不同产地防风中多糖含量比较分析

【摘要】  目的:比较不同产地防风多糖的含量。方法:利用苯酚?硫酸法测定防风多糖的含量。结果:安国的防风多糖含量最高为2.53%，围场的防风多糖含量最低为1.57%。结论:产地不同防风多糖含量不同。

【关键词】  伞形科;防风;中草药；多糖类

    【ABSTRACT】  Objective:To compare polysaccharides contents in Radix Saposhnikoviae from different places.Methods:Detect the Polysaccharides content in Radix Saposhnikoviae  with Phenol?Sulphate colorimetry.Results:The polysaccharides content in Radix Saposhnikoviae from Anguo is the highest with 2.53%,and that of Weichang is the lowest,which is 1.57. Conclusion:Polysaccharides contents of Radix Saposhnikoviae vary according to the different habits.

    【KEY WORDS】  Apiaceae,Saposhnikovia Divaricata,Chinese Herb,Polysaccharides

    防风为伞形科植物防风[Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.]未抽花茎植株的干燥根，入药始见于我国第一部中药专著《神农本草经》，具有解表祛风、胜湿止痉的功能，主要分布在我国的东北、华北等地[1,2]。防风中主要的化学成分有挥发油、色原酮、香豆素、有机酸、多糖等[3]。研究表明防风多糖具有明显的体内抗肿瘤作用[4,5]。本实验利用苯酚?硫酸法测定了不同产地防风的多糖含量，为防风药材的开发应用提供基础数据。

    1  材料与方法

    1.1  一般资料

    1.1.1  仪器

    756紫外可见光分光光度计（上海分析仪器总厂）；真空干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；MP1100B型天平（上海精科天平厂）；分析天平（日本）。

    1.1.2   药品

    无水葡萄糖（药品生物制品检定所）；硫酸（天津化学试剂有限公司）；苯酚（分析纯）；无水乙醇（天津化学试剂有限公司）；三蒸水（实验室自制）；防风药材购自张家口、昌平、安国和围场，经本院中医系马淑兰教授鉴定。防风对照药材购自中国药品生物制品检定所。

    1.2  方法

    1.2.1  样品溶液的制备

    精密称取不同产地已粉碎、真空干燥的防风药材0.50g，加入100mL无水乙醇回流提取2h，以除去单糖及其它醇溶性成分，过滤，滤渣干燥，加入100mL三蒸水回流提取2h，趁热过滤，滤渣再加入100mL三蒸水回流提取2h，合并两次滤液，减压浓缩，12000rpm离心20min，上清液四倍体积无水乙醇沉淀静置过夜，抽滤，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤，真空干燥后在100mL量瓶中以蒸馏水定容，作为样品溶液。

    1.2.2  5.0%苯酚标准液的制备

    取苯酚100 g，加铝片0.1 g和碳酸氢钠0.05 g，常压蒸馏，收集180℃～182℃馏分。称取该馏分5g，置100mL容量瓶中，加三蒸水稀释至刻度，摇匀后滤过至棕色试剂瓶中，得5%苯酚溶液，置4℃冰箱备用。

    1.2.3  葡萄糖标准液的制备

    精密称取105℃真空干燥的葡萄糖标准品50mg，置50mL容量瓶中，加三蒸水定容至刻度，即得1.00mg/mL的葡萄糖标准液。

    1.2.4  标准曲线的绘制

    精确移取葡萄糖标准液10、15、20、25、30、35μL，分别加入990、985、980、975、970、965μL三蒸水，加入5%苯酚溶液500μL，迅速加入浓硫酸2.5mL，静置20min，以试剂空白为参比，在490nm波长下测A值，得回归方程：A=0.061C?0.000，R2=0.997。

    1.2.5  换算因素测定

    精密称取真空干燥至恒重的防风多糖10mg，置于250mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作贮备液。精密吸取贮备液0.3mL按1.2.4项下的方法测定吸光度。另精取葡萄糖标准液0.3mL同法操作，求出防风多糖中的葡萄糖含量。按下式换算因素f。f=2.47（f=多糖含量/多糖溶液中的葡萄糖含量×稀释倍数）。

    1.2.6  精密度实验

    取同一样品溶液，重复测定吸光度6次,RSD为1.06%，结果表明精密度良好。

    1.2.7  重现性实验

    取同一批样品溶液6份，平行测定吸光度，RSD为1.43%，表明重现性良好。

    1.2.8  稳定性实验

    取样品溶液，照样品测定方法操作，每隔1h测定吸光度值，连续8h，结果吸光度基本无变化，表明样品在8h内稳定性良好。

    1.2.9  加样回收率实验

    分别精密吸取对照品溶液10、15、20、25、30μL，各加入样品溶液10μL，按照样品测定方法测定吸光度，代入回归方程，结果平均回收率为98.65%。RSD=1.47%。

    1.2.10  样品含量测定

    精取防风多糖样品液1.5mL按1.2.4项下操作，测定吸光度，按下列公式计算样品中的多糖含量，重复5次，取平均值。

    多糖含量（%）=C×D×f×V/W×100%

    C：供试品中葡萄糖浓度(μg/mL)，D：供试品的稀释因素，f：换算因素，V：供试品体积（mL），W：供试品的重量（μg）

    2  结果

    不同产地的防风药材按1.2.1项下制备样品溶液，按1.2.10项下测定含量，结果见表1。

    2008年6月刘  华等：不同产地防风中多糖含量比较分析第3期2008年6月河北北方学院学报（医学版）第3期表1  不同产地防风中多糖的含量(n=5)

    样品号产 地多糖含量（%）RSD（%）1昌平2.142.072张家口1.770.963围场1.571.434安国2.531.625对照药材2.611.54

    3  讨论

    3.1  不同产地防风药材中均含有多糖，对照药材防风多糖含量为2.61%，安国的防风多糖含量最高为2.53%，围场的防风多糖含量最少为1.57%，可能与药材的产地、采摘时间有关。

    3.2  中药多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血脂、保肝等多种功能[6～9]，其中中药多糖的免疫调节活性及抗肿瘤作用倍受关注，是中药多糖研究的中心课题。本实验用苯酚?硫酸法测定了防风中的多糖含量，为防风的进一步开发利用提供。

【参考】
  1 黄泰康.常用中药成分与药理手册[M].北京:医药科技出版社,1994.905

2 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学出版社,2005.102

3 张宝娣,万山红.防风的化学成分与药理研究近况[J].中医药信息,2003,20(4):23

4 周勇,马学清,张丽,等.防风多糖JBO?6体内对小鼠免疫功能的影响及抗肿瘤作用[J].北京中医药大学学报,1996,19(4):25?27

5 李莉,周勇,张丽,等.防风多糖增强巨噬细胞抗肿瘤作用的实验研究[J].北京中医药大学学报,1999,22(3):38?40

6 郑应馨,徐恒卫.具有抗肿瘤活性的多糖及其作用机理研究[J].中国药师,2003,6(6):368?369

7 陶喆,程建明.中药多糖抗肿瘤机制探讨[J].江苏中医药,2003,24(6):47?49

8 刘景田,党小军,王惠萍,等.中药多糖对红细胞膜相CD35免疫活性调节作用[J].中国医学杂志,2002,12(1):7

9 郑敏,工亚平.中药多糖抗肿瘤的药研究进展[J].国外医学中医中药分册,2000,22(5):259?263