天合保肾合剂治疗大鼠糖尿病肾病实验研究

        作者：严仲庆 何敏尔 张菁 范铧 沈伟钢 朱声宏 胡松春　杜洪乔 章国琳 郑凯 赵玉娟 

【摘要】  目的：观察天合保肾合剂对糖尿病大鼠肾脏损害的作用。方法：大鼠经背部切除肾，2周后以链尿佐菌素(STZ)尾静脉注射诱导糖尿病肾病的大鼠模型。设正常组、模型组、卡托普利组及天合保肾合剂高、中、低剂量组。8周后检测血糖、胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、糖化血红蛋白及肾组织病理检查。结果：与模型组相比，天合保肾合剂治疗组血糖、血脂、血肌酐、尿素氮、24小时尿蛋白量以及肾质量指数均有明显下降，病检显示肾小球、肾小管病变明显减轻。结论：天合保肾合剂对大鼠糖尿病肾病肾损伤有明显的保护与治疗作用。

【关键词】  糖尿病肾病 大鼠 天合保肾合剂

天合保肾合剂是我院中西医结合肾病中心研制的纯中药制剂，经多年临床观察表明，该方不但能降低血糖、血脂、减少尿蛋白的排泄，还能明显降低血肌酐、尿素氮，延缓糖尿病肾病的进展。本实验旨在通过糖尿病动物模型探讨该方对糖尿病大鼠肾损害的保护与治疗作用。

　　1  材料与方法

　　1．1  动物 

　　选用纯系雄性SD大鼠，体重200～250g，共122只（由浙江中医药大学动物实验中心提供)。

　　1．2 药品与试剂 

　　天合保肾合剂（主要药物组成：柴胡、半枝莲、生黄芪、附子、黄芩、海藻、地鳖虫、黄连、土茯苓、水蛭，水煎浓缩，每1ml含生药1．5g，药材购于胡庆余堂药店）；卡托普利片（浙江得恩德制药有限公司，批号0608115）；STZ（sigma公司）；肝素钠注射液（江苏万邦生化医药股份有限公司，批号：0607117）。

　　1．3 主要仪器 

　　TGL-16G变速离心机（湖南星科仪器有限公司）；酶标仪(RS-232C)；精密天平(AR2130型奥豪斯国际贸易有限公司）;HR-231CRT冷藏冷冰箱（杭州华日电冰箱有限公司）；BT815A半自动生化仪（上海三科仪器有限公司）。

　　1．4 动物模型制作 

　　大鼠腹腔注射3％戊巴比妥钠进行麻醉，经背部切口切除右肾后缝合伤口，连续3天肌肉注射青霉素钠。14天后将大鼠禁食16小时，正常组注射等量枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，其余各组大鼠尾静脉一次性注射STZ 55mg／kg，建立动物模型。5天后大鼠眼眶静脉丛采血测血糖，血糖大于16．7mmol/L为造模成功。

　　1．5 分组与给药 

　　糖尿病模型大鼠随机分为五组，模型组30只，天合保肾合剂高、中、低(25g／kg、15g/kg、9g／kg)剂量组、卡托普利(50mg/kg）组各20只，另设正常组12只。造模成功血糖稳定后，每组每天灌胃相应药物1次，连续给药8周，模型组和正常组均给等量的生理盐水。

　　1．6 标本采集 

　　大鼠给药8周，于处死前1天放入代谢笼，禁食12小时，收集24小时尿液。3％戊巴比妥钠40mg／kg腹腔注射，腹主动脉取血。随后取肾做病理检查。

    测定各组大鼠血糖、血胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、糖化血红蛋白、血肌酐、尿素氮、24小时尿蛋白量。
   
　　应用病理图文分析系统光镜下测定肾小球平均截面积，肾小球硬化指数、肾质量指数、肾重／体重(RW／BW）。

　　1．7 统计学方法 

　　各组数据均以（±s）表示，应用SPSS11．5软件，多组间比较用方差分析，P<0．05差异有显著性意义。

　　2 结 果 

　　2．1 对大鼠血糖、血脂的影响 

　　模型组大鼠血糖、胆固醇、甘油三酯、糖化血红蛋白均升高，高密度脂蛋白含量下降。天合保肾合剂高、中、低剂量组血糖、胆固醇、甘油三酯、糖化血红蛋白水平明显降低，高密度脂蛋白含量升高。且天合保肾合剂中、高剂量组在血糖、血脂调节上较卡托普利有更明显效果，见表1。表1  各组血糖、血脂比较（略）

