观察护肝解毒冲剂的抗肝损伤作用

【关键词】  护肝解毒冲剂,；,,,大鼠,,；,,肝损伤

　　摘要：目的观察护肝解毒冲剂的抗肝损伤作用。方法用D半乳糖胺（DGaLN）复制急性肝损伤模型；采用四氯化碳（CCl4）诱导慢性肝损伤模型。实验结束时分别取血测ALT，AST活性和总蛋白（TP），白蛋白（ALB），白/球比例（A/G），透明质酸（HA），同时均取肝组织做病理检查。结果急性肝损伤时，护肝解毒冲剂能降低ALT，AST活性及减轻肝细胞坏死及炎细胞浸润；慢性肝损伤时， 其能降低ALT，AST和HA，升高TP，ALB和A/G，并减轻肝细胞变性，减少纤维组织增生。结论护肝解毒冲剂对大鼠DGaLN 所致急性肝损伤和CCl4所致慢性肝损伤均具有保护作用。

　　关键词：护肝解毒冲剂 ；   大鼠  ；  肝损伤
　　护肝解毒冲剂是由茵陈、栀子、大黄（制）、白术、云苓、白花蛇舌草、金钱草、蚤休、赤芍、丹参、郁金等组成,具有清热解毒退黄、凉血活血及健脾作用，是慢性活动性乙型肝炎的纯中药制剂，为我国“八五”攻关研究第三类新药，为了观察护肝解毒冲剂的主要药效，本实验研究其对DGaLN 所致急性肝损伤和CCl4所致慢性肝损伤的作用。现报道如下.

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  药品护肝解毒冲剂（HGCJ），10 g/包，含原生药18.3 g,由泸州医学院HGCJ课题组、泸州医学院药物研究所共同研制，批号930405。复肝康冲剂（FGK）：10 g/包，批号930513，辽宁省中医药研究所制药厂生产。实验时均用蒸馏水配成所需浓度口服液。DGaLN：批号940504。由重庆医科大学生物化学教研室提供，使用时用0.9%生理盐水配成10%溶液。CCl4，由重庆化学试剂总厂生产，批号920512，临用时溶于植物油中，配成10%的CCl4溶液。

　　1.1.2  动物SD雄性大鼠140只，体重150~180 g，一级标准，川实动管第85号1993合格，由华西医科大学实验动物中心提供。

　　1.2  方法

　　1.2.1  方法急性肝损伤实验是将80只大鼠随机分成6组，即空白对照组、模型组、HGCJ大、中、小剂量组（HGCJⅠ，HGCJⅡ，HGCJⅢ）,复肝康阳性对照组（FGK）。HGCJⅠ，HGCJⅡ，HGCJⅢ组分别以44，22，11 g（生药）・kg1・d1(相当于临床用量的13.36，6.68，3.34倍)灌胃1次，复肝康阳性对照组同时以复肝康冲剂3.51g（生药）・kg1・d1 (相当于临床用量的3.34倍) 灌胃1次,正常对照组和模型组定时以等容积生理盐水灌胃1次。连续给药7 d，实验期间动物正常饮水，以标准颗粒饲料喂养。在第5天下午，对HGCJ治疗各组、模型组和阳性对照组给予DGaLN 600 mg・kg1腹腔注射1次［1］，正常对照组用生理盐水腹腔注射1次，注射前禁食12 h，注射后观察动物的一般情况并继续禁食。于48 h后每组取10只大鼠处死，取血检查ALT，AST，并取肝组织作病理切片检查。慢性肝损伤实验［2］是将60大鼠随机分成4组，即正常对照组、模型组、HGCJ大、小剂量（（HGCJⅠ、HGCJⅡ）组。HGCJⅠ，HGCJⅡ分别为44 ，11 g（生药）・kg1・d1(相当于临床用量的13.36，3.34倍)。按常规饲养。模型组及HGCJⅠ，HGCJⅡ组于实验开始时即皮下注射10% CCl4油剂5 ml・kg1，2次/周，连续3个月。于皮下注射10% CCl4 第2个月起用HGCJ灌胃给药，同时正常对照组和模型组给予等容量的生理盐水灌胃，均为1次/d，连续2个月，其间观察动物的一般状况，于末次给药24 h后每组取10只大鼠断颈取血，测ALT，AST，TP，ALB，A/G和HA。每只大鼠取同一部位的肝脏一块固定于10%福尔马林溶液做病理切片。

　　1.2.2  统计学处理资料的统计分析采用 ±s表示，组间差异进行t检验。

　　2  结果

　　2.1   一般状况注射DGaLN 8 h后，模型组大鼠出现精神萎靡，被毛蓬松，治疗组情况稍好。皮下注射10% CCl4，模型组大鼠于第7周开始出现精神萎靡、背躬、被毛蓬松，并开始出现死亡，解剖可见腹腔积液，早期死亡者可见肝脏花斑样改变，晚期死亡者肝色苍白、质硬，死前肛周潮湿，体形消瘦。治疗组症状有所改善，死亡动物数减少。

