军蛭煎剂对小鼠胸腺、脾脏重量指数及组织结构影响的实验研究
作者：梁锐，李俊莲，李艳彦，王永辉，贾志新
【摘要】 目的：探讨军蛭煎剂对小鼠胸腺、脾脏重量指数及脾脏组织结构的影响。方法：将昆明种6月龄小鼠60只随机分为正常对照组、模型组、VE胶丸组（20 mg/kg）、军蛭煎剂大剂量组（56.8 mg/kg）、军蛭煎剂中剂量组（28.4 mg/kg）、军蛭煎剂小剂量组（14.2 mg/kg）。模型组和给药组每天腹腔注射D-半乳糖125 mg/kg，正常组注射等量生理盐水，连续注射5 w。5 w后取材，称重，制备光镜标本。用天平称胸腺、脾脏湿重，以每10 g体重中胸腺或脾脏所占重量（mg/10 g）表示胸腺、脾脏重量指数。结果：与模型组比较，军蛭煎剂各剂量组和VE胶丸组小鼠脾指数和胸腺指数增加，脾脏显微结构改善。结论：军蛭煎剂具有改善D-半乳糖致衰小鼠免疫器官结构的形态学损坏，提高免疫器官重量指数的作用。
【关键词】 军蛭煎剂；实验研究；延缓衰老；免疫器官
Abstract Objective：To observe the effect of Junzhi Jianji on weight indices of thymus gland and spleen and histological structure of spleen of aging mice. Methods: 60 Kunming mice of 6 months were divided into 6 groups randomly: control group， model group，VE group，Junzhi Jianji group 1（high dosage），group 2（middle dosage），group 3（low dosage）. Demencia model mice were made by intraperitoneally injecting D-glacatose once a day for successive 5 w，while the mice in control group were injected with the same amount of physiological saline. 5 w later，the weights of spleen and thymus gland of mice were measured, histological structure of spleen was observed by light microscope. Result：Compared with model group，weight indices of spleen and thymus gland were increased and morphology impairment of histological structure of spleen was improved in every treatment group. Conclusion：Junzhi Jianji could increase weight indices of immune organs and improve morphology impairment of histological structure of spleen.
Key words Junzhi Jianji，experiment research，delay aging，immune organs 军蛭煎剂来源于《金匮要略·血痹虚劳病》篇中的大黄■虫丸，由大黄、水蛭、地黄等药物组成。原方以活血化瘀为主，佐以地黄扶正，因五劳、七伤所致干血证，临床上也多用于治疗免疫失调类疾病，提示其具有免疫调节作用，药理研究多以溶栓、抗凝、改善微循环见长［1］。为了研究“虚瘀并存”在衰老过程中的作用，课题组进行了军蛭煎剂对小鼠胸腺、脾脏重量指数及组织结构影响的实验研究，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 昆明种6月龄小鼠60只，体重（30±2）g，雌雄各半，由医学院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK（京）2006-0003。饲养环境：通风良好；饲养温度：18 ℃~22 ℃，湿度：45%~65%。
1.1.2 实验药物 大黄、水蛭、地黄、黄芪等中药饮片购于山西中医学院附属，以10倍水煎3次后浓缩；VE胶丸，广州白云山制药股份有限公司生产，批号：2070019（使用时放入植物脂中）；D-半乳糖，25 g，上海科瑞生物有限公司生产，批号：201008。
1.2 实验方法