　　2.2 对大鼠肾功能的影响

　　模型组血肌酐、尿素氮、24小时尿蛋白、肾质量指数都明显升高，天合保肾合剂高、中、低剂量组大鼠中相应各指标都有不同程度的下降。天合保肾合剂中、高剂量对肾功能保护作用均较卡托普利明显，见表2。表2  各组肾功能比较（略）

　　2．3  肾光镜病理检查结果 

　　模型组肾小球灶性系膜区增宽明显，系膜细胞轻度增生;肾小管灶性扩张，肾小管透明变明显，肾小管上皮细胞浆疏松化。肾小管增生(区域性)或纤维细胞增生明显，间质淋巴细胞浸润。卡托普利组肾小球灶性系膜区增宽程度略减轻，系膜细胞增生不明显，肾小管灶性扩张略减轻，肾小管透明变相对较少，间质成纤维细胞增生不明显，无明显淋巴细胞浸润。天合保肾合剂低剂量组肾小球灶性系膜区增宽程度减轻，系膜细胞增生不明显，肾小管灶性扩张减轻，但肾小管透明变较明显。间质成纤维细胞增生不明显，无明显淋巴细胞浸润。天合保肾合剂中剂量组肾小球灶性系膜区增宽程度减轻，系膜细胞增生不明显，但肾小管透明变较少，间质成纤维细胞增生不明显，无淋巴细胞浸润。天合保肾合剂高剂量组肾小球系膜区增宽程度明显减轻，肾小管透明变略减轻，肾小管上皮细胞胞浆疏松化，间质成纤维细胞增生不明显，无淋巴细胞浸润。正常组肾小球、肾小管结构清晰，肾小球内细胞清晰可见，肾小管上皮细胞排列整齐，胞浆红润，见图1～6。

　　3 讨论

    DN是糖尿病最常见的微血管并发症之一，临床以蛋白尿、肾功能减退为主要表现，后期可出现肾功能衰竭，是终未期肾病的主要病因。STZ糖尿病大鼠是目前国际上普遍采用的研究DN的动物模型。

    笔者在长期的临床实践中发现，DN患者进入临床期后，往往会出现尿少、尿浊、水肿、倦怠、乏力、腹胀、畏寒，甚至面色灰暗、头目晕眩、恶心呕吐等症状，呈现出气阴两虚或阴阳两虚，特别是脾肾阳虚为主，兼夹湿热、痰浊、水湿、瘀血互阻，直至最终出现犯胃、凌心、逆肺的危候。其次，因为本病是一种难治性慢性病，除了中医传统认识的久病多湿、久病多虚、久病多瘀、久病入络外，还存在着久病多郁、因郁致瘀、因郁致湿、因郁致痰、因郁致浊、因郁致虚的病机变化，而表现为情绪低落、心情抑郁及厌倦、恶药等多种心理状态，同时还伴有胸闷胁痛、脘痞腹胀、嗳气太息、呃逆矢气等气机不畅与阻滞症状。如果在补脾肾基础上配合清热解毒、化痰泄浊、活血通络、疏郁散结的药物，常能较好地改善症状，阻止病情，防止病情恶化，并可能使一部分患者的肾功能明显改善。天合保肾合剂主要由黄芪、附子、黄连、黄芩、半支莲、土茯苓、海藻、水蛭、地鳖虫、柴胡等组成。方中黄芪补气升阳，有益卫固表、利水消肿之功；附子温肾中之阳，补水中之火；两者相伍，补肾气、振元阳、通三焦、达内外，使精能藏，水有主，而恢复津液代谢之职。黄连、黄芩清热解毒祛湿，半枝莲清热解毒利湿，土茯苓解毒除湿，海藻消痰软坚，利水消肿。水蛭有破血逐瘀、散结消肿之功，地鳖虫破血逐瘀、续筋接骨，两者均是逐瘀通络之要药。柴胡是疏肝解郁之要药，《神农本草经》谓其“主心腹肠胃积气，饮食积聚，寒热邪气，推陈致新”。研究，柴胡能够保肝利胆，促进胃肠功能，改善心血管系统，并有稳定细胞膜作用，有助于维持肾小球上皮细胞、内皮细胞功能和肾小球基底膜的完整性，改善肾小球基底膜滤过作用，减轻蛋白尿。本组结果显示，以温补脾肾配合清热解毒、化痰泄浊、疏郁通络的天合保肾合剂对大鼠糖尿病肾病有较好的防治作用。