加味阳和汤对实验性心肌缺血鼠心肌的保护作用

                     作者：谷新荣　姜丽红　李艾丽 

【摘要】  目的:探讨加味阳和汤防治冠心病心绞痛的疗效及作用机制。方法:分别将大、小鼠随机分为模型组、空白对照组、阳性对照组、加味阳和汤高、低剂量组。经腹腔注射异丙肾上腺素造成大、小鼠急性心肌缺血模型。检测各组大鼠造模后血清一氧化氮（NO）浓度并观察对小白鼠耐缺氧时间的影响。结果:加味阳和汤对鼠实验性急性心肌缺血有理想的防治作用。结论:加味阳和汤对冠心病有较好疗效，其机制可能与保护心肌细胞，增加血液中NO水平及提高心肌抗缺氧能力有关。

【关键词】  加味阳和汤;冠心病;心绞痛;一氧化氮;耐缺氧时间;小鼠

　　阳和汤原出自《外科全生集》，为主治阴疽的名方，阴疽系因正虚寒凝痰滞，血瘀毒聚而成，此过程与胸痹形成相仿，均由正虚毒邪阻络所致，又因其具有通阳养血，散寒通滞之效，故用此方胸痹符合中医异病同治原则。目前已有临床报道以此方加减治疗冠心病心绞痛有效［1］，且研究已证实阳和汤组方具有抗炎、镇痛、抗凝、降脂等药理作用［2、3］，而这些作用均符合冠心病心绞痛的治法。导师姜丽红教授认为，冠心病的发生与正虚毒蕴关系密切，因此根据中医异病同治的理论，采用通阳养血化瘀通络之法，以阳和汤为基础酌加化瘀通络之丹参、地龙用于临床颇有疗效。为进一步探讨其临床疗效及作用机制，本实验进行了加味阳和汤对实验性急性心肌缺血鼠心肌的保护作用研究。
　　
　　1 材料与方法
    
　　1.1 实验材料

　　健康Wistar大鼠50只，体重（240.55±21.42）g，雄性，昆明种小白鼠50只，体重（20±2）g，雌雄兼有，由长春高新医学动物实验研究中心提供。加味阳和汤（熟地黄、鹿角胶、麻黄、肉桂、炮姜、白芥子、丹参、地龙、生甘草等9味药）浓缩汤剂由长春中医药大学第一附属制剂室提供;麝香保心丸由上海和黄药业有限公司提供（批号G050607）;乌拉坦由北京化学试剂研究所生产，用时配制成质量分数为20%的注射液;普萘洛尔片由天津力生制药股份有限公司生产（批号0510014）;盐酸异丙肾上腺素注射液由上海禾丰制药有限公司提供（批号050702）;NO试剂盒（硝酸还原酶法）由南京建成生物工程研究所提供（批号20060416）。721分光光度计，由上海分析仪器厂提供;京立LDZ5-2离心机，由北京医用离心机厂提供;闵行WH-851旋涡混合器，由上海环宇仪器厂提供;金怡MM-2微量振荡器，由金坛市医疗仪器厂（江苏）提供。

　　1.2 分组与用药

    1.2.1 大鼠分组

　　将50只大鼠（经心电图机筛选后）随机分为模型组、空白对照组、麝香保心丸组、加味阳和汤高、低剂量组，共5组，每组10只。麝香保心丸组按22.5mg.kg剂量给药;加味阳和汤高、低剂量分别按生药25g.kg和8.3g.kg剂量给药;模型组和空白对照组均给予生理盐水。均每日上午灌胃给药1次，灌胃容积为10ml.kg，连续7d。于第5，6，7d灌胃给药后15min，除空白对照组外，给各组大鼠腹腔注射异丙肾上腺素（2mg.kg）造成大鼠急性心肌缺血模型。

    1.2.2 小鼠分组

　　将50只小白鼠（经心电图机筛选后）随机分为模型组、空白对照组、普萘洛尔片组、加味阳和汤高、低剂量组。共5组，每组10只，普萘洛尔组每只按体重（kg）给普萘洛尔0.01g，将普萘洛尔以0.5%羧甲纤维素钠（CMC-Na）液制成混悬剂灌胃，加味阳和汤高、低剂量组分别按生药50g.kg和16.7g.kg剂量给药;模型组和空白对照组均给予生理盐水，灌胃容积为20ml.kg，灌胃8d后，除空白组外，各组小鼠均皮下注射异丙肾上腺素（2mg.kg）造成小鼠急性心肌缺血模型（以上用药量均按人.鼠kg体重的等效剂量折算）。
   
　　1.3 血清NO测定

　　末次给大鼠注射异丙肾上腺素后24h，开始腹主动脉采血3ml置于试管中，经离心机3500r.min离心10min后，提取上清液，制备血清样本。后严格按照NO试剂盒说明书操作，测量指标。