60只小鼠随机分为模型组、正常对照组、军蛭煎剂大剂量组（大剂量组）、军蛭煎剂中剂量组（中剂量组）、军蛭煎剂小剂量组（小剂量组）、VE胶丸组6组，每组10只，雌雄分笼。除正常对照组外其余各组每天腹腔注射D-半乳糖125 mg/kg，连续注射5 w造模［2-4］。同时根据药理实验方法学［1］给药量，大、中、小剂量组给药剂量分别为56.8 mg/kg、28.4 mg/kg、14.2 mg/kg， VE胶丸组每天给药剂量为20 mg/kg（以植物油作为溶媒），各组连续给药5 w，正常组以等量生理盐水灌胃。
1.3 标本采集
末次给药6 h后，称重，脱颈椎处死小鼠，迅速取出完整脾脏、胸腺，用电子天平称胸腺、脾脏湿重，胸腺、脾脏重量指数以每10 g体重中胸腺或脾脏所占重量（mg/10 g）来表示。光镜标本制备：将分离后的脾脏取出，固定于10%甲醛中，2 d后取材，梯度酒精脱水（依次为85%乙醇脱水90 min、95%乙醇脱水90 min、100%乙醇脱水30 min、100%二甲苯脱水15 min×2次），62 ℃浸石蜡2 h，包埋后切片5 μm，贴于普通载玻片上。经HE染色，光学显微镜下观察脾脏的组织结构。
1.4 统计学方法
所得结果采用SPSS10.0统计软件分析，运用单因素方差分析的方法进行统计。所有实验数据均以均数±标准差（x±s）表示，组间差异采用t检验。
2 结 果
2.1 军蛭煎剂对小鼠胸腺、脾脏重量指数的影响
结果见表1。由表1可见，模型组脾脏、胸腺重量指数降低，与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），表明衰老模型制作成功。与模型组比较，大、中、小剂量组，VE组小鼠脾脏、胸腺重量指数升高，差异有统计学意义（P＜0.05 ，P＜0.01）。表明各剂量军蛭煎剂对衰老小鼠模型均有提高脾脏指数与胸腺指数的作用。
2.2 军蛭煎剂对小鼠脾脏显微结构的影响
光镜下，正常对照组：脾脏白髓、红髓结构清晰，淋巴小结、动脉周围淋巴鞘结构明显；模型组：脾脏白髓、红髓结构不清晰，淋巴小结不明显，脾索增宽；军蛭煎剂各剂量组以及VE组：给药后脾脏结构有不同程度的修复，淋巴小结明显，生发中心增大，动脉周围淋巴鞘增厚。
3 讨 论
研究表明小鼠长期注射D-半乳糖会引起全身代谢紊乱，产生各器官、系统的功能衰退，表现为记忆力减退、免疫器官退化、过氧化脂质及脂褐质（LF）增高等，这些变化与老龄小鼠相似。实验证明长期注射D-半乳糖所致小鼠衰老模型是一种较为理想的衰老模型［4-5］。本实验小鼠腹腔注射D-半乳糖5 w后，免疫器官重量指数下降（P<0.05，P<0.01），与其他实验报道结果一致［6-8］。
胸腺属于中枢免疫器官，具有重要的免疫调节作用，能够分泌多种细胞因子，促进T细胞成熟，在建立自身免疫耐受和维持免疫自稳方面发挥重要作用。脾脏属于外周免疫器官，也具有重要的免疫功能。有学者认为胸腺和脾脏重量指数的改变能够反映机体免疫功能的状态［9-10］。本实验结果表明，军蛭煎剂能够提高衰老小鼠脾脏、胸腺重量指数，改善衰老小鼠脾脏显微结构，恢复免疫器官的免疫功能，从而间接达到延缓衰老的作用。
军蛭煎剂遵经方立法，选用大黄、水蛭、地黄、黄芪、芍药等药物，集化瘀、降浊与补肾、益气为一体，与衰老体内多见“虚瘀并存”的病机相合。近年来对衰老的病机出现了“血瘀致衰”的认识［11］，如临床表现为色素沉着、皮肤粗糙、老年斑出现、巩膜混浊、舌质瘀暗或有瘀点，舌下脉络扭曲，脉涩、结代等症均为瘀血所致。随着年龄的增加，因虚致瘀，瘀血导致新血不生又可因瘀致虚，虚、瘀程度不断加剧。因而，瘀与虚便构成了衰老的主要病理特征。实验研究对血流变、微循环等客观指标的检测，也肯定了血瘀是衰老的主要原因。在衰老过程中可概括为因虚致瘀，虚瘀并存［12］，表现为“虚-瘀-衰老”的模式［13］。总之，随着年龄增加，可出现虚的致病因素和血脉瘀阻，引起机体整体功能障碍，并且虚瘀互为因果，加速衰老。军蛭煎剂具有补虚祛瘀的作用，方中黄芪、地黄益气补肾，大黄、水蛭祛瘀通络，芍药、甘草调血和脉，具有“缓中补虚”的功效。免疫器官结构与重量指数的变化，可反映机体的整体免疫状态，与机体衰老有密切关系。在实验中军蛭煎剂表现为具有提高脾脏和胸腺指数作用以及修复脾脏结构的功能，其作用机理是否说明药物具有延缓衰老作用需要做进一步研究。
【】
［1］陈奇.中药药理实验方法学［M］. 北京：人民卫生出版社，1994.
［2］高湘，张振明，许爱霞，等.中药祛癍方的抗脂质过氧化作用［J］.药学杂志，2006，26（9）：1 051.
［3］付嘉，熊彬，郑冰生，等.巴戟天对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化系统作用的实验研究［J］.中国老年学杂志，2004，24（12）：1 206.
［4］王雅贤.桃核承气汤对免疫低下模型鼠免疫调节作用的实验研究
