心肌炎康滴丸中丹参水溶性成分的提取工艺研究

                      作者：张喜武 张弘 杨明 孙妍 李永吉

【摘要】  目的优选丹参水溶性有效成分最佳提取工艺。方法采用正交实验法，以丹酚酸B转移率、干膏率为指标优选最佳提取工艺。结果丹参水溶性成分最佳提取工艺为：10倍量水，提取3次，45 min/次。结论采用此方法省时、省工、节能、适合于大生产。

【关键词】  心肌炎康滴丸； 丹参； 丹酚酸B； 提取工艺； 正交实验

　　Abstract：ObjectiveTo study the best distilling technology of water-solubility content in Danshen.MethodsOrthogonal test was used with the transferred rate and dry-ointment rate of salvianolic acid B as indexes.ResultsThe best distilling technology was that the dosage of water was 10 times dosage of materials, the times of distilling were 3, and 45 minutes every time.ConclusionThe method is simple,economic,quick,and can be used for big production.

　　Key words：Xinji Yankang pills;  Salvia miltiorrhiza;  Salvianolic acid B;  Distilling technology;  Orthogonal test
   
　　丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎，其水溶性部分在化学成分、药理作用方面已被广泛研究［1］。丹参水溶性部分主要含酚酸类成分，其中酚酸类成分以丹酚酸B含量最好，并且具有抗心绞痛、增加冠状动脉血流量和对抗ADP所致血小板凝集作用。本实验以其丹酚酸B的含量为指标,对丹参水溶性成分的提取工艺进行了研究,以期为大生产提供工艺依据。

　　1  器材与试剂
   
　　美国Waters公司高效液相色谱仪系统，2996Photodiode Array Detector，2695Separations Module，Empower色谱工作站；色谱柱为Spherisorb C18 （4.6 mm×200 mm，5μm）购于大连化学物理研究所；丹酚酸B对照品购买于药品生物制品检定所；甲醇（色谱纯，methanol)；药材购于哈尔滨市世一堂饮片公司。

　　2  方法与结果

　　2.1  正交实验设计丹参中的活性成分为丹酚酸B，为水溶性成分，同时结合报道，本文采用水煎煮法提取，对影响提取效果的主要因素加水量、提取时间及提取次数进行考察［2］，每个因素选择3个水平进行实验。因素水平见表1。

　　表1  因素水平（略）

　　2.2  实验方法根据上表拟定L9（34）9次实验，取丹参药材饮片100 g，加蒸馏水500 ml均匀润湿30 min，加至所需水的倍数，提取液均浓缩至100ml，备用。 精密称取各备用液10 ml（相当于10 g药材）置于25 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，再精密量取5 ml置于25 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀备用。

　　2.3  丹酚酸B的含量测定

　　2.3.1  供试品溶液的制备取丹参药材饮片5 g，过40目筛，回流提取2 h，趁热过滤，定容至50 ml，备用。

　　2.3.2  对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的丹酚酸B对照品加入甲醇配成适当浓度，备用。

　　2.3.3  色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（spherisorbC18）；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）；柱温：30℃；流速：1 ml/min；检测波长：280 nm。

　　2.3.4  标准曲线的绘制精密称取丹酚酸B对照品，加甲醇配成不同浓度的溶液。精密吸取不同浓度的对照品溶液各20μl，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程。

　　2.3.5  测定法及结果精密吸取供试品溶液4 ml置25 ml容量瓶中, 加蒸馏水至刻度，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μl，按色谱条件测得峰面积积分值，代入上述标准曲线中，测得样品溶液中丹酚酸B的含量，含量测定结果见表2，方差分析见表3。

　　表2  正交实验安排及实验结果（略）

　　提取液有效成分转移率越高越好，干膏率越低越好。制定评分标准为：得分H＝【80－80×（84.13－E）÷(84.13－60.12)】＋【20－20×（F－13.78）÷（30.18－13.78）】
   
　　由表3可以看出，因素C对实验结果有显著性，选取显著因素的最好水平，故选择C3。A，B两因素均无显著性影响，考虑到评分结果，确定最佳工艺为A2B2C3。即加入10倍量水，提取3次，45 min/次。

　　表3  方差分析表（略）

　　2.3.6  验证实验取丹参药材3份，分别加入10倍量水，提取3次，45 min/次，分别测定丹酚酸B转移率（％）和干膏率（％）。结果见表4。
   
　　由表4可见，正交实验优选的工艺较为稳定，重复性较好。

　　表4  正交实验分析结果（略）

　　3  讨论
   
　　以加水倍数、煎煮时间、煎煮次数为因素进行正交实验，以丹酚酸B的含量为指标得到丹参最佳煎煮工艺，即：加10倍水煎煮45 min，煎煮3次。此工艺经验证重复性较好。

【】
  　　［1］ 何 媛，刘 凯，孙启时，等. 温胆滴丸提取工艺研究［J］.时珍国医国药，2007，18（9）：2229.

　　［2］ 倪力军，史晓浩. 提取时间、溶剂对丹参提取物质量的影响研究［J］.中成药, 2003,25（10）：780.