新病理制片技术的研究方法

【关键词】  病；病理制片；病理诊断

　　病理学检查对临床诊断、疾病鉴别诊断、预后判断都有重要意义，对于某些疾病的诊断、研究更是具有决定性的作用。而一张高质量的病理切片对于疾病的病理诊断起着不可忽视的决定性作用。近2年,笔者在使用自动组织脱水机过程中，对脱水剂、透明剂、浸蜡剂使用等进行了改进，对实验步骤和操作方法等细节方面进行了改良，提高了切片的染色效果和整体质量，明显降低脱片率，从而提高石蜡切片质量。并且在一定程度上减少了试剂挥发对人体和环境造成的伤害与污染。现将操作方法介绍如下。

　　1  操作方法

　　1.1  固定  甲醛固定液，其渗透性强，固定均匀，使组织缩小，适合大多数组织固定。

　　1.2  脱水  脱水剂乙醇。乙醇脱水的初始浓度为80%,避免乙醇浓度过低而增加脱水时间或乙醇浓度过高致组织发脆而影响切片。温度对乙醇渗透脱水的影响很大，主要是指无水乙醇。当室内温度>30℃时组织内水分子与乙醇之间运动加快,可缩短组织脱水时间。当室内温度<10℃时组织内水分子与乙醇之间运动变慢,组织脱水时间就要延长。为此我们在用自动脱水机对组织脱水时，对最后二缸无水乙醇，根据温度变化调整脱水时间，一般在2h左右。

　　1.3  透明  组织透明剂以二甲苯为佳，因为它与脱水剂和石蜡兼容性较好，对组织染色影响小，特别在免疫组织化学酶标记中对抗原的破坏较小。脱水机上应用二缸试剂，总的透明时间控制在20～30min(一般缸10min，二缸15min为好)。

　　1.4  在脱水机上一般用三缸蜡，第一缸蜡必须含有一定比例二甲苯(指新配制石蜡时用)，以便石蜡能渐进地置换出透明剂，时间可控制在1h左右。第二缸蜡和第三缸蜡可用纯蜡以便把组织中二甲苯全部置换出，总时间可在3h以上，浸蜡温度应与蜡的熔点相同。另外，要注意第三缸石蜡熔点必须与包埋的石蜡熔点相同。为了保持第三缸石蜡纯度可1～2月调换1次，更换时可将第一缸石蜡倒掉，把第二、第三缸分别移做第一、第二缸石蜡，只更新第三缸石蜡即可。在使用自动组织脱水机时，一定要对脱水机内试剂使用情况有所了解，做到定期更换试剂，以确保组织制片质量，使脱水机处理组织达到最佳状态。

　　1.5  切片  要求切片的第一步必需粗切。粗切的厚度大约在60～100μm左右，质地较硬的组织或较小的组织应再薄一些，粗切致组织全部暴露后，才进行细切。细切至组织块表面均匀一致。切片厚度一般为3～5μm。切片的要求是完整、薄、均匀。切下的片膜其大小形状应与组织块一致，切片的不完整，常会将重要病变遗漏，导致误诊、漏诊。在切片放蜡块时，应注意组织包埋的方向，组织的层次、纤维、肌肉等的走向应与切片刀平行。

　　1.6  展片与捞片  展片水温应在42℃～47℃之间，这主要和包埋蜡的熔点有关，水温过高，会引起组织细胞散片，水温过低，切片皱摺无法摊平。包埋蜡中如有二甲苯，也会造成石蜡溶解现象。捞片时玻片要干净，要选择那些完整、无皱摺的切片，粘贴于玻片中1/3和下1/3的中间。

　　1.7  烤片和脱蜡  烤片，一般在60～65℃烤片0.5～1h左右，温度过高，会引起切片细胞收缩；时间太短(少于20min)，容易造成脱片。脱蜡也相当重要，如果脱蜡不干净,切片不易着色或着色不匀，所以，脱蜡用的二甲苯要经常更换，一般用3道二甲苯，每500ml液体，处理5000张切片后更换1次为宜。

　　1.8  染色  苏木素染色时间要根据染料的新旧、温度、切片的类型而定，一般为3～5min。经水略洗后，用盐酸酒精分化，分化程度必须用显微镜控制。染色理想的切片在显微镜下应是：细胞核与细胞浆应蓝红相映，鲜艳美丽；核浆对比明显，核膜及核染色质颗粒清晰可见。

　　1.9  脱水和封片(方法略)

　　2  小结
   
　　用以往方法(组织经10%甲醛固定后直接用手动脱水)所做的384例快速石蜡切片中，有69例切片不完整、染色较差，占18%；用改进后的方法所做的248例石蜡切片中仅有10例切片不完整、染色稍差，占4%；操作所用时间缩短，提高了病理制片的质量。