EGFR、MT、CD 44v6 在乳腺癌中的表达及意义

              作者：胡文庆　李小力 闫曙光

【关键词】  乳腺癌

    摘 要  目的:探讨EGFR、MT、CD 44v6 与乳腺癌的关系。方法:采用免疫组织化学链霉亲和素―生物素过氧化物酶标记法，用EGFR、MT、CD 44v6 单克隆抗体对42例存档石蜡包埋乳腺癌标本进行EGFR、MT、CD 44v6 蛋白表达检测，并与同期20例乳腺纤维瘤作对比。结果:EGFR、MT、CD 44v6 的阳性表达率在乳腺癌、乳腺纤维瘤中分别为83.3%、76.2%、83.3%;30%、10%、0，三种指标在乳腺癌中的阳性表达率均显著高于乳腺纤维瘤中的阳性表达（PEGFR<0.01、PMT<0.01、PCD 44V6 <0.01），EGFR的阳性表达在有、无淋巴结转移及临床分期Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期、Ⅳ期间有显著性差异（P 淋巴  <0.01、P 分期  <0.05），MT阳性表达在有、无淋巴结转移及临床分期Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期、Ⅳ期间有显著性差异（P 淋巴  <0.01、P 分期  <0.01），CD 44v6 的表达与乳腺癌的淋巴转移及临床分期无关。结论:EGFR、MT和CD 44v6 在乳腺癌中的表达异常是一个普遍事件，EGFR、MT的超表达发生在乳腺癌中晚期，CD 44v6 蛋白出现在乳腺癌的早期。EGFR和MT有望成为乳腺癌的预后判断指标，CD 44v6 有可能成为乳腺癌的早期诊断指标。

　　关键词  乳腺癌;癌基因;EGFR;MT;CD 44v6

    乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤。在我国，乳腺癌约占全身恶性肿瘤的7%～10%，是女性发病率最高的恶性肿瘤。其发病有逐年增多且有发病年龄年轻化的趋势。目前认为，乳腺癌的发生、发展中，包含癌基因突变激活和抗癌基因突变失活等多种分子事件。因此，癌基因蛋白、肿瘤相关蛋白联合表达与乳腺癌关系的研究非常必要。本文研究EGFR、MT、CD 44v6 在乳腺癌中的联合表达，探讨其在乳腺癌发生、发展中的作用和意义。

    1 材料方法

　　1.1 一般资料

    收集我院1999年～2004年经手术切除的乳腺癌及乳腺纤维腺瘤患者，诊断均经病理证实。术前未行放、化疗，其中乳腺癌42例，年龄28岁～78岁。乳腺纤维腺瘤20例，年龄21岁～59岁。

　　 1.2 主要试剂和方法

    从丹麦Dako公司购进EGFR、MT、CD 44v6 单克隆抗体，从武汉博士德公司购进SABC试剂盒、粘片剂APES和DAB显色试剂盒。PBS缓冲液pH=7.3±0.1，自行新鲜配制。采用免疫组织化学链酶亲和素-生物素过氧化物酶标记法，空白对照中用PBS代替第一抗体，其他步骤相同。阳性对照为武 汉博士德生物有限公司提供的阳性对照片。

    1.3 结果判断标准

    EGFR、MT染色阳性细胞为胞浆或胞膜染有片状或颗粒状棕黄色。CD 44v6 染色阳性细胞为胞膜染有片状或颗粒状棕黄色。免疫组化阅片由两名病理专科医师独立进行。 1.4 统计学方法采用χ 2 检验和四格表确切概率法，以P<0.05为显著性检验水准。

    2 结果

    EGFR、MT的免疫反应产物定位于细胞膜和细胞浆，其阳性染色为漫状棕黄色或颗粒样棕黄色（见图1，图2）。CD 44v6 的免疫反应产物定位于细胞膜，其阳性染色为细胞膜棕黄色染色。

    EGFR、MT联合阳性表达在乳腺癌肿瘤直径大于和小于等于5cm，有和无淋巴结转移，临床分期Ⅲ期、Ⅳ期和Ⅰ期、Ⅱ期间均有统计学差异（P 直径  <0.05、P 淋巴  <0.01、P 分期  <0.01）;EGFR和CD 44V6 联合阳性表达及MT和CD 44V6 均阳性表达在乳腺癌肿瘤直径大于和小于等于5cm，有和无淋巴结转移，临床分期Ⅲ期、Ⅳ期和Ⅰ期、Ⅱ期间无统计学差异。EGFR、MT和CD 44V6 联合阳性表达在乳腺癌有和无淋巴结转移，临床分期Ⅲ期、Ⅳ期和Ⅰ期、Ⅱ期间中有显著性差异（P 淋巴  <0.05、P 分期  <0.01）。 表1 EGFR、MT、CD 44v6 在乳腺癌中的表达情况

