六神祛暑水的薄层鉴别研究

                               作者：曾常青 郭敏仪 陈航萍   

【摘要】  目的 建立六神祛暑水的薄层鉴别方法。方法 用薄层色谱法分别鉴别六神祛暑水中的大黄、桂皮、广藿香、陈皮、辣椒等药材。结果 薄层色谱可检出大黄、桂皮、广藿香、陈皮、辣椒等5种药材对应的斑点，且斑点清晰，阴性没干扰。结论 建立的薄层鉴别方法简单，可作为六神祛暑水质量控制方法。

【关键词】  六神祛暑水；薄层色谱；大黄；桂皮；广藿香；陈皮；辣椒
　　Abstract:Objective To establish the methods of TLC identification of Liushen Qushu lotion. Methods Radix et Rhizoma Rhei,Pericarpium Citri Reticulatae,capsicum,Herba Pogostemonis,Cortex Cinnamomi to establish the methods of TLC identification of Liushen Qushu lotion Results Radix et Rhizoma Rhei,Pericarpium Citri Reticulatae,capsicum,Herba Pogostemonis,Cortex Cinnamomi in Liushen Qushu lotion can be identified with TLC clearly.Conclusion The methods are simple, rapid and the spots are very clear, which could be used for quality control of Liushen Qushu lotion.

　　Key words:Liushen Qushu lotion;TLC；Radix et Rhizoma Rhei;Pericarpium Citri Reticulatae; capsicum;Herba Pogostemonis;Cortex Cinnamomi

　　六神祛暑水是由樟脑、桂皮、广藿香、茴香、姜等11味中药组成的复方酒剂。主要用于因中暑而引起的头晕、恶心、腹痛的。中华人民共和国卫生部药品标准［1］中仅有性状的描述及检查项，为控制其内在质量，本文对六神祛暑水处方中广藿香、桂皮、大黄、陈皮、辣椒等5味药材进行了薄层鉴别方法的研究，以控制该药的质量。

　　1  仪器与试药

　　ZF?90型暗箱式紫外投射仪（上海顾村电光仪器厂）；YoKo?PN电动喷雾器（武汉药科新技术开发有限公司）。　　辣椒素（110839-200403）、大黄酚（110796-200513）、大黄素（110756-200110）、大黄酸（0757-200206）、橙皮苷（110721-200512）、大黄素甲醚（110758-200509）、芦荟大黄素（0795-9803）、桂皮醛（11171-200513）等对照品均由药品生物制品检定所提供。薄层层析硅胶G（化学纯，青岛海洋化工有限公司制造）；预制薄层层析硅胶G板（化学纯，青岛麦克硅胶干燥剂有限公司）；其余试剂均为分析纯。六神祛暑水及各味药材由广州星群（药业）股份有限公司提供，广藿香、桂皮、大黄、陈皮、辣椒等5味对照药材均由广东药学院李书渊老师鉴别；六神祛暑水中藿香、茴香、桂皮、大黄、陈皮、辣椒等药材阴性均按制剂工艺制备。

　　2  薄层鉴别

　　2.1  大黄　　取本品20  mL，水浴蒸干至约5 mL，用水5 mL溶解，置分液漏斗中用乙醚萃取3次，每次10 mL，合并乙醚层，置水浴上蒸干，残渣加乙醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺大黄的阴性样品，按供试品制备方法同法制成阴性对照溶液。取大黄药材粉末0.5 g，加70%（体积分数）乙醇20 mL，超声处理25 min，滤过，取滤液同法制成大黄对照药材溶液。取大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄素对照品，加乙醇制成浓度均为1.5 mg/mL的溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述供试品溶液、大黄对照药材溶液、阴性对照溶液各1 μL及大黄混合对照品溶液2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷?乙酸乙酯?甲酸（体积比30∶10∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰。结果见图1。

　　B.大黄阴性对照;1~5.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003、DN51004、DN51005)

　　S1.大黄对照药材;S.大黄混合对照品(由上至下为大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素)

　　图1  大黄的薄层鉴别( UV365 nm)（略）

　　Fig.1  TLC chromatogram of Radix et Rhizoma Rhei

　　2.2  桂皮　　量取样品20 mL，用石油醚（30~60 ℃）25 mL提取，弃去石油醚层，石油醚提取后的下层液，加蒸馏水20 mL，用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯层，水浴蒸干，热风吹至没有樟脑味，加乙酸乙酯0.5 mL溶解，作为供试品溶液。取桂皮药材粉末0.5 g，加入乙醇10 mL，冷浸20 min，滤过，滤液挥干至2 mL，作为对照药材溶液。另取缺桂皮的阴性样品，按供试品制备方法同法制成阴性对照溶液。取桂皮醛对照品，加乙醇制成浓度为1 μg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液各3 μL，桂皮对照药材溶液及桂皮醛对照品溶液1 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90 ℃）?乙酸乙酯（体积比18∶2）为展开剂，薄层板预饱和15 min，展开，取出，晾干，喷以2, 4?二硝基苯肼试液。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上显相同的橙黄色斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰，结果见图2。

　　2.3  广藿香　　取广藿香药材粉末2 g, 加乙醇20 mL，超声20 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液。