    1.4 耐缺氧时间测定

　　各组小鼠注射异丙肾上腺素15min后立即放入250ml广口瓶中，塞上瓶盖，瓶塞涂凡士林，记录小鼠存活时间（至呼吸停止的时间），即耐缺氧时间。

    1.5 统计学方法

　　各组测定结果均以均数±标准差（ˉx±s）表示，各组均数比较采用方差分析，方差不齐时采用秩和检验。

　　2 结果
    
　　2.1 对急性心肌缺血大鼠血清NO含量变化的影响

　　见表1。表1 对急性心肌缺血大鼠血清NO含量的影响（略）
    
　　表1表明，缺血模型组与空白对照组比较，血清NO含量明显下降（P<0.01）。加味阳和汤高、低剂量组和麝香保心丸组与空白对照组比较，各组NO水平有不同程度升高，且加味阳和汤高、低剂量组与空白对照组及麝香保心丸组比较差异均有显著性（P<0.01）。
   
　　2.2 对小鼠耐缺氧时间的影响

　　见表2。 表2 各组耐缺氧时间的比较（略）
 
　　表2表明，缺血模型组与空白对照组比较耐缺氧时间显著缩短（P<0.01）。普萘洛尔组和加味阳和汤高、低剂量组与模型对照组比较，各组耐缺氧时间均显著延长（P<0.01）。普萘洛尔组和加味阳和汤高、低剂量组与空白对照组比较，各组耐缺氧时间均有所延长，但只有加味阳和汤高剂量组与之比较差异显著，且与普萘洛尔组比较亦具有显著性的差异（P<0.01）。 

　　3 讨论
    
　　冠心病心绞痛基本病理是冠状动脉供血不足，心肌急剧的、暂时的缺血与缺氧。近年的研究表明NO具有较强的舒张血管、抑制血管平滑肌细胞增殖、抗血小板聚集、粘附和释放活性物质作用，可防止血管痉挛和血栓形成。血管内皮细胞持续释放NO，可调节血压和冠脉基础张力，维持心血管系统的恒定舒张状态，保持心肌血流灌注，同时亦可调节ET的缩血管效应［4］。血管内皮细胞受损导致NO的合成和释放减少，表现为内皮依赖性的舒张因子代谢异常，易促进血管痉挛、血栓形成和动脉粥样硬化，与冠心病的急性缺血事件的发生关系密切［5］。因此，在冠心病心绞痛中强调保护血管内皮细胞、促进NO释放，调节其血中含量，同时提高心肌细胞抗缺血缺氧能力是治疗冠心病的重要途径。本病属祖国医学“胸痹、心痛”范畴，《金匮要略》认为，本病的病机为“阳微阴弦”。《类证治载·胸痹》云:“胸痹，胸中阳微不运，久则阴乘阳位，而为痹结也。”可知本病为虚实夹杂，其病机本在阳虚，标有阴寒痰瘀。故通阳养血化瘀通络为胸痹重要治法［6、7］。
   
　　本方以熟地、鹿角胶二药养血益精为君，有养血助阳之功以治本;肉桂、炮姜温经止痛破阴通阳为臣;麻黄、白芥子宣通经络引阳气、开寒结，并去皮里膜外之寒痰湿滞而为佐药，以宣通血气并防熟地、鹿角胶之凝滞，丹参、地龙化瘀通络祛瘀毒亦为佐药;生甘草为使以解毒调和诸药。综观全方共奏通阳养血、化瘀通络之功效。治疗冠心病心绞痛符合中医异病同治、标本兼治的理论。本研究结果表明，腹腔注射异丙肾上腺素造成大鼠急性心肌缺血后，血清NO含量显著降低，表现为内皮依赖性舒张因子代谢异常，证实NO与急性心肌缺血发病过程有关。而加味阳和汤可明显提高大鼠急性心肌缺血后NO水平，提示本方有保护血管内皮细胞、促进其释放NO的作用。加味阳和汤与麝香保心丸组和普萘洛尔相比，加味阳和汤治疗组可明显的提升大鼠血清NO含量和显著延长小鼠心肌耐缺氧时间。表明加味阳和汤对内源性血管活性物质和心肌保护物质的代谢起积极调节作用，能促进NO的合成和释放，并有显著的提高心肌耐缺氧缺血作用，为其治疗冠心病心绞痛提供了可靠的实验依据。显示在心肌缺血状态下加味阳和汤对血管内皮损伤起良好保护和修复作用，同时提高心肌细胞耐缺氧能力。证实加味阳和汤有明显的抗心肌缺血缺氧作用。提示血管内皮细胞保护效应是该方抗心肌缺血缺氧重要机理之一。

【】
  　　［1］陈一峰，高玉祥.阳和汤丹参饮加减治疗冠心病心绞痛43
例［J］.实用中医内科杂志，2004，18（3）:237.

［2］黄春林，杨霓芝，刘旭生，等.加味阳和汤治疗实验性大鼠膜性肾病脾肾阳虚型的实验研究［J］.中医药信息杂志，2001，8（8）:33-34.

［3］黄立中，徐琳本，张晓明，等.阳和汤镇痛及抗炎作用的实验研究［J］.湖南中医杂志，2002，18（5）:49-50.

［4］KelmM，SchraderJ.Control of coronary vasculartone by nitricoxide［J］.CircRes，1990，（66）:1561-1575.