葛根素注射液对去卵巢大鼠雌激素样作用的研究

【摘要】  目的：观察葛根素注射液对去卵巢大鼠血清雌二醇(E2)水平的影响。方法：大鼠50只，分为葛根素高剂量组、葛根素低剂量组、倍美力组、模型组、假手术组，每组10只。除假手术组外，均摘除大鼠卵巢造成去势模型。造模后第7天，检测大鼠血清E2水平，确定造模成功后，相应予葛根素注射液、倍美力水溶液、生理盐水灌胃。各组用药后30天测血E2含量。结果：用药30天后，模型组大鼠血清E2水平明显低于其它四组，差异有显著性意义(P<0.01)。结论：葛根素注射液可以提高去卵巢大鼠血清E2水平，具有雌激素样作用。

【关键词】  大 鼠 围绝经期 葛根素注射液 雌激素样作用

　　Abstract Objective:To investigate the effect of puerarin injection on serum estradiol in female rats with ovary removed.Methods:SD rats were divided to high?dose puerarin group, low?dose puerarin group, premarin group, control group, and sham operation group, 10 rats in each.Ovariectomized model was established in all groups except sham operation group (a successful model was identified by detecting the level of estradiol on the 7th postoperative day).The level of estradiol was determined on the 30th day after administration of puerarin injection, premarin solution, and saline, respectively.Results:The level of estradiol was significantly lower in the control group compared to other 4 groups (P<0.01).Conclusion:Puerarin injection has estrogen?like effect by increasing the serum level of estradiol in ovariectomized rats.

　　Key words rat perimenopause puerarin injection estrogen?like effect

　　围绝经期综合征是指妇女在围绝经期过程中，由于卵巢功能衰退，体内雌激素水平降低导致神经?内分泌系统功能失调，引起植物神经功能紊乱和精神神经症状等一系列临床症候群。雌激素替代疗法(ERT)是目前临床上妇女围绝经期综合征的经典方法。但长期使用雌激素可能增加乳腺癌及子宫内膜癌的风险，即使与孕激素合用也不能完全消除这种危险[1]。因此寻找一种理想的ERT药物，能选择性地作用于心、脑、骨骼等器官，又尽可能减少对子宫、卵巢、乳房的副作用，是ERT研究的重要任务。目前国内外研究显示某些植物激素(如大豆异黄酮)具有雌激素相似的作用，却没有诱发肿瘤之虞[2，3]。

　　从中药葛根中所提取的葛根素，其结构与大豆异黄酮相似，而其异黄酮的含量为大豆的几十甚至上百倍[3]。本研究采用去卵巢大鼠模型模拟绝经后大鼠，用葛根素注射液灌胃，观察其对去卵巢大鼠雌激素分泌水平的影响，观察葛根素注射液是否具有雌激素样作用，现报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物 健康雌性SD大鼠50只,清洁级,18月龄(相当于生育期),体重220～250g，由浙江中医药大学动物实验中心提供。

　　1.2 实验药物 葛根素注射液(浙江康恩贝制药股份有限公司，每2ml约含葛根素100mg，批号：020710);倍美力片剂(美国惠氏?艾尔斯特公司艾尔斯特大药厂，每片含有0.625mg雌二醇，批号：0509125);生理盐水(石家庄四药股份有限公司，批号041018502)。

　　1.3 试剂和仪器 E2试剂盒(大连泛邦化工技术开发有限公司);?20℃科龙BCD?246AK3低温冰箱(广东科龙电器股份有限公司)。

　　1.4 实验方法

　　1.4.1 动物造模 健康雌性SD大鼠50只，称重编号后，随机抽取10只为假手术组。余40只大鼠开腹，结扎切除卵巢，造大鼠去势模型。假手术组不切卵巢，仅切除卵巢周围少许脂肪。

　　1.4.2 分组给药 去势大鼠随机分葛根素高剂量组、葛根素低剂量组、阳性对照组、模型组，每组10只。造模后第7天开始，葛根素高剂量组予葛根素注射液120mg/(kg·d)，葛根素低剂量组予葛根素注射液60mg/(kg·d)，倍美力组予倍美力水溶液0.07mg/(kg·d)，模型组与假手术组予生理盐水2ml，灌胃，均1天1次。各组在造模后7天及用药后30天分别取血，用酶联法测血E2含量。

　　1.4.3 标本采集 于毛细血管眼底静脉丛采血1.5ml，静置1小时后，用离心机3000r/min离心20min，取上清液于安倍管，?20℃冰箱保存。

　　1.4.4 血情E2测定 根据试剂盒的要求，检测血清标本中的E2含量。

　　1.5 统计学方法 采用SPSS11.5软件处理。计量资料以(±s)表示，采用单因素方差分析(One Way Anova)，进行不同组间均数两两比较,以P<0.05为差异有显著性意义，P<0.01为差异有高度显著性意义。