    3 讨论

    EGFR基因定位于第七号染色体短臂，EGFR蛋白即表皮生长因子受体，是一个由1186个氨基酸组成的单链跨膜糖蛋白，具有酪氨酸蛋白激酶活性。EGFR与恶性肿瘤关系密切。一方面EGFR与EGF族配体结合后，在细胞的恶性增殖中起重要作用，另一方面EGFR位点与某些癌基因具有同源性 ［1］ 。

    金属硫蛋白（MT）是一种富含半胱氨酸并能结合多种重金属的低分子特殊非酶蛋白质，成人MT水平极低。MT在成人中的超表达被认为类似其他肿瘤胚胎基因产物，并可作为肿瘤标记物 ［2］ 。人类CD 44 基因位于第11号染色体短臂上，含有V区外显子的CD 44 转录子统称CD 44v ，CD 44 蛋白是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，属于细胞表面的粘连分子，主要参与细胞-细胞、细胞-基质之间的特异性粘连过程。目前，许多研究表明，CD 44v6 与肿瘤的侵袭和转移密切相关 ［3，4］ 。

    本研究发现，在乳腺癌中EGFR和MT联合表达率为73.8%（31/42），二者联合表达在肿瘤直径大于5cm和小于等于5cm之间，有淋巴结转移和无淋巴结转移之间，临床分期Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期、Ⅳ期之间有显著性差异（P 直径  <0.05、P 淋巴  <0.01、P 分期  <0.01）。EGFR和CD 44v6 、MT和CD 44v6 在肿瘤直径大于5cm和小于等于5cm之间，有和无淋巴结转移、临床分期Ⅰ期、Ⅱ期期和Ⅲ期、Ⅳ期之间无统计学差异。EGFR、MT和CD 44v6 联合表达率59.5%（25/42）。三者联合表达在肿瘤直径大于5cm和小于等于5cm之间无统计学差异，在有和无淋巴结转移、临床分期Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期、Ⅳ期之间有显著性差异（P 淋巴  <0.05、P 分期  <0.01）。本研究还发现，EGFR、MT在乳腺癌中联合表达与EGFR或MT在乳腺癌中单独表达在淋巴结转移和临床分期方面无统计学差异，但EGFR、MT联合表达不仅和有淋巴结转移及临床分期密切相关，而且在肿瘤直径大于5cm和小于等于5cm之间有显著差异，另外，4例死亡、3例转移及1例局部复发病例中EGFR、MT均为阳性。上述结果显示，EGFR、MT的联合表达与肿瘤的转移密切相关。表明EGFR、MT的联合检测比单一指标检测对乳腺癌的预后更有说服力。

    乳腺癌的发生发展是多种癌基因产物及相关蛋白作用的结果。本实验研究EGFR、MT和CD 44v6在乳腺癌中的表达及作用关系，认为，EGFR、MT

    和CD 44v6 在乳腺癌中的表达异常是一个普遍事件，EGFR、MT的超表达发生在乳腺癌发展中晚期，CD 44v6 蛋白出现在乳腺癌的早期。EGFR和MT有望成为乳腺癌的预后判断指标，CD 44v6 有可能成为乳腺癌的早期诊断指标，为基因提供一些有益的线索和实验依据。

    ［1］ David Douglas.EGFR Expression Tied to Poorer Breast Cancer Survival.Cancer2005，104:676.

    ［2］ Ellenrieder V，Alber B，Lacher U，et al.Role of MT-MMPs and MMP-2in pancreatic cancer progression.Int J Cancer，2000，85（1）:14.

    ［3］ 刑光明，路 晴，候晓薇，等.乳腺癌微转移的CK19和CD44 表达研究.中华普通外科杂志，2003，18（8）:491.

    ［4］ 许东哲，林贞花，沈雄虎，等.CD  44s 和CD 44v6 在大肠癌中表达的临床意义.临床肿瘤学杂志，2002，7（3）:161.