加味六味地黄汤对环磷酰胺致幼年大鼠肝损害的保护作用

来源:岁月联盟 作者: 时间:2010-07-12

                 作者:姜荣燕, 朱立平, 陈述英, 梁秀玲, 李然然

【摘要】  目的 探讨加味六味地黄汤对环磷酰胺致幼年大鼠肝损害的保护作用。方法 2周龄及3周龄Wistar大鼠各32只,每一周龄段按随机数字表法各分为3组,正常组8只,对照组12只和实验组12只。实验组灌胃加味六味地黄汤,2周龄大鼠咽饲量为每只每次0.6 mL,3周龄咽饲量为每只每次0.9 mL,每日2次,连续14 d。对照组根据大鼠周龄喂饲等量生理盐水,每日2次,连续14 d。实验组和对照组第7天和第8天腹腔注射环磷酰胺100 mg/(kg·d);正常组常规喂养,第7天和第8天腹腔注射等量生理盐水。3组均于第15天检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的水平。苏木精-伊红染色镜检观察肝组织病改变。结果 2周龄及3周龄对照组大鼠ALT、AST均明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05),且实验组ALT、AST均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);光镜下对照组肝细胞广泛性的中度至重度水变性,实验组肝细胞水肿明显减轻。结论 加味六味地黄汤对环磷酰胺致幼年大鼠肝损伤有一定的保护作用。

【关键词】  加味六味地黄汤/应用; 环磷酰胺/中毒; 肝/损伤; 大鼠,Wistar; 动物,实验

  【Abstract】 Objective To explore the protective effect of Jiawei Liuwei Dihuang recipe on the hepatic injury of the young rats induced by cyclophosphamide(CP).Methods A total of 32 2?week?old and 3?week?old Wistar rats were divided into three groups, each week?old segment according to the random number table, normal group 8, control group 12 and experimental group 12. Experimental group was fed Jiawei Liuwei Dihuang recipe, 2?week?old rats were fed pharyngeal volume 0.6 mL for each, for 3 weeks of age,0.9 mL,twice a day for 14 days. The control group rats were fed normal saline according to weeks, twice a day for 14 days. The experimental group and control group were intraperitoneally injected cyclophosphamide 100 mg/(kg·d) on the 7th day and 8th day; with normal routine feeding, equivalent normal saline was intraperitoneally injected on the 7th day and 8th day for the normal group. Serum alanine aminotransferase(ALT) and aspartate aminotransferase(AST) were detected on the 15th day. After hematoxylin?eosin staining, the pathological changes in liver tissue were observed by microscope.Results The ALT and AST of the 2?week?old and 3?week?old control rats were significantly higher than the normal group, the difference being of statistical significance(P<0.05);ALT and AST of the experimental group were significantly lower than the control group, the difference being of statistical significance(P<0.05). Under light microscope, the cellular swelling of the hepatocyte was moderate to severe in the control group, while liver cell edema was significantly relieved in the experimental group.Conclusion Jiawei Liuwei Dihuang recipe can protect the young rats from the hepatic injury induced by cyclophosphamide.

  【Key words】 Jiawei Liuwei Dihuang recipe/Application to treatment; Cyclophosphamide/Poisoning; Hepatic/Injury; Rat,Wistar; Animal,experiment

  环磷酰胺是氮芥类烷化剂,是细胞周期非特异性广谱抗肿瘤药,它还具有免疫抑制作用而用于多种免疫性疾病的治疗,但可造成肝损伤。六味地黄方是中医“滋补肾阴”的经典名方。加味六味地黄汤是在六味地黄方的基础上,添加枸杞子、菊花、黄芪、丹参四味中药组成,本实验旨在利用环磷酰胺腹腔注射的方法建立大鼠肝脏受损模型,观察加味六味地黄汤对肝功能的影响以及肝脏的病理学改变,探讨其对环磷酰胺所致肝损害的保护作用。

