抗毒复明滴眼液的急性毒性与眼部刺激试验研究

                          作者：林琪玲 李明东 周旌 李映红 陈茵

【摘要】  目的：评估中药科研制剂抗毒复明滴眼液的急性毒性与眼的刺激反应。方法：以最大耐受量法（40 mL/kg，共 3 次）观察抗毒复明滴眼液对对小鼠的不良反应；并与生理盐水对照，观察常规 7 d 对兔眼的刺激情况。结果：抗毒复明滴眼液对兔及小鼠都未发生全身和局部不良反应。结论：抗毒复明滴眼液安全性大，而且无局部刺激性。

【关键词】  实验性单纯疱疹性角膜炎；抗毒复明滴眼液；毒理试验

    〔Abstract〕 Objective  To  evaluate  the  acute  toxicity  and  the  eye  irritating  reaction  of  herbal  eye  drop  of Kangdufuming.  Methods   Using  the  maximal  tolerance  dose  method  to  evaluate  the  acute  toxicity  in  mice;  observing  the  irritating  eye  reaction  by  treating  the  rabbit  eyes  7  days.  Results   No  general  and  local  side  effects  occurred  both  in  rabbits  and  mice.    Conclusion     The  Kangdufuming  eye  drop  are  safety  and no  irritating  reaction.

    〔Key  Words〕    Kangdufuming  eye  drop;  Acute  toxicity  test;  Irritating  reaction

    　　单纯疱疹性角膜炎（herpes simplex keratitis, HSK）是公认的首位炎症性致盲性眼病，近年来由于抗生素、皮质类固醇及其他免疫抑制剂的广泛应用，其发病率有逐年上升趋势[1-3]。由于 HSK 病情顽固，易于复发，严重影响视功能，已成为眼科临床的棘手问题，因而受到学者们的重视和关注。对 HSK 的治疗，无论是化学药物还是手术都有较高的复发率，甚是棘手[4-6]。中西医结合和中药治疗本病具有潜在的优势[7-8]。观察是我们筛选研制的治疗本病的中药科研制剂，本研究旨在观察抗毒复明滴眼液急性毒性和对眼的刺激反应，为其安全性评价和临床应用提供实验依据。

    1    抗毒复明滴眼液的急性毒性试验和最大耐受剂量测定

    1.1    材料

    1.1.1    实验动物    选用鼠龄为 4~6 周 Balb/c 小鼠 20 只（中山大学实验动物中心提供），体重 16~18 g，清洁级，雌雄各半。

    1.1.2    药物    抗毒复明滴眼液为自制科研制剂：取大青叶、贯众、虎仗、决明子等经生药鉴定后，清水洗净，再用纯净水洗 2 次，然后用纯净水浸泡 30 min，煎煮 2 次，收集馏液；合并 2 次煎煮液过滤，馏液加入滤液，过滤，调 pH 值，分装于 8 mL 的眼药瓶中，每 mL 相当于生药材 1.83 g。100℃灭菌 30 min，置 4℃ 储存备用。

    1.2    实验方法

    Balb/c 小鼠禁食 16 h 后，灌胃给予抗毒复明滴眼液每 1 kg 体重 40 mL，每隔 5 h 同样剂量灌胃给药 1 次，共 3 次，总剂量为每 1 kg 体重 120 mL，相当于生药 20.88 g/kg。观察给药后小鼠的毒性反应，包括：一般症状、外观、毛色、大小便、摄食情况、自主活动等，以及 7 d 内的死亡情况，并于给药第 7 天称重。

    1.3    实验结果

    小鼠给药后自主活动、毛色、外观、摄食均正常，首次给药 5 h 左右可见大便颜色加深，24 h 后恢复正常，其他未见异常反应。在 7 d 的观察期内末见有小鼠死亡，雌雄小鼠的体重均略有增长。见表 1。