　　2 实验结果

　　2.1 造模后第7天大鼠血清E2水平 各组去卵巢大鼠血清E2水平均低于假手术组，差异有显著性意义(P<0.01)，说明造模成功。见表1、图1。 表1 造模后第7天血清E2水平比较与其他四组比较，△△P<0.01图1 五组大鼠造模7天血E2值

　　2.2 用药30天后大鼠血清E2水平 与模型组比较，葛根素高、低剂量组，倍美力组和假手术组大鼠血清E2水平均明显增高，差异有显著性意义(P<0.01)，见表2、图2。 表2 用药30天后大鼠血清E2水平比较与其他四组比较,△△P<0.01图2 五组大鼠30天后血E2值

　　3 讨 论

　　植物雌激素(PE)是一类广泛存在于植物、水果和蔬菜中的非甾体类化合物，其结构和生物活性均类似于雌激素。植物雌激素依据分子结构的不同主要分为三大类：异黄酮类、木脂素类和香豆素类[4]，均以无活性的前体形式存在于植物中。其中，最受关注的是异黄酮类化合物。近年来，已认识到植物雌激素是具有雌激素效能的天然化合物，可以从植物中获取并将其活化，发挥雌激素作用[5]。国内外较多学者关注利用这些雌激素样作用预防和治疗雌激素缺乏相关疾病，用以取代激素替代疗法(HRT)以减少其副作用。植物雌激素被作为激素替代治疗的“天然”代用品，在预防和治疗妇女围绝经期综合征方面也受到大量研究。大豆异黄酮是植物雌激素的最主要来源。有资料显示，大豆异黄酮对雌性动物的内分泌有调节作用[6，7]，可作为雌激素的替代物。葛根素(puerarin)由豆科葛属植物中提取，成分为4,7? 二羟基?8?β?D?葡萄糖基异黄酮。目前国内已有学者应用葛根素治疗去卵巢大鼠鼻黏膜萎缩和预防骨质疏松[8，9]，均取得了肯定的效果，推测可能与葛根素的雌激素样活性有关。

　　大鼠卵巢切除术(ovariectomy，去势)是一种良好的雌激素缺乏模型[10]，是国际上研究妇女围绝经期内分泌特点所普遍采用的造模方法。本实验应用此模型来探讨葛根素与倍美力(倍美力是从孕马血清中提纯的结合雌激素，是一种动物源性雌激素制剂，含多种成分，主要为17β雌二醇和雌酮)的雌激素样作用的异同，以更好地了解葛根素的雌激素样作用及其作用机制。实验结果显示，造模后第7天去卵巢大鼠血清E2水平均低于假手术组，差异有显著性意义(P<0.05)，说明造模成功。假手术组因为保留卵巢，仍具有正常激素水平，故E2水平显著高于其它各组。各组用药30天后，葛根素注射液高、低剂量组、倍美力组、假手术组的E2水平均高于模型组，差异有显著性意义(P<0.05)，而此四组之间无显著性差异。提示大鼠去卵巢后导致血清E2水平下降，补充雌激素使血清E2水平明显升高，葛根素具有与倍美力相同的上调血清E2水平的作用，这对于维持去卵巢大鼠神经?内分泌系统具有重要意义。

　　本研究结果提示，葛根素具有雌激素样作用，但并未显示出一定的量效关系。其次，葛根素和倍美力分别是植物源性雌激素和动物源性雌激素，它们与两种雌激素受体ERα和ERβ的亲和力是否相同，是否与同种雌激素受体结合起作用，有待进一步探讨。

【】
  　　1 黄小愚，段碧芳.日本汉方治疗女性更年期障碍的研究进展.国外医学中医中药分册,2000,22(4):195?198

　　2 Barbara BS.Hormones,Mood,and Cognitive Functioning In Postmenopausal Women.Obstetric& Gynecology,2001,87(2):20?26

　　3 郭建平,孙其荣,周 全,等.葛根总黄酮不同提取工艺探讨.中草药，2000，26(10)：522?523

　　4 白晓霞.植物雌激素与传统的激素替代疗法.国外医学妇幼保健分册,2002,13(3):113?115

　　5 陈 慧.植物雌激素与雌激素相关性疾病.国外医学内分泌学分册,2000,20(4):208

　　6 Song TT,Hendrich S,Murphy PA.Estrogenic activity of glycitein,a soy isoflavone.J Agric Food Chem,1999,47(4):1607?1610

　　7 Mukies AL,Lombard C,Sstrauss BJ,et al.Dietary flow supplementation decreases post? menopausal hot flushes:effects of soy and wheat.Maturitas,1995,21(3):189

　　8 戚本明，王正强，郑明秀,等.葛根总黄酮治疗去势大鼠鼻黏膜萎缩的研究.临床耳鼻咽喉杂志,2001,15(8):366

　　9 郑高利，张信岳，方晓林,等.葛根素对去卵巢大鼠骨矿密度和骨强度的影响.中草药,2001,32(5):422

　　10Singh M,Meyer EM,Millard WJ,et al.Ovarian steroid deprivation results in a reversible learning impairment and compromised cholinergic function in female Sprague Dawley rats.Brain Res,1994,644(2):305?312