　　2.2  HGCJ对DGaLN急性肝损伤大鼠血清中ALT，AST水平的影响结果见表1。

　　表1  HGCJ对大鼠急性肝损伤ACT，AST的影响（略）

　　与对照组比较,1）P<0.01;与模型组比较,2）P<0.05,3）P<0.01, n=10

　　2.3  HGCJ对四氯化碳慢性肝损伤肝生化指标和血清肝纤维化指标透明质酸HA的影响结果见表2。

　　表2  HGCJ对慢性肝损伤对肝生化指标和透明质酸HA的影响（略）

　　与对照组比较,1）P<0.01,* P<0.05；与模型组比较，2）P<0.01,n=10

　　2.4  肝脏病理改变按毒理病理要求，对各组大鼠肝脏进行13项指标即肝细胞胞浆疏松化、浊肿、脂肪变、水变性、嗜酸性变、坏死、炎细胞浸润、枯否氏细胞增生、淤血、出血、肝细胞增生、结缔组织增生、早期假小叶形成等全面观察。急性肝损伤实验中空白对照组肝组织结构清楚，肝细胞无变性、坏死、出血。模型组全部大鼠均有肝细胞坏死及炎细胞浸润，且均较其余实验组重。复肝康组肝细胞胞浆疏松化、脂肪变性、水变性比HGCJ各剂量组重，HGCJ大剂量组肝细胞胞浆疏松化比中、小剂量组少，且无脂肪变性。慢性肝损伤实验模型组肝脏肉眼观呈浅灰色、质地变硬，镜下见肝细胞变性如胞浆疏松化、脂肪变、水变性等严重，74%病例结缔组织增生，有早期肝硬变倾向；二剂量组肝细胞变性比模型组明显减轻，只有11%~15%病例有结缔组织增生，未见有早期肝硬变改变，大剂量组病变更轻。

　　3  讨论

　　DGaLN是肝细胞的磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂，可造成肝弥漫性坏死和炎症，与临床上病毒性肝炎的肝脏病理变化相似。当DGaLN进入体内后与磷酸尿苷UDP结合形成UDPD半乳糖胺，致使磷酸尿苷耗竭，从而使依赖其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物质合成受抑制，限制了细胞器及酶的生成和补充，使肝细胞受损［1~3］。本实验模型组ALT，AST明显增高，与空白对照组比较P<0.01。由于ALT主要存在于肝细胞浆中，AST存在于肝细胞胞浆和线粒体中，肝细胞细胞膜通透性增加或破损，胞浆内ALT，AST释放入血，使血清中二者均升高；血清ALT水平的高低可灵敏反映肝细胞变性、坏死的程度，因其大部分存在于胞浆中。说明模型复制是成功的。HGCJ中、大剂量组的ALT，AST与模型组比较明显降低（P<0.01），且病理检查的结果显示，HGCJ各治疗组能减轻病理损伤如肝细胞坏死及炎细胞浸润，表明HGCJ能减轻DGaLN的肝损伤作用。CCl4为常用的肝纤维化动物模型化学诱生剂，其所致肝纤维化改变与人类肝纤维化的形态特征相似，比较适合于肝纤维化特别是有活动性病变的慢性肝病所致肝纤维化的防治作用及其作用机制的研究。CCl4对肝毒性损伤主要是由于经肝细胞微粒体细胞色素代谢裂解成三氯甲基自由基（CCl3），CCl3可进一步氧化反应形成具有更强反应活性的基团，从而产生脂质过氧化作用，破坏肝细胞的膜性结构［4，5］。此损伤不断反复，继之有肝细胞坏死、炎症激活肝脏内Kupffer细胞、内皮细胞等，使其释放各种细胞因子，细胞因子进一步激活静息状态的星状细胞（HSC），使之转化为肌成纤维样细胞（MFBLC），MFBLC过度增殖，同时大量合成各种细胞外基质（ECM），ECM过度沉积而导致肝纤维化［6］。由于此模型的死亡率高，故于造模开始时的动物数应多增加些。CCl4所致慢性肝损伤时ALT，AST，HA均升高，TP，ALB，A/G均降低。肝纤维化时，肝间质成纤维细胞增生，合成HA增加，肝内细胞受损，对血液中HA的摄取及降解障碍，导致HA升高。而肝细胞是合成蛋白质场所，肝细胞受损时合成蛋白质功能降低，血中白蛋白降低，但肝细胞同时激活肝免疫系统，使球蛋白合成增加，故A/G降低。HGCJ两个剂量组能降低ALT，AST，HA，同时升高TP，ALB，A/G比例，且能减轻肝细胞变性，减少结缔组织的形成，提示HGCJ能减轻CCl4对肝脏的慢性损伤，对肝纤维化的形成有防治作用。实验结果表明，HGCJ具有保护肝细胞膜，降低ALT，AST活性,从而保护肝脏；能减少HA的含量，减轻细胞外基质的过度沉积，从而对肝纤维化产生防治作用。