的谷氨酸（Ｇｌｕ２１１）、第３４３位的赖氨酸（Ｌｙｓ３４３）、和第３７１位的组氨酸（Ｈｉｓ３７１）［７］，它们在空间位置上十分靠近，并且 Ｈｉｓ ３７１ 出现在ＥＮＯ的蛋白指纹区域［８］（图５）。
２．７ Ｔ．ａ．ＥＮＯ与其他物种ＥＮＯ的比较和分子进化树的构建
应用ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ ｓｕｉｔｅ软件邻位相连法（ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ ｊｏｉｎｉｎｇ 法）对 ９ 个物种１１个ＥＮＯ的氨基酸序列构建分子进化树（图６）。结果显示在这９个物种中Ｔ．ａ．ＥＮＯ与吸虫属的ＥＮＯ的进化关系最近。这几个物种ＥＮＯ的关键氨基酸都处在相对保守的区域中。在与人的３个型别的ＥＮＯ比对中，Ｔ．ａ．ＥＮＯ与ＥＮＯ３的同源性高达７４．７％，与ＥＮＯ１、ＥＮＯ２同源性为７４．３％（图６），这与ＢｌａｓｔＸ分析的结果是一致的。
３ 讨 论
生物信息学可以通过对已有的核酸和蛋白质序列数据库进行扫描和比对，搜索目标序列特殊的结构特征（如各种亚细胞的定位信号、翻译后的修饰位点、功能域等），对基因的功能进行初步的理论预测，为其功能研究寻找线索。生物信息学对基因的编码区、限制性酶识别位点、编码的蛋白质的理化性质（包括等电点、分子量、半衰期、稳定性、疏水性等）的分析，有助于采取合理的克隆和表达策略，选用适合的表达载体，提高目的蛋白高效的可溶性表达的可能性，获得有活性的重组蛋白［５］。
本文分析亚洲带绦虫烯醇酶基因，在ＧｅｎＢａｎｋ中有其同源序列，经多个生物信息学分析软件预测，该基因与其他物种的烯醇酶编码基因同源性较高，具有烯醇酶的特征氨基酸序列和保守功能域。基于这个分析结果，作者认为可以在以后的实验中验证其是否具有催化２-磷酸甘油酸与磷酸烯醇式丙酮酸间转化的活性、是否具有烯醇酶的其他已被确定的特点，从而确定其是否为亚洲带绦虫的烯醇酶编码基因。
在进行验证性的工作时，生物信息学分析获得的结果（如：烯醇酶的分子量、等电点、在溶液中的稳定性、在不同系统或细胞中的半衰期等）可以帮助我们更好地进行实验，避免实验的盲目性。
烯醇酶是糖酵解途径中催化２-磷酸甘油酸与磷酸烯醇式丙酮酸之间进行转化的酶，是一个比较保守的蛋白，对它的分析可以提供一些亚洲带绦虫进化的信息。但由于目前ＧｅｎＢａｎｋ中还没有猪带绦虫、牛带绦虫及其他绦虫的烯醇酶氨基酸序列，所以在本文中仅将Ｔ．ａ．ＥＮＯ氨基酸序列与可以作为亚洲带绦虫的宿主的人、猪、牛、鼠，以及其他寄生虫的烯醇酶进行了比对、构建了进化树。这个比对结果虽然不能判断Ｔ．ａ．ＥＮＯ与猪带绦虫、牛带绦虫或其他绦虫的进化关系，但是如果把Ｔ．ａ．ＥＮＯ作为药物靶点， 或者从其中寻找表位来研制疫苗， 则必需考虑它与宿主烯醇酶氨基酸的同源性，要选取Ｔ．ａ．ＥＮＯ与宿主有差别、但又比较关键的序列来进行实验研究。
另外，对Ｔ．ａ．ＥＮＯ拓扑结构的预测显示，Ｔ．ａ．ＥＮＯ是一个膜蛋白，没有质体及线粒体的定位序列，很多研究发现烯醇酶定位于细菌、真菌、原虫［９］、蠕虫［１０］的表面，也可通过免疫定位来确定Ｔ．ａ．ＥＮＯ是否位于亚洲带绦虫的表膜， 从而进一步研究其在致病及免疫方面的作用。
绦虫生理代谢所需的能量来自糖酵解，虽然烯醇酶不是糖酵解途径的关键酶，但它是一种多功能蛋白，是一个嗜神经因子。它能与细胞骨架蛋白和多聚核苷酸结合、还具有热休克蛋白的功能［１１-１３］。此外，它还是纤溶酶原及层粘连蛋白的受体［１４］，在寄生虫侵袭宿主组织过程中发挥作用［９］，它在感染和免疫中还作为抗体作用的靶分子［１５］。利用生物信息学方法分析得到的结果将有助于全面了解Ｔ．ａ．ＥＮＯ的功能。
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