HSP70和MGMT在乳腺肿瘤中的表达和意义
作者：吴荣薇 薄爱华 王发亮 芦广萍
【摘要】 目的：探讨乳腺肿瘤组织中热休克蛋白HSP70和DNA修复酶O6?甲基鸟嘌呤?DNA甲基转移酶（O6?methyguanine?DNA methytransferase,MGMT）的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学SABC法检测65例乳腺肿瘤组织中HSP70和MGMT的表达情况。结果：乳腺肿瘤中HSP70的阳性率为80.00%（52/65），MGMT的阳性率为60.00%（39/65），二者呈中度相关性（r=0.46）。其中，有淋巴结转移组的阳性率高于无转移组（P<0.05）。结论：HSP70和MGMT的表达率与淋巴结转移情况有关。检测HSP70与MGMT对乳腺肿瘤预后和化疗方案的选择有指导意义。
【关键词】 乳腺肿瘤；HSP70热休克蛋白质类；免疫组织化学
【ABSTRACT】 Objective:To investigate the expression and clinical significance of HSP70 and MGMT in human breast cancer.Methods:The expression of HSP70 and MGMT in the 65 cases with breast cancer was examined by SABC immunohistochemistry.Results:The positive rate of HSP70 was 80.00%(52/65)and the positive rate of MGMT was 60.00%(39/65)in the human breast cancer,and the relationship between HSP70 and MGMT was in the middle degree(r=0.46).The positive rates of HSP70 and MGMT in lymph node metastasis group were higher than that in group without lymph node metastasis(P<0.05).Conclusion:The expressions of HSP70 and MGMT are related with lymph node metastasis,and analyzing them clinically has an important guiding significance in the chemotherapy strategy.
【KEY WORDS】 Breast Neoplasms, HSP70 Heat?Shock Proteins,Immunohistochemistry
近年来，乳腺癌的发病率逐年升高，已成为损害女性健康的主要恶性肿瘤之一。目前，主要以手术切除为主，化疗或放疗为辅。HSP70和MGMT在肿瘤过程中有较大的临床意义，本文通过检测65例乳腺癌患者中HSP70和MGMT的表达情况及相关性，旨在为临床治疗及预后提供有效的指导方案。
1 材料与方法
1.1 一般资料 河北北方学院附属第一2004.7～2007.6月手术切除乳腺癌标本65例，均为女性，年龄为21～72岁，平均年龄为49岁，中位年龄为50岁；左乳36例，右乳29例；浸润性导管癌40例，浸润性小叶癌10例（合称浸润性乳腺癌共计50例），导管原位癌13例，小叶原位癌2例（合称非浸润性乳腺癌共计15例）；有淋巴结转移者32例，无淋巴结转移者33例。
1.2 主要试剂 ①兔抗人HSP70多克隆抗体、兔抗人MGMT多克隆抗体及SABC免疫组织化学试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司。②DAB显色试剂由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。
1.3 方法 常规免疫组织化学SABC方法。严格按照试剂盒说明书要求进行。每次实验均以公司提供的阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判断 HSP70和MGMT的阳性物质均呈棕黄色，分布于癌细胞胞质中，近胞膜处着色深。在光镜视野（×400）下，10个视野平均阳性细胞＞10%为阳性病例，＜10%为阴性病例。
1.5 统计学处理 采用χ2检验。以P＜0.05为组间比较有显著性差异。相关性分析采用四格法，相关系数0.4≤r≤0.7为中度相关。
