小儿利咽康颗粒剂免疫调节作用的实验观察
作者：王实， 宋光熠， 张广新， 刘永林， 李开明
【摘要】 目的 观察小儿利咽康颗粒剂的免疫调节作用。方法 采用大鼠腹腔注射羟甲基纤维素钠致炎诱发白细胞游走，涂抹二硝基氟苯诱导小鼠迟发型超敏反应，小鼠尾静脉注射胶体碳悬液，腹腔注射10%羊红细胞免疫小鼠，观察小儿利咽康颗粒剂对羟甲基纤维素钠致炎诱发白细胞游走的抑制作用，对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型超敏反应、对小鼠血中碳粒清除速度、对小鼠血清凝集素的影响。结果 小儿利咽康颗粒剂可明显抑制白细胞游走作用，对二硝基氟苯致小鼠迟发型超敏反应有明显的抑制作用，对小鼠血中碳粒清除速度和小鼠血清凝集素的影响不明显。结论 小儿利咽康颗粒剂具有一定的免疫调节作用。
【关键词】 炎症; 中草药/; 大鼠，Wistar; 小鼠; 动物，实验
【Abstract】 Objective To observe immune regulation effect of Liyankang granule on children.Methods The present study has been carried out using NaCMC injected into the mice's abdominal cavity to cause inflammation and induce white blood cell migration,varnishing DNFB to induce mice's DTH,injecting colloid activated carbon suspension into mice's tail vein,with 10% of sheep RBC injected into the abdomen to immunize mice.We observed inhibitory function of Liyankang granule on NaCMC to cause inflammation and induce white blood cell migration,the effect of DNFB on inducing mice's DTH and the effect on clearance speed of carbon particle in mice's blood and serum agglution of mice. Results Liyankang granule for children could obviouly inhibit migration of white blood cells,having obvious effect on inhibiting DNFB to mice's DTH,but the effect on clearance speed of carbon particle in mice's blood and serum agglutinin of mice was not obvious.Conclusion Liyankang granule for children has certain immune regulation effect.
【Key words】 Inflammation; Traditional Chinese drug/Therapy; Animals，laboratory; Rats，Wistar; Mice
小儿利咽康颗粒剂由玉竹、葛根、知母、麦冬等中药组成，具有清热解毒、消炎止痛、理气化痰之功效[1]。笔者观察了小儿利咽康颗粒剂的免疫调节作用，现将动物实验结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 药品 小儿利咽康颗粒剂(990715，无附加剂浓缩液，含生药量2 894.7 g/L),由医科大学提供;喉疾灵胶囊(981004)由天津美伦医药有限公司生产;阿司匹林(990418)由沈阳医学院生产;依文思兰(941117)、5?羟色胺(65?02?28)、二硝基氟苯(954216)Fluka进口分装，上海化学试剂采购供应站分装厂。
1.2 动物 昆明种小鼠120只，体质量18～22 g，雌雄各半;Wistar大鼠60只，体质量150～200 g，雌雄各半，均由中国医科大学实验动物中心提供，动物生产合格证号：辽实条合字1号，质量一级合格证号：辽实质字008号，由辽宁省实验动物管理委员会签发。
