大鼠孤束核在电针保护应激性胃黏膜损伤中的作用

【摘要】  目的 探讨大鼠孤束核（NTS）在电针(EA)保护应激性胃黏膜损伤中的作用。方法 将56只健康雄性SD大白鼠随机分为应激组、EA+应激组、NTS电损毁组、NTS假损毁组。通过脑立体定向仪电损毁大鼠孤束核，采用束缚?浸水制备大鼠应激性胃溃疡模型，分别检测各组大鼠胃溃疡指数（UI）、胃黏膜血流量（GMBF）、胃液酸度。结果 EA+应激组UI明显减少，GMBF增加，胃酸分泌量减少。与应激组比较有显著性差异（P<0.01，P<0.001）。NTS电损毁组UI明显提高，GMBF减少，胃酸分泌量增加。分别与NTS假损毁组和EA+应激组比较，差异均有显著性（P<0.05或P<0.001）。结论 孤束核参与了电针足三里穴抗大鼠应激性胃黏膜损伤作用过程。

【关键词】  孤束核；电损毁；电针；应激性胃溃疡。

    ABSTRACT:Objective To explore the role of nucleus tractus solitarious (NTS)in protective effect of electroacupuncture(EA) against stress gastric mucosal lesion in rats. Methods 56 SD male rats were randomly divided into the stress group,EA+stress group,NTS electricity damaged group and sham damaged group.The NTS damaged in the Brain Stereotaxic Frame. The gastric stress ulcer model was established by restrain and water immersion. The ulcer index (UI), gastric mucosa blood flow (GMBF) and acidity  of gastric juice were measured. Results The EA+stress group showed that the UI and acidity of gastric juice were significantly reduced and the GMBF was significantly increased, there were obviously difference as compared with the stress group(P<0.01，P<0.001). The NTS electricity damaged group showed that the UI and acidity of gastric juice were significantly increased and the GMBF was significantly decreased, there were obviously difference as compared with the sham damaged groups or EA+stress group(P<0.05 or P<0.001).Conclusion NTS is involved in the process of electroacupuncture against stress gastric mucosal lesion.

    KEY WORDS: Nucleus tractus solitarious；Electricity damage；Electroacupuncture；Gastric stress ulcer

    针刺足三里穴可调节胃的功能，不仅可而且可以预防胃黏膜损伤，促进溃疡的愈合[1，2]，但其确切的机制目前尚未完全明了。延髓内脏带内部以孤束核（nucleus tratus solitarius,NTS）为中心，通过诸多核团之间存在的纤维联系，构成以延髓内脏活动调控为主的中枢，参与躯体性、内脏性感觉和内脏活动的调节，是一重要的应激反应调控中枢[3，4]，但NTS是否参与电针抗大鼠应激性胃溃疡作用尚未见报道。本实验在前期研究证明电针足三里穴对应激胃黏膜损伤保护作用的基础上，进一步观察电损毁NTS后，电针足三里穴对大鼠应激性胃溃疡的影响，以探讨NTS在电针保护胃黏膜损伤中的作用。                      

    1  材料和方法

    1.1  实验动物及分组

    健康成年雄性SD大鼠，共56只，体重230±20g，由本院实验动物中心提供。动物随机分为4组：①应激组；②EA+应激组；③NTS电损毁组；④NTS假损毁组。每组各14只大鼠,7只用于胃液酸度和UI的测定，7只用于GMBF的测定。

    1.2  NTS定位及电损毁

    实验大鼠用戊巴比妥钠（30mg/kg.ip）麻醉后，俯卧固定在DW?5型脑立体定位仪上（成都泰盟科技有限公司生产），参照paxinos和watson脑图谱[5]，将自制同轴不锈钢绝缘电极（外套管直径0.4mm，内芯直径0.2mm，尖端裸露0.5mm）先后分别插入两侧NTS（坐标：AP13mm，L或R0.6～0.8mm,H7.7～7.8mm）。BL?410生物信号处理系统（成都泰盟科技有限公司生产）输出端正极接电极内芯，负极接外套管，输出阳极直流电，损毁参数为连续单电流，强度1mA，频率50Hz，波宽0.5ms，持续1min，按先左后右顺序分别进行两侧NTS损毁。大鼠NTS损毁3天后电针30min再应激。假损毁组仅在两侧NTS插入电极停留1min而不通电。

    1.3  电针方法

    将大鼠放置特制的鼠笼内，双后肢充分暴露，用CDM1?2型双频针麻治疗仪电针大鼠双侧后肢足三里穴位，电刺激频率为4～16Hz,强度按1、2、3V顺序增递电压，每强度电针10min，共电针30min。

    1.4  应激性胃溃疡模型制备及溃疡指数

    大鼠禁食24h，禁水2h，乙醚轻度麻醉，将四肢及头部束缚于木板上。待大鼠清醒后，将木板垂直浸入23℃水中，水面平胸骨剑突部。浸水6h，将大鼠处死剖腹取胃，收集胃液后，将胃置于10%甲醛溶液固定。参照Guth[6]标准计算溃疡指数（UI）:溃疡面的长度小于1mm记1分,1～2mm记2分，2～3mm记3分，3～4mm记4分，大于4mm的将其分割为若干段记分，溃疡宽度大于1mm则分值×2，全胃累积得分，即为该大鼠的胃黏膜溃疡指数。

    1.5  胃黏膜血流量（GMBF）测定

    LDF?3型激光多普勒血流仪开机预热30min，在大鼠胃大弯处作一小切口，用LDF探头轻轻垂直地接触胃黏膜表面，待血流稳定后，在胃窦、胃体大小弯取4点测定，每点测1min，取其平均值，以信号电压值（mV）表示GMBF的相对值。

    1.6  酸排出量测定[7]