2 结果
HSP70和MGMT在乳腺癌中的阳性率分别80.00%(52/65)和60.00%(39/65),二者的表达与年龄、病理类型和是否有淋巴结转移的关系见表1，HSP70和MGMT的相关性见表2。2008年6月吴荣薇等：HSP70和MGMT在乳腺肿瘤中的表达和意义第3期2008年6月河北北方学院学报（医学版）第3期表1 HSP70和MGMT在乳腺癌中的表达与生物学特性的关系表2 HSP70和MGMT在乳腺癌中表达的相关性注：HSP70和MGMT呈中度正相关（χ2 =13.48,P<0.01，r=0.46）
3 讨论
3.1 热休克蛋白（HSP）在许多肿瘤中呈高表达[1]，它可以调节多种蛋白质的活性和功能，但又不参与靶细胞的组成。所以我们又将其称为“分子伴侣”或“伴侣蛋白”[2]。结合本研究结果显示乳腺癌中HSP70阳性率很高（80.00%），可以推测HSP70与原癌基因、抑癌基因及其产物相互作用，可保护肿瘤细胞，维持其无限增生的能力。本研究还发现，有淋巴结转移组HSP70的阳性率为65.63%，明显高于无淋巴结转移组（33.33%）。有报告显示，在胃癌中HSP70的表达与转移和浸润深度有关[3]。这就提示我们，HSP70是癌细胞浸袭力较强的标志物之一。由于HSP70携带多种肿瘤抗原，将HSP?抗原肽瘤苗用于免疫机体，抗瘤效果非常好[4]。Casey等[5]从鼠黑色素瘤中提取HSP70?抗原肽，并将其接种到同系小鼠身上，发现该瘤苗对瘤细胞的攻击可产生较强的对抗作用。乳腺癌是HSP70高表达肿瘤，有望从中提取HSP?抗原肽复合物，研制瘤苗用于乳腺癌的。已有研究表明，肝癌术后应用HSP70?抗原肽复合物疫苗能够明显提高病人免疫力，预防术后复发，可提高远期生存率[6]。
3.2 人的MGMT基因定位于10q26,编码的蛋白质由207个氨基酸组成，分子量为22KD。本实验中MGMT在乳腺癌中的阳性率为60.00%(39/65)，其阳性率与年龄及病理类型的相关性不明显，与是否有淋巴结转移呈显著相关（P＜0.05)。据报告[7]，在胃肠癌、卵巢癌和睾丸癌中MGMT均有高表达。MGMT是种高效的DNA直接修复酶，可以保护细胞免受烷化剂损害。烷化剂主要作用于DNA鸟嘌呤G形成O6—mG，后者在DNA复制过程中与T配对，导致G∶C配对转换为A∶T配对，从而导致了肿瘤的发生。而MGMT能把DNA上O6—mG的甲基转换到自身半胱氨酸残基上，从而修复甲基化的DNA，而MGMT修复烷化剂类型的药物可使肿瘤细胞产生耐药。因此，阻断MGMT可明显增加烷化剂的疗效。由此可见，MGMT一方面能够保护正常组织免受烷化剂损伤以及二次癌症的发生，另一方面还能引起肿瘤组织对烷化剂的抗药性。因此，检测癌组织中MGMT的表达对选择化疗药物有指导意义。
3.3 经统计学处理，本实验中HSP70与MGMT相关系数为r=0.46,呈中度正相关，而且二者的表达情况均与是否有淋巴结转移有关。这就提示我们HSP70和MGMT均可作为肿瘤恶性程度的生物学指标。另外可推测，在HSP70高表达的组织中，MGMT的表达也可能增强，提示我们二者可能共同参与了对肿瘤细胞的保护作用，协同促进了乳腺癌的形成。
【】
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2 左东升，薄爱华，常宝,等.热休克蛋白70在人胃腺癌过程中的表达作用及意义[J].老年学杂志,2006，26（2）：166?167
3 王小平，王巧侠，王军,等.人胃癌组织中热休克蛋白70和糖调节蛋白94的表达及其意义[J].肿瘤医学,2007，15（7）：963?965
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5 Casey DG,Lysaght J,James T,et al.Heat shock protein derived from a non?autologous tumor can be used as an anti?tumor vaccine[J].Immunology,2003,110(7):105?111
6 赵子粼，鄢莉，崔建东，等.热休克蛋白抗原肽复合物疫苗预防肝癌术后复发32例[J].第四军医大学学报,2005,26(22):2076?2078
7 Smith SB,Lind,GE,Skotheim RI,et al.Frequent promoter hypemethy lation the O6?methyguanine?DNA methytransferase（MGMT）gene intesticular Cancer[J].Oncogene,2002,21,(57):8878?8889