    1.4    结论

    小鼠口服抗毒复明滴眼液 40 mL/kg，共 3 次，无明显的毒性反应，7 d 内无小鼠死亡。表明热毒清滴眼液的小鼠最大耐受剂量大于 120 mL/kg，相当于生药 219.6 g/ kg。说明该药安全无毒。

    2    抗毒复明滴眼液眼刺激性试验

    2.1    材料

    2.1.1    动物    家兔，新西兰种，雄性，体重 2.1~2.8 kg，双眼正常，购自中山大学实验动物中心。

    2.1.2    药物    抗毒复明滴眼液为自制科研制剂：取大青叶、贯众、虎仗、决明子等经生药鉴定后，清水洗净，再用纯净水洗 2 次，然后用纯净水浸泡 30 min，煎煮 2 次，收集馏液；合并 2 次煎煮液过滤，馏液加入滤液，过滤，调 pH 值，分装于 8 mL 的眼药瓶中，每 mL 相当于生药材 1.83 g。100℃灭菌 30 min，置 4℃ 储存备用。

    2.2    方法

    2.2.1    家兔 4 只，分别在一侧眼睛滴人热毒清滴眼液 0.1 mL，被动闭合 10 s，在另一侧滴人生理盐水 0.1 mL 作为对照，每天上下午各 1 次，连续 7 d。实验第 2 天起每日给药前观察角膜、结膜等部位的刺激反应，直至停药后 l 周。

    2.2.2    按《中药新产品开发学》[9]的方法进行评分，换算成刺激反应等级。

    2.3    结果

    给予抗毒复明滴眼液的 4 只兔眼未出现明显的刺激反应：结膜无充血、无水肿、无分泌物；角膜无混浊；虹膜正常。根据《指南》反应分级均为 0 级。

    2.3    结论

    抗毒复明滴眼液每天 2 次，每次 0.1 mL 给家兔滴眼，连续 7 d，未出现眼刺激症状，眼刺激综合半均分值为 0 分。可见抗毒复明滴眼液多次给药无明显的刺激反应。

    3    讨    论

    目前，无环鸟苷仍然是是一种较安全首选的 HSK 的药物。该药竞争性地抑制 HSV-I，对浅层性 HSK 和深层型 HSK 均有效,。但是无环鸟苷尚存在一些缺陷：口服只有 15%~30% 生物利用度；部应可引起滤泡性结膜炎、浅点状角膜炎、假树枝状角膜炎等等，还偶见有引起急性肾功能衰竭和神经毒性报道；对无环鸟苷耐药的毒株出现增多，对此目前也只能加强耐药性的监测，还没有针对性的处理办法[4-6]。本急性毒性试验还可以看出，抗毒复明滴眼液没有明显的不良反应，说明中药天然药物抗病毒的特点和优势。

    滴眼液的刺激性与 pH 值、渗透压 、溶解度等因素有关。滴眼液的刺激性较大时，由于局部刺激，使泪液分泌增多，泪液将药物浓度稀释，直接流出眼外，并通过泪道进入鼻腔或口腔，从而影响药物的吸收利用，降低药效。角膜的感觉神经丰富，密度是皮肤的 300 倍，感染 HSV -Ⅰ后，角膜上皮层、基质层出现浸润及溃疡病灶。病变部位的角膜知觉减退或消失，但其周围角膜知觉的敏感度可相对增强，因此对滴跟液的刺激性感受更加敏感。本研究结果，抗毒复明滴眼液对实验家兔眼睛无刺激性，不引起畏光流泪，结膜红肿、分泌物增加、角膜混浊等病变。

    由于治疗 HSK 主要用抗病毒药，但疗效能与抗病毒西药相比的中药制剂尚较少[7-11]。本实验研究证明了抗毒复明滴眼液用药的安全性，而且无眼部局部刺激，为该药的进一步深入研究和推广应用提供了的实验依据。

【】
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〔8〕 高殿文. 双黄连滴眼液治疗单纯疱疹性角膜炎疗效观察. 中国中西医结合杂志, 2003, 23(9):711

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