    动物应激后，乙醚麻醉剖腹取胃，并倾出胃内容物，收集于刻度离心管，以1500rpm离心10min，取上清胃液1ml，加蒸镏水2ml，以1g/L酚肽作为指示剂，0.01mol/L的NaOH溶液进行滴定。胃液的酸度计算：酸度（mmol/L）=0.01mol/L NaOH (ml)×0.01×1000×胃酸稀释倍数。

    1.7  统计学处理

    实验数据以均数±标准差( ±s）表示，组间比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

    2  结  果

    2.1  电针对UI、GMBF、胃液酸度的影响

    单纯应激组大鼠胃黏膜损伤严重，主要分布于胃腺部，表现为条索状出血性溃疡和点状出血性溃疡，GMBF明显减少，胃液酸度增加。EA+应激组大鼠胃黏膜UI、胃液酸度降低，GMBF提高，与单纯应激组比较有显著性差异（P<0.01,P<0.001），见表1。表1  各组大鼠胃UI、GMBF(mV) 、胃液酸度(mmol/L)变化(略 )***P<0.001

  

  2.2  损毁NTS对胃黏膜损伤作用的影响

    电损毁大鼠双侧NTS后，电针对胃黏膜损伤的保护作用明显减弱，胃黏膜UI和胃液酸度增加，GMBF减小，与假损毁组和EA+应激组相比较，有显著性差异（P<0.05～P<0.001），见表1。

　　3  讨  论

    应激性胃溃疡是一种常见的临床并发症，其确切机制尚不完全清楚。但目前较一致的意见认为，应激性溃疡的发病是由于各种应激因素作用于中枢神经及内分泌系统和胃肠道，使胃黏膜的保护作用与致病因素对胃黏膜的损害不相平衡的结果,其主要机制可能是高酸和胃黏膜缺血。机体处于应激状态时，首先作用于大脑，改变脑的内分泌机能，其中最重要的途径是下丘脑?垂体?肾上腺轴激活 [8]，分泌大量ACTH，使胃酸分泌增加，胃液pH值降低，引起胃黏膜自我消化。同时应激反应引起交感神经兴奋，肾上腺髓质分泌儿茶酚胺增多，机体为了保证心脑等重要器官的血供，体内的血液发生重新分布，内脏血管收缩，胃肠道血流量减少，胃黏膜缺血容易损伤，造成糜烂、溃疡和坏化[9]。针刺足三里穴可调节胃的功能，不仅可而且可以预防胃黏膜的损伤，促进溃疡的愈合。近年来有研究表明[2]，电针足三里穴可使胃黏膜血流量增加，血浆中肿瘤坏死因子和血栓素含量下降，对胃黏膜损伤有保护作用。本实验结果也显示，应激前电针足三里穴，大鼠胃黏膜损伤减轻，胃黏膜血流量增加，胃酸分泌减少，表明电针足三里穴有预防应激性胃黏膜损伤作用。

    NTS是脑干内接受内脏初级感觉传入信息的重要核团，并与脑内的很多核团和区域有着密切的纤维联系。生研究表明，NTS不仅是内脏感觉的中继站，同时也是心血管反射、吞咽和胃肠反射的初级调节中枢。NTS与内脏伤害性信息的传递及迷走神经镇痛也有密切关系，NTS既是接受内脏伤害性传入信息的部位，也是脑内产生抗伤害性作用的核团之一[10]。有报道[11]NTS参与室旁核加压素能神经元对大鼠胃缺血?再灌注损伤的调控作用。水浸束缚应激能导致胃溃疡的产生，可能与伤害性剌激激活脑干儿茶酚胺能神经元，后者进一步增强下丘脑室旁核、脑干NTS的活动有关[3]。本实验中大鼠NTS电损毁后，胃黏膜血流量减少，胃酸分泌增加，电针足三里穴对应激性胃黏膜损伤保护作用减弱，提示NTS参与了电针足三里穴抗应激性胃黏膜损伤的作用过程，但NTS在这一作用过程中的具体途径及机制还不清楚，仍有待进一步研究。

 

【文献】
[1]黎喜平,严洁. 针灸对胃黏膜损伤保护作用机制的研究进展[J].针刺研究，2005，30(1):60

[2]刘诵，许冠荪.电针足三里对应激性胃黏膜损伤的保护作用[J].安徽中医学院学报，2000，19（2）:27

[3] 郭洪志，王蕾.延髓内脏带与内脏器官功能障碍关系的研究进展[J].脑血管病杂志，2004，1(12):569

[4]李江山，严洁.孤束核与心胃相关初探[J].中医药导报，2005，11（4）:1

[5]Paxinos G,Watson C.The rat brain in stereotaxic coordinates[M].2nd rev.ed.sydney:Academic press,1986：F23-26,F70

[6]Guth PH, Aures D, Paulsen G.Topical aspirin plus HCL gastric lesions in the rat .Cytoprotective effect of prostaglandin cimetidine, and probanthine[J]. Gastroenterology,1979，76(1):88

[7]陈敬灵，李友娣，洪庚辛.海仙灵对实验性胃溃疡的影响[J].中药药理与临床，2000，16(6):38

[8]韩济生主编.神经原理[M].北京：北京医科大学出版社,2000：786

[9]张超，刘占奎，姜军，等.大鼠腹腔严重感染时胃黏膜血流量和pH值的变化[J]，第二军医大学学报，2004，26（7）：614

[10]陈译斌，王述菊，王亚文.损毁室旁核及孤束核对电针内关穴抗家兔心肌缺血作用的影响[J].中国中医急症,2005，14(8):759

[11]张咏梅，张建福，陈幽婷，等.胃缺血/再灌注损伤引起大鼠脑室旁核及孤束核c?fos表达[J].中国应用生理学杂志,2004，20(1):20