RP?HPLC法测定轻身消胖丸中盐酸麻黄碱的含量
【摘要】 目的 建立轻身消胖丸中盐酸麻黄碱的定量方法。方法 采用RP?HPLC法，色谱柱：Waters XTerra C18(4.6 mm ×250 mm,5 μm)不锈钢柱；流动相:1%磷酸溶液(含0.4%三乙胺)?乙腈(体积比91∶9)；流速：1.0 mL/min；检测波长：207 nm；柱温：35 ℃。结果 盐酸麻黄碱的进样量在16.6～166 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，盐酸麻黄碱的平均回收率为98.40%(n=6)，RSD为1.2%。结论 方法简单快速、专属性强、重复性好、精密度高，可用于控制该制剂的质量。
【关键词】 轻身消胖丸; 盐酸麻黄碱 ; RP?HPLC; 含量测定
Abstract:Objective To establish an HPLC method for content detection of ephedrine hydrochloride in Qingshenxiaopang pills. Methods The sample was analyzed on a Waters XTerra C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column using 1%H3PO4（0.4% triethylamine）?acetonirile(91∶9) as mobile phase. The detection wavelength was at 207 nm. Results The average recovery of the method was 98.4 % with RSD 1.2%. The linear range of phedrine hydrochloride was 16.6~166 μg/mL. Conclusion This method is simple, quick, reproducible and suitable for the quality control of Qingshenxiaopang pills.
Key words:Qingshenxiaopang pills; ephedrine hydrochloride; RP?HPLC
轻身消胖丸为中药复方制剂，由罗布麻叶、麻黄、山楂等19味药材研制而成。通过益气、降脂综合调整机体功能而达到减肥目的，使机体新陈代谢恢复正常平衡状态，轻松减肥。为了较全面控制制剂质量，本文以方中佐药麻黄中的麻黄碱为定量指标。因本品药味多，成分复杂，干扰严重，若按报道的HPLC方法［1～3］，提取和测定盐酸麻黄碱成分不理想。对样品处理方法考察，经色谱条件优化，本实验建立HPLC 法测定了该制剂中盐酸麻黄碱。该方法专属性强，灵敏度高，重复性好，可作为本品质量控制指标。
1 仪器与试药
Waters2695/2996，PDA二极管阵列检测器，Empower色谱工作站；盐酸麻黄碱对照品（批号：171241-200404）购自药品生物制品检定所；轻身消胖丸(广州王老吉药业有限公司,批号:20061206,20061210,20061212)；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：Waters XTerra C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；1%磷酸溶液(含0.4% 三乙胺)?乙腈(体积比91∶9)；流速：1.0 mL/ min；检测波长：207 nm；柱温：35 ℃。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，加水制成含盐酸麻黄碱0.3320 mg/mL。
2.2.2 供试品溶液的制备精密称取本品10 g，加水60 mL使溶解，加氨水7.5 mL，摇匀，用三氯甲烷充分振摇萃取5次，每次20 mL，合并三氯甲烷液置于圆底烧瓶中，室温减压旋转至干［4］，加流动相溶解并定容至10 mL，密塞，超声使其溶解，0.45 μm滤膜滤过，即得。
2.2.3 阴性样品溶液除不含麻黄外，其余按处方比例制备缺麻黄的样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液。
2.2.4 药材对照液取麻黄药材按“2.2.2”项下方法制备，作为药材对照液。
2.3 线性关系精密称取盐酸麻黄碱16.60 mg，至50 mL量瓶中，加流动相溶解至刻度，摇匀，得约0.332 0 mg/mL盐酸麻黄碱对照品储备液。精密吸取上述对照品储备液1、2、4、6、8、10 mL分别置20 mL量瓶中，并用流动相稀释至刻度，混匀后，分别进样10 μL，记录色谱图。以色谱峰面积(A)为纵坐标，对照品质量浓度（ρ）为横坐标，进行线性回归，回归方程为A=21 523ρ+21 310，r=0.999 7，盐酸麻黄碱在16?6～166 μg/mL范围内呈良好线性。
2.4 阴性试验按上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、药材对照液和阴性样品溶液各20 μL，分别注入高效液相色谱仪，结果供试品色谱中，盐酸麻黄碱与其他色谱峰分离较好，阴性样品溶液在盐酸麻黄碱的保留时间范围内无干扰峰出现，而麻黄药材和轻身消胖丸样品中均含有盐酸麻黄碱峰，说明盐酸麻黄碱来源于麻黄药材中。见图1。
A.盐酸麻黄碱对照品; B.麻黄阴性空白; C.轻身消胖丸供试品; D.麻黄药材
图1 轻身消胖丸的HPLC色谱图（略）
Fig.1 Chromatograms of Qingshenxiaopang pills
2.5 精密度试验 取供试品(批号20061212）溶液，重复进样6次，每次20 μL，测定峰面积值分别为1 451 487、1 443 701、1 440 687、1 468 314、1 468 913，1 454 920,结果RSD为0.83%。
2.6 重复性试验取同一批样品（批号20061206），按“2.2.2”项下方法配制6份供试品溶液，分别测定盐酸麻黄碱含量，结果平均含量为33.92 mg/g，其RSD为1?0%。
2.7 稳定性试验取同一供试品（批号20061206)溶液分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样，分别测定麻黄碱的峰面积，结果其RSD为1?5%。表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.8 回收率试验 精密称取10 g已知盐酸麻黄碱含量（33.88 mg/g)的同一批样品6份，精密加入一定量盐酸麻黄碱对照品，按“2.2.2”项下方法制备，测定其含量，并回收率，测定结果见表1。
2.9 含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪,以上述色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算样品的含量。共测定3批样品,结果3个批号20061206、20061210、20061212的样品所测得的盐酸麻黄碱含量分别为33.88、33.62、34.17 μg/g。
表1 盐酸麻黄碱的加样回收率试验结果（略）
Tab.1 Results of recovery(n=6)
3 讨论
3.1 检测波长的选择取盐酸麻黄碱对照品适量，加流动相溶解后，经200～400 nm紫外扫描，结果表明在207 nm 处有最大吸收，故选择207 nm作为检测波长。
3.2 流动相的选择由于盐酸麻黄碱的碱性基团极易受C18柱的硅胶键合相表面残留的硅醇基极性点的影响，而使峰拖尾。在流动相中加入0.4%三乙胺作扫尾剂，起到抑制和掩蔽固定相表面极性点的作用，使峰形尖锐且对称。
3.3 色谱柱的选择实验中发现色谱柱对盐酸麻黄碱的分离起决定性作用，分别考察了Hypersil ODS C18(4.0 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，Waters Symmetry C18 (4.6 mm×150 mm，5 μm)色谱柱，Waters XTerra C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱。结果Waters XTerra C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱使用的pH范围宽，对盐酸麻黄碱具有柱效高，峰形优异，稳定性好的优点。
3.4 提取方法的选择本文曾采用直接加1%盐酸甲醇超声处理的方法制备样品溶液［5］，但在盐酸麻黄碱峰前后，有干扰峰，不易与盐酸麻黄碱分离。利用麻黄碱能溶于水，加碱后游离的麻黄碱能被三氯甲烷、乙醚等有机溶剂萃取,加酸后成盐复溶于水［4］，样品经碱化萃取后，除去了干扰峰。将轻身消胖丸加水溶解并碱化后，分别用三氯甲烷萃取，三氯甲烷液在下层，处理较方便。对加氨水的量也进行了比较，加7.5 mL氨水，药液pH值已达12，符合碱化的要求。对萃取次数比较的结果显示萃取5次已经提取完全。
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