建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法

【关键词】  21味寒水石散；,,没食子酸；,,含量测定；,,高效液相色谱法

　　摘要：目的建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定21味寒水石散中没食子酸的含量，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇水（5∶95）为流动相，检测波长为274 nm。结果线性范围0.020 6～0.247 2 μg，平均回收率为99.1%，RSD=1.3% (n=9)。结论该方法简便、准确，提供了21味寒水石散中没食子酸的质量控制方法。

　　关键词：21味寒水石散；  没食子酸；  含量测定；  高效液相色谱法   
　　21味寒水石散为一藏药，藏药名为“木布玉杰日布”。主要有寒水石（奶制）、诃子、余甘子、藏木香、木香、木瓜等21味药材组成，具有制酸，止痛之功效。主要用于培根木布引起的呕吐酸水，胃部刺痛，大便干燥等症［1］。没食子酸又称五倍子酸，在藏药材诃子、毛诃子、余甘子等中含量丰富，其在21味寒水石散中的含量测定未见报道。没食子酸含量测定方法有光谱法［2］、比色法［3］、薄层色谱(TLC)［4］和HPLC法［5］等，本文采用高效液相色谱(HPLC)法，制定出该制剂中没食子酸的含量测定方法。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器Agilent 1100型高效液相色谱仪，DAD检测器，Agilent 1100色谱工作站；Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特仪器有限公司）色谱柱；KQ3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；TG328A电光分析天平（上海天平仪器厂）。

　　1.2  试药甲醇（色谱纯）；没食子酸对照品（由科学院西北高原生物研究所胡凤祖副研究员提供，经归一化检测，含量大于99％）；21味寒水石散（青海藏）。

　　2  方法与结果

　　2.1  对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成20.6 μg/ml的对照品溶液。

　　2.2  供试品溶液的制备精密称取样品2.0 g，精密加入甲醇100 ml，称定重量，超声提取1 h，放冷，用甲醇补足减失的重量，过滤，弃去初滤液，续滤液过0.45 μm滤膜，即得供试品溶液。

　　2.3  空白样品溶液的制备将处方中含没食子酸的药材如诃子、余甘子等去除后，按供试品溶液的制备方法制备。

　　2.4  色谱条件  色谱柱：Kromasil C18柱；流动相：甲醇水（5∶95）；流速：1.0 ml/min；检测波长：274 nm；柱温：30℃；进样量：5 μl。在此条件下，没食子酸与其它峰分离效果较好，样品与对照品在同一保留时间有相同的波峰出现，而空白溶液则无相应的峰，证明空白样品不干扰，含量测定专属。结果见图1~3。

　　2.5  线性关系实验精密吸取对照品溶液1，3，6，10，12，15，18 μl进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，没食子酸进样量（μg）为横坐标，回归方程为：Y＝9 219X+6.051，相关系数r＝0.999 7。结果表明，没食子酸在0.020 6～0.247 2 μg之间呈良好的线性。

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　　2.6  精密度实验取对照品溶液5 μl，重复进样6次，根据测得的峰面积积分值，RSD为1.0％。

　　图1  对照品HPLC色谱图(1.没食子酸) (略)

　　图2  样品HPLC色谱图(1.没食子酸)(略)

　　2.7  重复性实验精密称取样品2.0 g，共6份，按2.2所述方法处理，按上述色谱条件进样测定，结果重现性良好，样品中没食子酸含量的RSD为1.9％。

　　2.8  稳定性实验 按2.2所述方法处理样品1份，按上述色谱条件测定，间隔2 h/次，结果12 h内稳定性良好。

　　图3  空白样品HPLC色谱图(略)

　　2.9  回收率实验 取样品约2.0 g（n=9），精密称定，加入一定量的没食子酸对照品。按2.2所述方法处理并依法测定，计算回收率结果。见表1。

　　表1  回收率实验结果(略)

　　2.10  样品测定取3批成药样品，按2.2所述方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件进行分析，按外标法以峰面积积分值，求得样品中没食子酸的含量（每批样品测3次取平均值）分别为0.074％、0.073％和0.073％。

　　3  讨论

　　3.1  检测波长确定  对没食子酸对照品溶液在200～400 nm范围内进行扫描，测得其在220 nm和274 nm有最大吸收，比较相同条件下样品于220 nm和274 nm波长下的色谱图，检测波长为274 nm的色谱图，分离效果好，且杂质干扰少，因此，采用274 nm为检测波长。

　　3.2  提取方法确定  比较了不同提取方法对提取率的影响，考虑提取时间和方法的简便性，采用超声1 h提取。

　　3.3  流动相选择   以甲醇水系统为流动相进样色谱分析，经试验研究表明，甲醇水比例为5∶95时，样品峰不拖尾，分离较好。

　　3.4  本法测定藏药21味寒水石散中没食子酸的含量，分离度好，具有简便、快速、重现性好等优点。可作为21味寒水石散中没食子酸含量测定的常规方法。

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　　［1］  中华人民共和国卫生部药典委员会. 卫生部药品标准・藏药，第1册［S］.1995：139.

　　［2］  沙东旭，徐缓绪.叶下珠化学成分的研究［J］.沈阳药科大学学报，2000，17（3）：176.

　　［3］  熊皓平，杨伟丽，张友胜，等.显齿蛇葡萄多酚含量测定方法的比较研究［J］.湖南农业大学学报，2001，27（5）：381.

　　［4］  李爱群，蔡葵花，林  励.薄层色谱法测定利喉乐含片中没食子酸的含量［J］.分析测试学报，1999，18（1）：64.

　　［5］  胡晓伟，宋旭峰.RPHPLC法测定柿蒂中没食子酸的含量［J］.药事，2003，17（6）：371.