1.3 方法
1.3.1 对白细胞游走的影响 取雌性大鼠60只，按随机数字表法分为6组，每组10只。利咽康颗粒高、中、低剂量组分别给予小儿利咽康颗粒剂104，52，13 g/kg(药液所含生药量);盐水对照组给予生理盐水20 mL/kg;阿司匹林组给予阿司匹林268 mg/kg;喉疾灵组给予喉疾灵268 mg/kg。各组分别灌胃给药，给药30 min后腹腔注射1%羟甲基纤维素钠2 mL致炎，3 h后经麻醉处死，剪开腹部皮肤，注入5 mL生理盐水，挤压按摩腹部10次，剪开腹膜吸出腹腔液0.02 mL，加入0.38 mL生理盐水的试管中摇匀，取此液于白细胞计数板上，低倍镜下计数。
1.3.2 对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型超敏反应的影响 取昆明种小鼠60只，按随机数字表法分为6组，每组10只。利咽康颗粒高、中、低剂量组分别给予小儿利咽康颗粒剂104，52，13 g/kg(药液所含生药量);盐水对照组给予生理盐水20 mL/kg;阿司匹林组给予阿司匹林387 mg/kg;喉疾灵组给予喉疾灵387 mg/kg。各组灌胃给药每日1次，连续8 d。实验第1天，每只鼠腹部去毛3 cm×3 cm，并将1%二硝基氟苯丙酮麻油溶液50 μL均匀涂抹致敏，致敏第7天以1%二硝基氟苯10 μL涂左耳攻击，24 h后以左右耳郭质量差为指标，观察结果。
1.3.3 对小鼠血中碳粒清除速度的影响 取昆明种小鼠30只，按随机数字表法分为3组，每组10只。空白对照组给予生理盐水20 mL/kg;利咽康颗粒高、中剂量组分别给予小儿利咽康颗粒剂104，52 g/kg。各组灌胃给药每日1次，连续5 d。5 d后尾静脉注射6.4%胶体碳悬液0.01 mL/g。其后每5 min用抗凝吸管，经眼后静脉丛取血0.025 mL，连续取血4次。最后将小鼠麻醉后颈椎脱臼处死，称取肝脾质量。将血液加入盛有1 mL蒸馏水的试管内摇匀，721分光光度计600 nm波长处测吸光度值。
1.3.4 对小鼠血清凝集素的影响 取昆明种小鼠30只，按随机数字表法分为3组，每组10只。空白对照组给予生理盐水20 mL/kg;利咽康颗粒高、中剂量组分别给予小儿利咽康颗粒剂104，52 g/kg。各组灌胃给药每日1次，连续5 d。于给药的第1天同时腹腔注射10%羊红细胞进行免疫。实验第6天从小鼠眼底静脉丛取血，分离血清，用生理盐水按1∶10倍比稀释，将不同稀释浓度的血清分别置于微量血凝实验板内，每孔25 μL，再加入制备好的0.5%羊红细胞悬液25 μL混匀，加盖，置于37 ℃恒温箱内，温育3 h，观察凝集程度，分5级(0～4级)，抗体积数，结果进行统计学处理。按下式计算抗体积数：抗体积数∑=S1+2S2+3S3+……nSn。
1.4 统计学分析 实验数据应用SPSS 10.3软件包处理，组间比较行t检验。
2 结果
2.1 对白细胞游走的影响 阿司匹林组、喉疾灵组、利咽康颗粒高、中、低剂量组对白细胞游走均有明显的抑制作用，见表1。表1 羟甲基纤维素钠腹腔注射致炎大鼠各组对白细胞游走影响的比较注：与盐水对照组比较，at=2.947～3.134,P<0.01。
2.2 对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型超敏反应的影响 阿司匹林组、利咽康颗粒高剂量组对二硝基氟苯致小鼠迟发型超敏反应有明显的抑制作用，见表2。表2 二硝基氟苯皮肤致敏小鼠各组对迟发型超敏反应影响的比较注：与盐水对照组比较，at=3.367，3.541,P<0.01。
2.3 对小鼠血中碳粒清除速度的影响 利咽康颗粒各组对小鼠血中碳粒清除速度无明显影响，见表3。表3 利咽康颗粒高、中剂量组及盐水对照组对小鼠血中碳粒清除速度影响的比较
2.4 对小鼠血清凝集素的影响 盐水对照组、利咽康颗粒高、中剂量组抗体积数分别为28.7±4.4，27.9±3.6，28.5±3.5，利咽康颗粒高、中剂量组对小鼠血清凝集素无明显影响。
3 讨论
本次实验主要验证其对实验动物免疫功能的影响[2，3]。实验结果表明利咽康颗粒剂对白细胞游走及对二硝基氟苯致小鼠迟发型超敏反应有明显的抑制作用。小儿利咽康颗粒剂所含玉竹、葛根、麦冬可提高吞噬细胞的功能已有报道[4?6]，但本次实验研究表明小儿利咽康颗粒剂对血中碳粒清除速度和血清凝集素无明显影响，应进一步进行相关研究。实验表明小儿利咽康颗粒剂具有一定免疫调节作用。
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