藏药五脉绿绒蒿不同溶剂提取物镇痛作用的实验研究
【摘要】 目的 通过用4种极性由强到弱的溶剂——水、90 %(v/v)乙醇、氯仿、石油醚(b.r. 30～60 ℃)分别提取五脉绿绒蒿全草，以筛选镇痛活性部位。方法 采用加热回流法提取五脉绿绒蒿，以氢溴酸高乌甲素为中度以上镇痛阳性对照药，利用醋酸致小鼠扭体为指标，研究五脉绿绒蒿不同溶剂提取物的镇痛活性。结果 五脉绿绒蒿的有机溶剂提取物均能明显减少醋酸所致的小鼠扭体次数，乙醇提取物组及石油醚提取物组与空白组比较，有高度统计意义(P<0.01)。结论 五脉绿绒蒿的镇痛活性物质主要存在于乙醇提取物中，其次是石油醚提取物。
【关键词】 绿绒蒿；藏药；提取物；扭体法
绿绒蒿是罂粟科(Papaveraceae)绿绒蒿属(Meconopsis Vig.)植物的统称，集中分布在青藏高原及周边地区[1-3]。在，有关绿绒蒿的记载最早可追溯到藏医古籍《月王药诊》，距今约有1200年的。绿绒蒿属植物是著名的高山欣赏植物，它的美誉“蓝罂粟”“欧洲罂粟”“喜马拉雅罂粟”等已远播亚非欧。随着认识的深入，学者们愈加看重它的药用价值。在传统藏医中，五脉绿绒蒿(M. quintuplinervia Regel)始终被列为绿绒蒿的药用品种，始以花入药，目前也可全株入药。《藏药志》中指出五脉绿绒蒿具有清热解毒、止痛、消炎之功效，可用于头痛、肺炎、肝炎等[4]。绿绒蒿品种繁多，藏药名著《晶珠本草》记载，不同的绿绒蒿针对不同的病症。五脉绿绒蒿作为重要的药用品种之一，镇痛作用尤佳，在30多个藏药配方中均用到。为进一步研究五脉绿绒蒿的镇痛效果，笔者对其进行了活性部位及镇痛作用强弱等方面的探索，以期为临床用药提供实验依据。
1 实验材料
1.1 实验动物
普通级KM小鼠60只，雌雄兼半，体质量(20±2) g，由兰州大学实验动物中心提供，动物许可证号Scxk(甘)20050007。
1.2 实验药品及试剂
五脉绿绒蒿全草购自甘肃省合作市藏，经甘肃省定西市临洮农校卢通宁高级讲师鉴定；实验用五脉绿绒蒿的水、90 %(v/v)乙醇、氯仿、石油醚(b.r. 30～60 ℃)提取液，均相当于原生药1.8 g/mL；镇痛阳性药物氢溴酸高乌甲素，由甘肃新兰药药业有限公司生产，批号080201；其他试剂均为分析纯。
2 实验方法和结果
2.1 不同极性溶剂提取五脉绿绒蒿
2.1.1 水提取物的制备
称取五脉绿绒蒿粗粉100 g，用蒸馏水回流提取2次(第1次700 mL，浸渍12 h，回流1.5 h；第2次300 mL，回流1 h)，滤过，合并滤液，减压回收至20 mL，加90 %乙醇100 mL，以40 %NaOH溶液调pH=8[5]，滤液浓缩成无醇味干浸膏，得10.25 g。
2.1.2 醇提取物的制备
称取五脉绿绒蒿粗粉100 g，用90 %乙醇回流提取2次(第1次700 mL，浸渍12 h，回流1.5 h；第2次300 mL，回流1 h)，滤过，合并滤液，减压回收至20 mL，以40 %NaOH溶液调pH=8[5]，滤液浓缩成无醇味干浸膏，得12.02 g。
2.1.3 氯仿提取物的制备
提取溶剂为氯仿，不调节pH，其他按2.1.2项下操作，得干浸膏2.21 g。
2.1.4 石油醚提取物的制备
提取溶剂为石油醚(b.r. 30～60 ℃)，不调节pH，其他按2.1.2项下操作，得干浸膏0.25 g。
2.2 试药的配制
各浸膏加1 %(v/v)吐温—80研匀，以蒸馏水稀释至相当于原生药1.8 g/mL；空白组为1 %吐温—80水溶液；阳性药加1 %吐温—80至0.071 mg/mL。
2.3 五脉绿绒蒿提取物对醋酸致小鼠扭体的镇痛作用的比较
将60只KM小鼠均衡随机分为6组(空白组、阳性组、水提取物组、乙醇提取物组、氯仿提取物组、石油醚提取物组)，每组10只，分别按表1剂量灌胃0.02 mL/g(各提取物溶液均相当于原生药36 g/kg)。1 h后，每组小鼠均静脉注射0.6 %(v/v)醋酸溶液0.01 mL/g，观察并记录注射醋酸后15 min内各组小鼠第1次出现扭体反应的时间(潜伏期) 及扭体次数。以扭体次数为指标进行组间差异性t检验，并镇痛抑制率[6-7]。结果见表1。
镇痛抑制率(%) =空白组扭体均数-试药组扭体均数空白组扭体均数×100 % 表1五脉绿绒蒿对醋酸致小鼠扭体反应的影响注：与A组比较★P<0.05，★★P<0.01；与B组比较△P<0.05，△△P<0.01；与D组比较▲P<0.05
由表1可以得出以下结论：（1）五脉绿绒蒿的不同溶剂提取物中除水提取物外，均能明显提高小鼠痛阈，其镇痛由强到弱的顺序依次为乙醇提取物、石油醚提取物、氯仿提取物；（2）在五脉绿绒蒿的不同提取物中，乙醇提取物同阳性药氢溴酸高乌甲素的镇痛作用相近，余者皆不及阳性药；（3）各提取物中，石油醚提取物的镇痛作用与乙醇提取物相比较无统计意义，氯仿提取物和水提取物远不及乙醇提取物。因此，可断定五脉绿绒蒿的镇痛活性物质主要存在于醇提取物和石油醚提取物中。
3 讨论
为摒除干扰因素，本实验在提取过程中调节pH值以除去鞣质，防止鞣质对镇痛实验的影响。考虑到阳性药氢溴酸高乌甲素的镇痛作用应用于动物时，对体质并无选择性，但对人体质却有选择性，而五脉绿绒蒿的镇痛作用在临床中得到很好的验证，所以综合评价，五脉绿绒蒿的乙醇提取物的镇痛作用优于氢溴酸高乌甲素。至于五脉绿绒蒿中的镇痛活性成分现在仍是空白，值得进一步深入研究。
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