  1 材料与方法

  1.1 动物 2周龄的Wistar大鼠32只,雌雄各半,体质量32~38 g,平均35 g;3周龄的Wistar大鼠32只,雌雄各半,体质量48~53 g,平均50 g。均由山东大学实验动物中心提供(实验动物合格证号:SCXK(鲁)20030004)。

  1.2 药品和仪器 熟地黄、山茱萸、山药、牡丹皮、茯苓、泽泻、枸杞子、菊花、黄芪、丹参由泰山医学院附属中药房提供,环磷酰胺由江苏恒瑞医药股份有限公司提供(批号:08052721)。7600型全自动生化分析仪为日立公司产品。

  1.3 方法

  1.3.1 实验动物分组 2周龄的Wistar大鼠32只,按随机数字表法分为3组,正常组8只,实验组12只及对照组12只。3周龄的Wistar大鼠32只,按随机数字表法分为3组,分法同上。

  1.3.2 实验方法 熟地黄、山茱萸各20 g,山药18 g,牡丹皮、茯苓、泽泻各10 g,枸杞子、菊花各12 g,黄芪20 g,丹参15 g加适量的蒸馏水浸泡1 h,加热煮沸30 min,滤出头煎,药渣加蒸馏水煮沸20 min,滤出二煎与头煎合并,加热浓缩至100 mL。冷却后置冰箱4 ℃储存备用。实验组灌胃加味六味地黄汤,按人鼠比例为1∶20算出2周龄大鼠咽饲量为每只每次0.6 mL,每日2次,3周龄大鼠咽饲量为每只每次0.9 mL,每日2次,连续14 d。对照组根据大鼠周龄喂饲等量生理盐水,每日2次,连续14 d。实验组和对照组第7天和第8天腹腔注射环磷酰胺100 mg/(kg·d);正常组常规喂养,第7天和第8天腹腔注射等量生理盐水。3组均于第15天将大鼠麻醉后眼眶取血,利用全自动生化分析仪测定谷丙转氨酶(Alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平。断头处死动物,取出肝脏,用10%甲醛固定,石蜡包埋,切片后苏木精-伊红染色,光镜观察。

  1.4 统计学分析 采用SPSS 11.5统计软件分析数据,所有数据检测指标均以±s表示,多组均数比较用方差分析,组间两两比较用q检验,显著性水平取α=0.05。

  2 结果

  2.1 2周龄及3周龄大鼠肝功能检测结果 分别见表1,2。表1 各组2周龄大鼠血清ALT、AST值的比较注:与正常组比较,aP<0.05,与对照组比较,bP<0.05。表2 各组3周龄大鼠血清ALT、AST值的比较注:与正常组比较,aP<0.05,与对照组比较,bP<0.05。

  表1,2结果表明,2周龄及3周龄大鼠中腹腔注射环璘酰胺的对照组与正常组相比,ALT、AST均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),表明环磷酰胺可造成肝细胞损害,实验组与对照组相比,ALT、AST均明显下降(P<0.05),表明加味六味地黄汤对环磷酰胺造成的肝细胞损害有保护作用。

  2.2 病理结果 正常组肝组织切片见图1a;对照组肝组织切片,镜下观肝细胞广泛性的中度至重度水变性,肝窦受到挤压,结构不清,可见坏死肝细胞及炎性细胞浸润,见图1b;实验组肝组织切片,可见肝细胞水肿减轻,见图1c。

