大鼠腹主动脉慢性移植物血管病模型的建立
【关键词】 腹主动脉移植 慢性移植物血管病 慢性排斥反应
慢性排斥反应已成为阻碍移植物长期存活的重要原因，慢性排斥反应最主要的病理特征是慢性移植物血管病。免疫性和非免疫性因素共同作用导致发生慢性移植物血管病[1，2]，至今无有效的药物应用于临床，加强这方面的基础研究已经显得日益重要。通过建立简单、实用的动物模型能更好开展慢性移植物血管病的基础研究。笔者建立大鼠腹主动脉慢性移植物血管病模型，报告如下。
1 材料和方法
1.1 实验动物及分组 随机采用清洁级健康雄性封闭近交系Brown-Norway大鼠和近交系Lewis大鼠。近交系Brown-Norway大鼠为供者，体重200～350 g，近交系Lewis大鼠为受者，体重200～350 g。所有大鼠均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。实验分三组：对照组A为Lewis大鼠假手术组；对照组B为Lewis～Lewis大鼠间的同系腹主动脉移植；实验组C为Brown-Norway到Lewis大鼠的异系腹主动脉移植。三组分术后3、7、15、30、45、60 d 6个时相点，每个时相点各8对。
1.2 大鼠腹主动脉移植模型的制备 供、受体术前均予1%戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔注射麻醉，剪取供鼠Brown-Nor-way腹主动脉2～3 cm，原位移植到受鼠Lewis腹主动脉。手术总时间50～60 min，血管吻合共约16～18针，吻合约需25～35 min，大鼠一般术后20～30 min可以自行翻身。
1.3 病理组织标本采集和形态学分析 手术后3、7、15、30、45、60 d切取三组大鼠腹主动脉，肝素盐水冲洗血管腔，标本置于4%甲醛固定后石蜡包埋，切片，并进行HE染色，封片。应用HMIAS-2000显微图像分析系统采集图片，每个标本高倍视野下随机取5处，测量增厚内膜厚度，取平均值。
1.4 统计学处理方法 实验数据采用SPSS13.0统计软件包进行分析，两组间比较采用t检验。
2 结果
2.1 成功率及存活情况 共行96对大鼠腹主动脉移植实验，对照组B和实验组C分别6个时相点各8对，共成功实施72对，平均手术时间（56±5）min，平均冷缺血时间（35±3）min，其中麻醉意外3只，术后吻合口血栓9只，术后出血8只，术后腹腔脓肿4只，手术成功率75.0%。
2.2 组织学检查 对照组A血管内膜无变化，内膜细胞呈单层，排列整齐，无炎性细胞浸润，中膜和外膜无明显改变。对照组B术后3、7、15、30、45、60 d，血管内膜无明显变化，内膜细胞呈单层，排列整齐，无炎性细胞浸润，中膜和外膜无明显改变，与对照组A管腔内膜厚度比较差异无显著性（P>0.05）。实验组C术后30 d移植动脉内膜开始出现增厚，血管内膜有淋巴细胞和单核细胞浸润。术后60 d呈现出典型的移植相关血管硬化，内膜明显增生并呈同心圆增厚，管腔狭窄，大量成纤维细胞增生，内膜可见少量淋巴细胞浸润，中层细胞坏死迁移，内弹力纤维有断裂，与实验组B管腔内膜比较差异有显著性（P<0.01）。
2.3 移植动脉形态学测量 HMIAS-2000显微图像分析系统采集图片，每个标本高倍视野下随机取5处，测量增厚内膜厚度，取平均值（见表1）。
3 讨论
1991年Mennaander[3]首次报道建立大鼠腹主动脉移植的方法。移植物冠状血管病的动物模型有同种异体腹主动脉移植和同种异体心脏移植、肾脏移植模型。心脏和肾脏移植均需要熟练的显微手术技巧，而且移植物血管病的改变易受到其他因素的影响[4]。目前最成熟的是同种异体腹主动脉移植，这是一种简化的慢性移植物血管硬化模型，与以前的模型相比较，手术操作相对简单。
在手术过程中腹主动脉与腔静脉需分离清楚，一般需分离出1.0～1.5 cm左右，由于静脉壁极薄，腹主动脉又紧贴腔静脉，分离需要格外小心。同时游离腹主动脉时容易损伤小动脉及腔静脉分支，而血管损伤容易造成术中出血。这部分在整个手术过程中是难度最大的地方。移植动脉放置有利于缝合，进出针顺手，端端连续缝合，缝针不需要过密，总16～18针即可。吻合方式根据个人习惯，笔者体会将上下两端分别左右两点固定后，用连续缝合方法分别将上下两端的前层血管先吻合，然后交叉换线翻转后暴露后层血管，连续吻合两端的后层血管。这样做的好处是在缝合的过程中血管始终保持一定张力，有利于分清两层血管层次，更好暴露管腔吻合血管。模型建立初始阶段，手术不熟练导致血管吻合层次不清，前后层血管在吻合时被误缝合在一起。手术时间过长，受鼠创伤过大，术中、术后死亡。随着显微外科技术的熟练掌握，并发症减少，手术成功率显著提高。
【】
[1] van Loosdregt J,van Oosterhout MF, Bruqqink AH,ea al.The Chemokine and Chemokine Receptor Profile of Infiltrating Cells in the Wall of Arteries With Cardiac Allograft Vasculopathy Is Indicative of a Memory T-Helper 1 Response [J].Circulation,2006,114(15):1599-1607.
[2] Keck BM,Bennett LE,Rosendale J,et al.Worldwide thoracic organ transplantation:a report from the UNOS/ISHLT inter-national Registry for Thoracic Organ Transplantation[J].Clin Transpl,1999,13:35-49.
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