减味藿香正气水药效物质基础的研究

                   作者：李康，宋粉云，李焕丹，袁劲松，赵琳

【关键词】  减味藿香正气水；药效物质基础；厚朴酚
　　Abstract:Objective  To study on the pharmacodyamic material basis of Jianwei Huoxiang Zhengqi liquid. Methods Regression and correlation analysis were applied to interrelate the areas of 40 peaks and inhibition rates of rabbits' isolated duodenum activated by acetylcholine.Results Pearson's correlation coefficients and regression equation of 40 peaks were achived. Conclusion The chemical substances for X3 and X25 are defined as the pharmacodyamic material basis of Jianwei Huoxiang Zhengqi liquid. The chemical substance for X25 is magnolol. Cortrx Magnoliae Officinalis is the main crude drug in Jianwei Huoxiang Zhengqi liquid.  

　　Key words:Jianwei Huoxiang Zhengqi liquid; pharmacodyamic material basis; magnolol

　　减味藿香正气水是在湖南省中医研究院彭志辉［1］等人用正交设计法对藿香正气水组方研究的基础上减味得到，从原来的11味降低到5味，包括厚朴、陈皮、苍术、半夏、广藿香油。减味藿香正气水对家兔离体十二指肠具有很强的抑制率［1］。本文以减味藿香正气水40个色谱峰的相对峰面积为自变量，对乙酰胆碱刺激的家兔离体十二指肠的抑制率为因变量，进行相关分析和回归分析，探讨其药效物质基础。

　　1  仪器与材料

　　1.1  仪器肌肉张力换能器JZ100型（高碑店市新航机电设备有限公司），分析天平（上海精密仪器有限公司天平仪器厂），电热恒温箱（北京长源实验设备厂），氧气吸入器（江苏鱼跃医疗设备有限公司），氧气瓶（深圳中宏气体有限公司），Agilent1100型高效液相色谱仪。

　　1.2  药物减味藿香正气水根据药典2005版全方制备方法减味制备成1 g·mL-1的药液。厚朴、陈皮、苍术、半夏由深圳一致药材公司提供，广藿香油购自江西吉水赣州香料油厂（批号20020302），氯乙酰胆碱购自上海化学试剂厂，Tyrode?s液自制。

　　1.3  试剂乙腈和甲醇为色谱纯 (德国Merk公司)；氯仿为分析纯 (汕头光华化学试剂厂)；水为超纯水（>18兆欧），并经0.45 μm水系滤膜过滤；厚朴酚和甲基橙皮苷购于中国药品生物制品检定所。

　　1.4  动物家兔购自中山大学动物实验中心,合格证号 SCXK2003011。

　　2  方法与结果

　　2.1  10份减味藿香正气水的制备　　厚朴3～9 g，陈皮3～9 g，苍术3～9 g，半夏3～9 g，广藿香油30～90 μL (广藿香药典用量3～9 g，广藿香油在藿香正气水中体积用量为其他药材质量的0.01倍，经为30～90 μL) ，进行均匀设计，得到10个组方。厚朴、陈皮、苍术用60%（体积分数）乙醇作溶剂，在室温浸渍24 h后进行渗滤，分别收集渗滤液各400 mL，在40 ℃减压浓缩至小体积；生半夏用冷水浸泡，每8 h换水1次，泡至透心，并按照27∶320的质量比加入干姜,加10倍质量的蒸馏水煎煮2次，第1次3 h，第2次2 h，合并水煎液，常温减压浓缩至小体积；广藿香油用乙醇适量溶解。以上所得到的醇提液、水煎液和广藿香油乙醇液合并混匀，用60%（体积分数）乙醇适量调整，得到生药材质量浓度为1 g·mL-1的10个样品，于4 ℃冰箱冷藏。