  3 讨论

  环磷酰胺是20世纪50年代由Arnold首次人工合成的氮芥类烷化剂,属于细胞周期非特异性的广谱抗肿瘤药,可用于各种恶性实体瘤,恶性淋巴瘤及白血病,由于是一种细胞毒性免疫抑制剂,也用于系统性红斑狼疮,难治性肾病等疾病的治疗。环磷酰胺在体外无活性,需进入体内经肝脏微粒体细胞色素P450氧化裂环,生成有活性的中间代谢产物磷酰胺氮芥才能与DNA等生物大分子发生共价结合,因此肝脏是其代谢活化器官也是毒作用靶器官[1]。环磷酰胺可造成肝脏损害,其机制可能与代谢过程中生成的有毒的亲物质如丙烯醛等造成的氧化应激有关,有人研究表明,环磷酰胺可引起肝组织脂质过氧化产物丙二醛含量显著升高,而抗氧化系统的谷胱甘肽、超氧化物歧化酶都有不同程度的下降[2]。肝组织抗氧化能力的下降可使细胞内的活性氧增多,引发脂质过氧化反应,导致细胞膜和细胞器膜受损,线粒体受损使ATP生成减少,细胞膜钠-钾泵功能障碍导致细胞内钠离子和水积聚,引起细胞水肿。本实验证实,给2周龄及3周龄的大鼠腹腔注射环磷酰胺后,肝细胞受损使肝功能中的ALT、AST较正常组明显升高,病理切片中肝细胞水肿明显,表明肝脏受损。从祖国医学角度,环磷酞胺所造成的食欲不振、恶心、呕吐、全身乏力等症状,具有虚症的性质。

  六味地黄方由熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、牡丹皮和茯苓六味中药组成,方中熟地黄补血滋阴,用于肝肾阴虚,泽泻清泄肾火、利水渗湿并防熟地之滋腻;山茱萸补益肝肾,牡丹皮清泻肝火并制山茱萸之温,山药可补益脾阴,茯苓淡渗脾湿并助山药之健运,六味中药三补三泻,开阖兼顾,寒燥不偏,主要用于治疗肝肾阴虚、腰膝酸软、头晕耳鸣、遗精盗汗等症。研究认为,方中山茱萸水提取物能够使肾阳虚模型大鼠肝脏重量趋近正常,肝细胞病理改变减轻,肝细胞RNA和糖原含量升高,丙二醛含量降低[3];茯苓可防治肝损伤,有人给大鼠灌胃茯苓提取液,对四氯化碳引起的肝损伤及转氨酶升高有良好防治作用[4]。现代医学用六味地黄汤随证加减,可治疗慢性萎缩性胃炎、糖尿病、高血压、肿瘤化疗、更年期综合征、不孕不育症等多种疾病。此研究中加味的三味中药中枸杞含枸杞多糖,它对受到自由基直接损伤的肝细胞有保护作用[5];枸杞中的一种脑苷脂能显著降低半乳糖胺损伤大鼠肝细胞释放的ALT和琥珀酸脱氢酶[6];枸杞还含有胡萝卜素、核黄素、硫胺素、维生素C等多种维生素及多种氨基酸、钙、锌、铁、硒等微量元素,具有养肝滋肾功效。黄芪可益气升阳,主治气虚血亏,现代药证实,黄芪除含胆碱、甜菜碱、氨基酸、蔗糖、葡萄糖醛酸、微量叶酸外,还含有硒,黄芪中的硒能提高谷胱甘肽过氧化物酶活性,减轻氧自由基损伤从而对肝细胞起保护作用[7],化学成分中的黄芪总黄甙可降低肝组织中脂质过氧化物质,增加血清中超氧化物歧化酶活性,防止扑热息痛导致的血清ALT升高[8]。丹参能活血化瘀,改善微循环,疏通肝内血液淤滞,并降低肝细胞纤维化程度;同时丹参还具有抗氧化作用,通过提高血中超氧化物歧化酶的活性,清除细胞内氧自由基,从而保护肝细胞[9];夏荣龙等[10]研究证实,丹参还能有效地减轻SD大鼠恶性梗阻性黄疸的肝脏损害,使肝细胞损害指标ALT、AST明显降低。因此,加味的三味中药可有效保护肝细胞免受自由基损伤,降低转氨酶。

  环磷酰胺虽然在某些肿瘤及免疫性疾病的治疗中有不可替代的作用,但由于其毒副反应明显而限制了它的应用,幼小动物由于肝功能不成熟,可导致肝脏损害。本研究表明,六味地黄方中加入枸杞、黄芪、丹参三味中药,对环磷酰胺所造成的幼小动物肝脏损伤具有明显的保护作用,可降低肝功能中有关肝细胞受损的ALT、AST,减轻肝细胞水肿等病理损害。

【】
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