HPLC法测定通络胶囊中芍药苷的含量

                               作者：钟美霞，肖佳尚，劳海燕  

【摘要】  目的 建立通络胶囊中芍药苷的含量测定方法，为通络胶囊质量标准的研究提供依据。方法 采用HPLC法，以Diamnosil C18柱(460 mm×250 mm,5 μm)为色谱柱，以乙腈?0.05 mol/L磷酸二氢钾(体积比40∶60)为流动相，230 nm为检测波长。结果 此方法线性为1.005~5.025 μg，平均加样回收率为99.1%。结论 本方法精密度高，分离度良好，可用于通络胶囊中芍药苷的含量测定。

【关键词】  通络胶囊；芍药苷；高效液相色谱

　　Abstract:Objective To establish a method for content determination of paeoniflorin, the main constituent of Tongluo capsule. Methods  Paeoniflorin was analyzed on a Diamonsil C18 column (4.6 mm×250 mm,5 μm) with UV detector at 230 nm. The mobile phase consisted of acetonitrile?0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate (40∶60).Results The calibration curve for detection of paeoniflorin was from 1.005 to 5.025 μg with an average recovery of 99.1%.Conclusions This method is accurate, reliable and reproducible, which could be used for the quality control of Tongluo capsule.

　　Key words:Tongluo capsule; paeoniflorin; HPLC

　　通络胶囊是由赤芍、当归，冰片、肉桂、桃仁、红花等多味中药为原料制成的中药复方制剂，具有活血化瘀、通络止痛之功效，主治冠心病，证属心血瘀阻、胸痹心痛。方中赤芍是通络胶囊的君药，其药用有效成分主要是芍药苷(paeoniflorin)。为了控制本品的质量，本文［1-5］选择芍药苷作为含量测定指标，建立了高效液相色谱法分离测定通络胶囊中芍药苷的含量的方法，为通络胶囊的质量标准研究提供依据。

　　1  仪器与试药

　　Waters 600E泵高效液相色谱仪，Waters PAD996二极管阵列检测器；Waters M32色谱工作站；Mettler AE240(十万分之一)天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司)；SYZ?A石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏信达仪器厂)。芍药苷(药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0736-200301)；乙腈(色谱纯, Tedia Company, Inc., Fairfield, OH,USA)；通络胶囊（由广州新异科技开发有限公司提供，批号分别为060305，060306，060307，规格均为：0.4 g/粒）。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与系统适应性迪马公司Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm) 为色谱柱；乙腈?0.05 mol/L磷酸二氢钾(体积比40∶60) 为流动相；柱温：30 ℃；流速1.0 mL/min；检测波长为230 nm。在此色谱条件下，芍药苷与样品中其他组分分离良好，理论板数按芍药苷色谱峰计大于2 000，此条件下芍药苷色谱峰与其他杂峰的分离度不少于1.5。见图1~3。

　　2.2  对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品10.05 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2.3  供试品溶液的制备取本品装量差异项下内容物1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入50%（体积分数）甲醇溶液50 mL，精密称定，浸泡4 h，超声处理30 min，放冷，精密称定，用50%(体积分数)甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

　　图1  芍药苷对照品UV图 （略）

　　Fig.1  UV spectrum of paeoniflorin

　　图2  芍药苷对照品HPLC图（略）

　　Fig.2  HPLC of paeoniflorin

　　图3  通络胶囊HPLC图（略）

　　Fig.3  HPLC of Tongluo capsule

　　2.4  线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、25 μL，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定芍药苷峰面积，以对照品进样量(m)为横坐标，峰面积值(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=1 098 912m-90 526，r=0.999 9。结果表明，芍药苷对照品的进样量在1.005~5.025 μg范围内呈良好的线性关系。

　　2.5  精密度试验  分别精密吸取上述对照品溶液10 μL,连续进样5次,测定芍药苷峰面积值，求得芍药苷峰面积值平均值为2 075 228,RSD为0.7%，结果表明仪器精密度良好。

　　2.6  稳定性试验精密称取本品1 g，按“2.3”项方法制备供试品溶液，精密吸取10 μL，在0、4、8、12、24 h进样测定芍药苷峰面积值,求得芍药苷峰面积值平均值为2 834 271，RSD为0.9%,结果表明样品在24 h内基本稳定。

　　2.7  重复性试验  精密称取通络胶囊5份，每份约1 g，按“2.3”项方法制备，精密吸取10 μL进样测定，含量，求得芍药苷含量平均值为5.295 mg/粒，RSD为1?9%，结果表明本法测定的重复性良好。

　　2.8  回收率试验采用加样回收法，取已知含量样品(芍药苷含量为：5.295 mg/粒)6份，精密称取各约0.5 g，分别精密加入芍药苷对照品，按“2.3”项方法制备，照上述色谱条件，精密吸取供试品溶液10 μL，进样，测定，计算，求得芍药苷平均回收率为99.1%，RSD为1.8%，见表1。结果说明本法准确。

　　表1  芍药苷回收率试验结果（略）

　　Tab.1  Results of recovery testm

　　2．9  阴性对照试验取缺赤芍的各味药按工艺制成阴性对照液，照前述色谱条件和供试品制备方法进行测定，结果在芍药苷对照品吸收峰位置处无干扰，见图4。

　　图4  缺赤芍阴性对照HPLC图（略）

　　Fig. 4  HPLC of Tongluo capsule without paeoniflorin

　　2．10  供试品的测定取3批样品（批号060305、060306、060307）分别按“2.3”项下方法制备溶液，进样测定，结果测得芍药苷的含量分别为5.295、6.072、5.824 mg/粒。

　　3  讨论

　　3.1  检测波长的选择用二极管阵列检测器对样品与对照品的芍药苷的色谱图进行检测，芍药苷在230 nm有最大吸收(见图1)，在该波长处测定，其他杂质的干扰少，满足含量测定的要求。此外用二极管阵列检测器考察了色谱图中芍药苷的纯度，确定其中不含杂质峰。

　　3.2  流动相的选择比较了乙腈?0.05 mol/L磷酸二氢钾(体积比40∶60)，乙腈?0.05 mol/L磷酸二氢钾(体积比30∶70)，甲醇?0.05 mol/L磷酸二氢钾(体积比40∶60)几种流动相体系，确定了上述体系，该体系可使各成分得到较好的分离，满足定量分析的要求。

【】
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