小柴胡汤抗肿瘤作用的实验研究进展
【摘要】 经过对相关的回顾分析，旨在对经典方剂挖掘发挥，研究小柴胡汤的抗癌效果，并探讨其作用机制，从而为临床应用提供的理论依据。
【关键词】 小柴胡汤；肿瘤；实验研究；综述
小柴胡汤出自东汉张仲景的《伤寒杂病论》，是中医和解少阳的著名代表方。近十多年来，该方的临床应用范围不断扩大，尤其在肿瘤方面，有报道[1-2]该方治疗肝癌、乳腺癌、宫颈癌、胰腺癌、胃癌等取得了很好的疗效。国内外学者对该方的抗肿瘤作用也进行了大量的实验研究,笔者就近年来的研究进展综述如下。
1 小柴胡汤的免疫调节作用
机体的免疫功能状态与肿瘤的发生、及预后有密切关系。一旦肿瘤发生，只有不断地调节免疫，充分发挥机体自身抗肿瘤的能力，控制转移和复发，使癌细胞逐渐向正常细胞发生逆转，肿瘤患者才能逐渐走向康复[3]。
1.1 对杀伤细胞的影响
自然杀伤(NK)细胞是一种重要的免疫细胞，它作为一类独立的淋巴细胞群，无需抗原预先致敏即可直接杀伤靶细胞，因而被视为机体免疫防御系统的第一道防线[4]。
黎雅婷等[5]用不同浓度的复方小柴胡汤对艾氏腹水癌（EAC）荷瘤小鼠灌胃10 d，结果检测各浓度组NK细胞的活性与空白对照组比较显著升高(P<0.05)。孙艳等[6]实验证明小柴胡汤组的NK细胞活性显著高于荷瘤对照组(P<0.05)。陶金成等[7]研究发现小柴胡汤提取物抑制S180瘤细胞生长的机理与其诱导肠管黏膜免疫系统T细胞及NK细胞有关。另有试验表明小柴胡汤可能是通过增强NK细胞活性、提高TNF|β和IL|2水平来发挥抑瘤作用的[8]。
恶性肿瘤患者常有免疫力低下现象,而放射治疗由于通过抑制干扰素,降低了NK细胞活性,影响其疗效。有实验证明小柴胡汤有增加放疗后NK细胞活性的作用，同时也具有解除或缓解荷瘤小鼠的免疫抑制和放疗对机体的免疫抑制作用,增强抗肿瘤效果[9]。
1.2 对肿瘤坏死因子的影响
研究表明，肿瘤坏死因子-α(TNF|α)是迄今为止所发现的直接抑制和杀伤肿瘤细胞作用最强的细胞因子，且有不损伤正常细胞的功能[10]。
多次实验证实小柴胡汤在体外的作用可能和脂多糖（LPS）的作用相同,即为激活单核-巨噬细胞,稳定地诱导TNF|α产生。某体外实验采用LPS作为对照药,结果显示小柴胡汤和LPS具有同样的诱导外周血单核细胞产生TNF|α的作用，而且TNF|α的产生量呈浓度依赖性增加[11]。周真［12］认为小柴胡汤的抗肝癌作用与其能够诱导TNF|α的产生可能有着密切关系。其实验得出不同浓度的小柴胡汤对健康成人单核细胞的TNF|α产生量均有促进作用,且与浓度呈正相关关系。
但对于小柴胡汤的浓度与TNF|α产生量的关系的看法也有不一致的报道。茅敏等[13-14]认为小柴胡汤小、中剂量组诱导Sl80荷瘤鼠单核细胞产生TNF|α的作用较大剂量组明显，说明在量效关系上，呈现负相关趋势。他们认为负相关趋势的产生可能是因为随着小柴胡汤剂量的增大，除治疗的有效成分外，其他非治疗目的的成分亦显示出作用，从而削弱了治疗有效成分的作用。因此对于小柴胡汤剂量的应用问题，我们还需要在今后的临床与实验中继续探索。
1.3 对白细胞介素-2的影响
国内外研究表明：白细胞介素-2(IL|2)对肿瘤细胞无直接的细胞毒性作用，主要通过调节机体的免疫系统发挥抗肿瘤效应[10]。方乐堃等[15]实验显示不同浓度的复方小柴胡汤均可显著提高EAC荷瘤小鼠脾细胞IL|2的水平和血CD+4/CD+8比值(P<0.05)。
环磷酰胺是细胞毒性化疗药物，在杀伤瘤细胞的同时也会损害机体免疫细胞，造成机体免疫功能低下[16]。小柴胡汤有对化疗药物的减毒增效作用，它能改善环磷酰胺所抑制的小鼠免疫功能，促进淋巴细胞转化，明显提高环磷酰胺造成的吞噬率及吞噬指数，提高CD+4/CD+8比值及IL|2的水平[17]。
2 小柴胡汤的直接抑制肿瘤作用
2.1 对抑瘤率的影响
