Immage特定蛋白仪与乳胶凝集法检测CRP结果的分析
作者：周樱，钱厚明，刘文娟，徐玮
【关键词】 特定蛋白仪
［关键词］ 特定蛋白仪；乳胶凝集法；CRP
C反应蛋白(CRP)是临床常用的急性时相反应蛋白，在感染、组织损伤、肿瘤、心肌梗死、休克及溶血等病理状态时其含量增高，病情好转时迅速下降。CRP检测目前通常使用的方法有乳胶凝集法、ELISA、免疫透射比浊法和免疫散射比浊法等。本文对
Immage特定蛋白分析仪与朗道公司的乳胶凝集法半定量检测试剂盒CRP的检测结果进行了分析，同时探讨了使用乳胶凝集法半定量检测CRP时应注意的问题。报道如下。
1 材料与方法
1．1 材料 2005年1月至6月本院门诊及住院的儿科患者血清1 839例。检测仪器为Beckman Coulter公司的Immage特定蛋白分析仪及其配套试剂，该仪器可进行抗原过量分析并自动稀释样本后测定。乳胶凝集法半定量试剂为朗道公司生产，最低检测限为6 mg/L。
1．2 方法 1 839例血清样本用特定蛋白仪检测CRP浓度，将CRP>6 mg/L的样本根据浓度不同分组，然后在每组中随机抽取部分样本用乳胶凝集法检测按说明书操作。乳胶凝集法以有明显凝集者为阳性，无凝结为阴性。对有凝集的血清用样本稀释液作两种稀释，一种为倍比稀释，另一种是根据仪器检测结果出稀释倍数后作精确稀释，将稀释后样本用乳胶凝集法测定，用发生凝集的最高稀释管的稀释倍数乘以6 mg/L即可得到CRP浓度。
2 结果
1 839例样本中仪器检测的CRP>6 mg/L的为846例(46．0％)，最高浓度为315 mg/L。将846例样本根据CRP浓度进行分组，各组中随机抽取部分样本作倍比稀释和精确稀释后测定CRP含量，结果显示精确稀释后的检测结果与仪器结果具有良好的相关性，而倍比稀释样本只有在CRP<24．0 mg/L的浓度组中相关性较好，而在高浓度时普遍低于仪器检测结果。见表1。表1：特定蛋白仪与乳胶凝集法检测CRP的结果(略)
3 讨论
对于CRP等特定蛋白的检测目前使用的方法包括琼脂扩散法、ELISA、乳胶凝集法、特定蛋白分析仪等。前两种方法受方法学本身的制约其检测浓度的线性范围较窄，对于高浓度样本的测定结果误差较大往往低于实际浓度。乳胶凝集法方法简便，在对样本作稀释后即可作半定量分析。Immage特定蛋白分析仪使用双光径免疫浊度分析系统突出了其两套光路系统的优势，它的近红外波长检测手段和颗粒包被技术不仅提高了检测的精密度，而且其抗原过量分析并自动稀释样本后测定的功能使检测的线性大为提高。
本文表1中可见，精确稀释后的样本检测结果与仪器结果在各组差异均无显著性(P>0．05)，提示我们只要能够对样本作出精确的稀释后测定，乳胶凝集法半定量分析的结果是可信的。而倍比稀释样本只有在CRP<24．0 mg/L时，差异无显著性(P>0．05)，而在其余各组差异有显著性(P<0．01)。分析原因可能是由于样本的稀释方式所决定的。即倍比稀释后的样本，随着稀释倍数的加大，相邻稀释管间的浓度差也越来越大，当样本浓度正好介于两稀释管之间时，产生凝集反应的就只能是低倍稀释管，以该管的稀释倍数乘以6 mg/L所得的结果必然低于样本的实际含量。有作者在检测ASO、RF时也有类似的结果［1］。
本文所作的精确稀释是在应用分析仪检测后出来的，事实上在未知浓度时要对样本作准确倍数的稀释是不可能做到的。若按试剂盒内说明书作1∶1、1∶2、1∶3等方式稀释不仅耗时，而且浪费试剂。若用倍比稀释［2］，测定结果偏低。本文根据表1中的结果分布情况设计了本室的样本稀释法，当原倍血清反应为阳性时，将样本先作2、4、8倍稀释，这二种稀释倍数包含了表1中74．2％的样本。然后先对4倍的样本检测，出现凝集后再检测8倍稀释的样本，若4倍阳性而8倍阴性，则应要求作如6倍稀释，依此类推即可得到较为精确的结果。本室所使用的稀释法是根据本院的样本检测结果而确立的，并不一定适合于其他实验室，实验室应根据自己的情况确立样本的稀释法。其他项目的检测如ASO、RF等也是如此。
乳胶凝集法还存在着假阴性及假阳性的问题，如当抗原含量过高时可出现假阴性，
RF会导致检测结果的假阳性。因而对于临床有所怀疑的以及凝集颗粒很小的样本应稀释后检测，必要时应作RF的测定。乳胶凝集法在结果判定时也存在经验问题，特别是对于临界值样本，故应设计临界值质控样本，有作者已经进行了这方面的探索［3］。
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［1］ 熊建辉.几种ASO RF检测方法的比较［J］.江西医学检验，2003，21(3)：
171172.
［2］ 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程［M］.第2版.南京：东南大学出版社，1997：356.
［3］ 柴辉，陈华明，鞠萍.抗链球菌溶血素O抗休及类风湿因子试验中液态弱阳性质控血清的研制［J］.检验医学杂志，2004，19(1)：5253.
