脾虚小鼠与淋巴免疫功能相关性的实验研究
【摘要】 目的:借助补中益气汤具有提高脾虚小鼠淋巴免疫功能的实验研究结果，探讨中医脾与淋巴免疫功能之间的辨证关系。方法:采用MTT比色方法，检测脾虚小鼠服用补中益气汤前后淋巴因子IL-2的产生能力及活性程度。结果:经补中益气汤后的脾虚小鼠，免疫指标基本恢复至正常水平。结论:中医脾虚与机体淋巴免疫功能之间存在着本质上的相互联系。
【关键词】 脾虚小鼠;淋巴因子;补中益气汤
本实验在中医脾虚理论指导下，结合西医淋巴免疫学的观点，对中医脾虚证小鼠模型，服用补中益气汤治疗前后的淋巴因子IL-2水平进行检测，以其探求中医脾虚与淋巴免疫之间的关联。
1 材料与方法
1.1 实验动物 昆明种雄性小鼠，体重18～20g;C 57 BL/6J雄性小鼠，体重18～19g，购自长春高新医学动物实验研究中心。
1.2 方法
1.2.1 动物分组及模型制备 小鼠随机分为3组:正常对照组（9只）、脾虚造模组（11只）、药物试验组（11只），脾虚造模组和药物试验组小鼠采用耗气破气法制备小鼠脾虚模型［1］ 。11d造模完毕。次日，给药组小鼠，每日灌服200%浓度的补中益气汤，按22g.kg体重的药量进行脾虚证的治疗，共计7d。正常对照组小鼠每日灌服等体积的生理盐水溶液。
1.2.2 脾细胞产生IL-2能力的测定 按照丝裂原激活淋巴母细胞方法进行［2］ 。
1.2.3 脾细胞IL-2的诱生 按照常规杀鼠程序，无菌摘取小鼠脾脏，观察活细胞数>95%，调细胞浓度为5×10 6 /ml。分别加入各组脾细胞悬液于24孔细胞培养板中，1ml/孔。再加入ConA1ml.孔，使其终浓度为5μg.ml。置37℃，5%CO 2 培养箱孵育48h，上清液离心沉淀，将不同组别的上清液分装在Effendorf管中，冰箱冷冻盒中保存待测。ConA诱导的IL-2反应细胞制备:C 57 BL/6J小鼠按常规杀鼠程序，无菌摘取脾脏磨碎后，以安全IMDM营养液调整细胞浓度至5 ×10 6 ml。将细胞悬液吸入细胞培养瓶中，5ml/瓶，再加入ConA5ml于瓶中，使其终浓度为2μg.ml。置37℃，5%CO 2 培养箱孵育48h，取出后将培养细胞悬液贴壁加于淋巴细胞分层液（比重1.088）上面，细胞悬液与分层液比例为2∶1。离心取分层液中间层的T淋巴母细胞。以完全IMDM营养液配制成5×10 4 .ml浓度的反应细胞悬液备用。
1.2.4 IL-2活性检测 取出冻存盒内各组别小鼠的IL-2上清液，以完全IMDM营养液1∶4稀释，在96孔细胞培养板中，加入上清液100μl.孔，C 57 BL/6J小鼠的5×104 .ml浓度反应细胞100μl.孔。设置的阴性对照孔以100μl完全IMDM取代上清液。每只小白鼠各设3复孔。于37℃，5%CO 2 培养箱孵育48h。待阴性对照孔细胞接近全部死亡时，每孔加入MTT10μl（5mg.ml）。继续培养4h，每孔贴壁吸弃100μl上清液，加入DMSO100μl.孔。酶标仪570nm波长处测定吸光度值，以各样本的平均值表示产生IL-2的能力。
1.3 统计方法 数据为计量资料以（ˉx±s）表示，组间比较用t检验。
1.4 结果 经补中益气汤后的脾虚小鼠，免疫指标基本恢复至正常水平［3］ 。见表1。
表1 不同组别小鼠脾淋巴细胞产生IL-2能力比较（略）
注:脾虚造模组与正常对照组比较*** P<0.001;给药组与脾虚造模组比较*** P<0.001;给药组与正常对照组比较* P<0.05
2 讨论
小鼠脾虚则淋巴细胞的活性降低，经补中益气汤治疗后，下降的T淋巴细胞免疫活性得以恢复至正常水平，淋巴因子IL-2的产生能力得到提升，表明中医脾与淋巴细胞免疫之间存在相互关联的性质［4］ 。《内经·五癃津液别篇》有“季脾为之卫”的论述，提出了脾胃不仅是人体赖以生存的仓禀，而且是保持人体健康，抗御致病因素的重要脏腑［5］ 。表明了中医脾的生理本质与免疫系统的内在联系。
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