　　取缺广藿香的阴性样品，按“2.1”项下供试品制备方法同法制成阴性对照溶液。另取百秋李醇对照品，加入乙酸乙酯制成浓度为1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。吸取鉴定“2.1”项下供试品溶液，广藿香对照药材溶液、阴性对照溶液及百秋李醇对照品溶液各2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷?丙酮（体积比10∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃烘至可见紫红色斑点。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰，结果见图3。

　　B.桂皮阴性对照;1~3.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003)  S1.桂皮对照药材;S.桂皮醛对照品

　　图2  桂皮的薄层鉴别（略）

　　Fig.2  TLC chromatogram of Cortex Cinnamomi

　　B.广藿香阴性对照;1~3.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003)  S1.广藿香对照药材S.百秋李醇对照品

　　图3  广藿香的薄层鉴别（略）

　　Fig.3  TLC chromatogram of Herba Pogostemonis

　　2.4  辣椒　　取本品25 mL，水浴蒸干，加水20 mL溶解，置分液漏斗中用乙醚萃取3次(下层液保留待用)，每次20 mL，合并乙醚层，蒸干，加10% KOH甲醇溶液20 mL溶解，移至锥形瓶中放置12 h，加入5 mL水，用乙醚萃取3次，每次20 mL，合并乙醚层，用水洗2次，每次20 mL，蒸干，用乙醇0.5 mL溶解，作为供试品溶液。另取缺辣椒的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。取辣椒素对照品，加乙醇制成浓度为1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《药典》2005年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以丙酮?甲苯?正己烷（体积比2∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显褐色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的褐色斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰，结果见图4。

　　B.辣椒阴性对照;1~4.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003、DN51004)S1.辣椒对照药材;S.辣椒素对照品

　　图4  辣椒的薄层鉴别（略）

　　Fig.4  TLC chromatogram of Fructus Capsicum

　　2.5  陈皮　　取“2.4”项下乙醚提取后没有皂化的下层液，移入分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加乙醇0.5 mL溶解，作为供试品溶液。另取缺陈皮的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。再取陈皮药材粉末3 g，加乙醇30 mL，超声20 min滤过，取滤液浓缩成0.5 mL，作为对照药材溶液。取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液，对照药材溶液、阴性对照溶液各1 μL,对照品溶液5 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯?甲醇?水(体积比100∶17∶13)展开3 cm，再以甲苯?醋酸乙酯?甲酸?水(体积比20∶10∶1∶1)上层液展开8 cm，取出，晾干，喷以1%三氯化铝甲醇试液, 加热吹干，置紫外光灯(365 nm)下检视（显色后10 min内观察）。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰，结果见图5。

　　3  讨论

　　3.1  在辣椒的鉴定中，若样品不水解直接采用乙醚提取液点样，辣椒素含量低，杂质多，背景深，根本观察不到鉴定斑点。因此采用加入10%KOH甲醇溶液放置一晚皂化，再用乙醚提纯的方法，使辣椒素的含量大大增加，同时去除大部分的干扰，使得薄层鉴定中辣椒素斑点清晰、明显，阴性无干扰。

　　B.陈皮阴性对照;1~5.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003、DN51004、DN51005)S1.陈皮对照药材;S.橙皮苷对照品

　　图5  陈皮的薄层鉴别(UV365 nm)（略）

　　Fig.5  TLC chromatogram of Pericarpium Citri Reticulatae

　　3.2  大黄中主要含有蒽醌衍生物，主要为大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等苷元。中国药典2005版中大黄药材这5种成分的薄层鉴定，样品需要经过水解前处理［2］17。经本文实验证明，经过水解后，制剂中各蒽醌鉴别斑点反而不明显，而采取直接用乙醚提取本品的方法，就可直接鉴别5个斑点，这可能由于在该制剂的生产过程中，大黄中大部分的苷己分解为苷元。药典中鉴定大黄的展开剂为石油醚（30~60 ℃）?甲酸乙酯?甲酸（体积比15∶5∶1）的上层溶液，该展开剂对温度和湿度都很敏感，难控制展开效果。而本文采用正己烷?乙酸乙酯?甲酸（体积比30∶10∶0.5），在一般情况下能分离出3个鉴定斑点，当湿度控制较低时，就能很好地鉴别出大黄中5个鉴定斑点。

　　3.3  陈皮的薄层色谱鉴定一般采用0.5%NaOH的硅胶G薄层板进行二次展开，1%三氯化铝甲醇显色方法鉴别［2］132，结果发现，此方法本品中的大黄对其鉴定有干扰。采用聚酰胺膜代替0.5%NaOH的硅胶G薄层板，1%三氯化铝甲醇显色，橙皮苷鉴定斑点清晰，阴性无干扰，主要是聚酰胺薄膜能增强三氯化铝与橙皮苷反应产生的荧光显色；但观察斑点时要注意显色后10 min以内观察，否则阴性会出现干扰。

　　3.4  在桂皮的薄层鉴别中，样品中的樟脑成分会影响桂皮醛斑点的鉴定，先采用石油醚提取，去除大部分樟脑成分，再经热风吹去剩余樟脑。

【】
  　　［1］ WS3-B-2490-97Z13-45.中华人民共和国卫生部药品标准［S］.

　　［2］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典: 2005年版一部［S］.北京:化学出版社, 2005.