张丰华等[18]通过体内实验得出小柴胡汤中、小剂量有明显的抑瘤作用(P<0.05) ,且在量效关系上呈负相关。用小柴胡汤联合20 Gy照射Lewis荷瘤小鼠，抑瘤率高达67 %；光镜下观察该组肿瘤坏死、出血、癌细胞退变、毛细血管增生、炎性细胞浸润及不完全坏死的程度显著优于其他各组[19]。另有实验结果显示小柴胡汤中、小剂量组抑瘤作用明显,且各剂量组均无引起荷瘤鼠体质量下降的趋势,提示小柴胡汤可能是一种低毒的抗癌中药方剂[20]。体外实验中张巍等[21]应用以小柴胡汤为底方的肺积宁方治疗肺癌，随着该方药物浓度的增大，对人肺腺癌A549细胞生长的抑制率也逐渐增加。
国外一些体内动物实验也证明小柴胡汤具有剂量依赖性抑制癌变的作用。神代正道实验结果表明，正常的肝细胞在小柴胡汤浓度很高时也不会完全死亡，而肝癌和胆管细胞癌培养细胞则随小柴胡汤浓度增高不断死亡，癌细胞的存活率明显降低[22]。Liu L等[23]证明长期口服小柴胡汤可抑制乳头状瘤的发病与生长。
2.2 清除活性氧的作用
日本学者汐田刚史[24]通过测定8-羟基-脱氧鸟苷(8|OHdG)来推算出癌变的可能性，报道了小柴胡汤有剂量依赖性清除·OH作用。实验给予大鼠小柴胡汤后，检测到8|OHdG产生减少，由此可阐明小柴胡汤抑制癌变作用的新机理。
2.3 对细胞凋亡、细胞周期的影响
细胞凋亡受阻是肿瘤发病的重要机制之一,故诱导肿瘤细胞的凋亡成为肿瘤治疗研究中的主要目标与手段[25]。此外，细胞周期调控异常与细胞癌变也密切相关。茅敏等[20]通过体内实验得出小柴胡汤抗肿瘤的作用机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡有关；另一重要作用机制是影响肿瘤细胞周期,使癌细胞阻滞于细胞周期的G0/G1期,从而进入S期，即DNA合成期的细胞数减少,造成其增殖指数降低,从而在一定程度上控制了肿瘤的增殖。
体外实验观察结果表明，4个浓度的肺积宁剂量组的细胞凋亡率均高于正常对照组，相比有统计意义(P<0.05)[21]。刘应柯等[26]证明加味小柴胡汤大剂量可增强顺铂诱导的肝癌细胞凋亡,凋亡率为58 %，而小剂量则不甚明显，凋亡率为53 %，而且还通过实验证明小柴胡汤大、小剂量组的抑癌基因Rb、Caspase|3、Bax、wp53扫描值均升高,抑凋亡基因Bcl|2、mp53值均降低。
2.4对血管生成的影响
实体瘤在未有新生血管长入时,其直径大小不超过1～2 mm，一旦肿瘤内出现新生毛细血管并获得进一步生长的能力，肿瘤即迅速生长并发生转移。血管内皮细胞生长因子(VEGF)在血管生成中的作用是最重要的，它在几乎所有的人体肿瘤和肿瘤细胞株中皆有过度表达[27]。
张丰华等[18]检测瘤细胞悬液微血管密度(MVD)和VEGF，得出小柴胡汤3个剂量组对于VEGF都有显著抑制作用(P<0.05)，且在量效关系上呈负相关趋势，有较明显的剂量依赖性。
体外实验中，张巍[21]用ELISA法检测人肺腺癌A549细胞上清液中VEGF含量变化，显示随着肺积宁方浓度的增大，VEGF的表达均下降，与对照组相比，有高度统计意义(P<0.01)。
3 小柴胡汤预防肿瘤的作用
冲田极氏[28]给大鼠投予化学致癌剂后发现,小柴胡汤组大鼠肝细胞未发现癌变,癌前病变增生性结节的形成也受到抑制。冈博子氏[22]通过动物实验也证明了小柴胡汤能够抑制肝硬化向癌变转化。
综上所述，国内外学者采用不同的方法，从不同的角度在小柴胡汤抗肿瘤作用方面做了大量的实验研究工作，并取得了可喜的成绩。但是在小柴胡汤的量效关系问题上，还有很多分歧意见，考虑这与小柴胡汤的用量未统一规范、设定高低浓度组用量的个性化有关。另外，在小柴胡汤抗肿瘤作用的实验中，基因表达方面的报道较少。因此,对小柴胡汤用量规范化的探讨以及更深入的抗肿瘤机制研究将是今后工作的一个重点，有待进一步深入研究，以便更好地为临床服务。相信随着中医药化进程的，对小柴胡汤抗肿瘤作用的实验研究会取得实质性的进展。
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