　　2.2  对乙酰胆碱刺激的离体兔肠的抑制实验［2］　　选健康普通家兔,体重(2.5±0.7) kg,雌雄兼用,禁食12 h,自由饮水。将动物击昏后剖开腹腔，剪取10～15 cm肠管,迅速放入盛有Tyrode?s液的平皿中洗净并浸浴,当肠管活动明显时,将其剪成约2 cm的肠段标本,两端对角穿线,放在盛有100 mL台氏液的电热恒温箱中（37±0.5）℃水浴,上端连接张力换能器,下端系于L型钩上,同时通入氧气（1~2个气泡/s）。标本负荷1 g,平衡30 min待系统稳定后,开始实验。描记5 min正常曲线后,向浴管中加入氯乙酰胆碱（22 mg·L-1）,使终质量浓度达到10-6 g·mL-1，肠管立即收缩。待收缩达到峰值后，用台式液洗涤3次，使肠管收缩恢复至基线水平，反复操作，使峰值稳定在同一收缩高度作为对照值，然后给药，观察记录曲线变化5 min,换肠平滑肌,重复实验。更换肠管及药液时更新台氏液。实验数据均以t检验进行统计处理。记录给药前的平均收缩振幅和给药后的平均收缩振幅，求算给药之后的平均抑制率（%）。

　　2.3  高效液相指纹图谱共有色谱峰的确定［3］色谱条件：柱温，25 ℃；流速，1.0 mL·min-1；色谱柱，Zorbax C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)； 内标，甲基橙皮苷；进样量，10 μL。　　

　　氯仿提取物的检测波长254 nm，梯度洗脱条件为水?乙腈（0.01 min 78∶22；10 min 76∶24；35 min 65∶35；45 min 60∶40；65 min 50∶50；80 min 35∶65；85 min 78∶22）。　　

　　残渣提取物的检测波长294 nm，梯度洗脱条件为水?乙腈?甲醇 （0.01min 98∶1∶1；5 min 94∶5∶1；15 min 89∶10∶1；25 min 87∶12∶1；40 min 87∶12∶1；55 min 74∶25∶1；60 min 98∶1∶1）。　　

　　按照液相色谱条件对10份处方样品进行测定，其中IS为参照物色谱峰，见图1。确定其中40个色谱峰为共有峰，得到与参照物色谱峰的相对峰面积。表1列出其中主要色谱相对峰面积值和10个样品对离体兔肠的平均抑制率。

　　2.4  以40个色谱峰的相对峰面积为自变量(X)，对乙酰胆碱刺激的家兔离体十二指肠的抑制率为因变量(Y)，进行相关分析和回归分析,相关分析结果见表2。回归方程为：Y=-11.029+157.199 X3+2.764 X25

　　A.氯仿提取物图谱； B.氯仿萃取后提取物图谱

　　图1  减味藿香正气水（样品5）HPLC图谱（略）

　　Fig.1  HPLC chromatograms of Jianwei Huoxiang Zhengqi liquid(No.5)

　　表1  10个样品共有色谱峰的相对峰面积和平均抑制率（略）

　　Tab.1  Relative peak areas and mean inhibition rates of common peaks in 10 samples

　　表2  40个色谱峰的相对峰面积与抑制率相关分析结果（相关系数）（略）

　　Tab.2  Pearson's correlation coefficients between values from pharmacological experiment and 40 independent

　　3  结论　　

　　以40个减味藿香正气水共有色谱峰为自变量，以对乙酰胆碱刺激的离体兔十二指肠的抑制率为因变量，进行相关分析和回归分析，色谱峰X3和X25与药理作用呈正相关，相关系数为正，并且X3相关系数显著；从回归方程可以得出，色谱峰X3和X25所代表的化学成分其量的增加能增强对乙酰胆碱刺激的家兔离体兔肠的抑制作用强度。确定色谱峰X3和X25所代表的化学物质为减味藿香正气水对家兔离体兔十二指肠抑制的药效物质基础的一部分。其中，色谱峰X25所代表的化学成分为厚朴酚，这与药味最佳配比研究中以厚朴为主药相符。

【】
  　　［1］彭志辉，陈立峰，赵淑慎.正交设计法对藿香正气水组方的研究［J］.湖南中医杂志，1995，11（2）：38-41.

　　［2］李康,袁劲松，苏薇薇，等.减味藿香正气水药味最佳配比的研究［J］.辽宁中医杂志，2006，33(7):792-793.

　　［3］李康,袁劲松，苏薇薇,等.减味藿香正气水指纹图谱分析方法研究［J］.辽宁中医杂志，2006，33（12）：1617-1618.