趋化因子受体CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞中的表达及其意义

【摘要】  目的 研究趋化因子受体CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞各亚群的表达，并与健康人进行比较，探讨其与临床病理分期之间的相关性。方法 分别收集健康人组、胃癌患者术前和术后外周血，进行荧光标记和红细胞裂解后，流式细胞仪检测CCR7在外周血淋巴细胞各亚群的表达，并分析其与临床病理分期之间的相关性。结果 与健康人组相比，术前胃癌患者外周血T细胞各亚群中CCR7的表达明显下降，术后CCR7在外周血T细胞各亚群的表达明显升高。CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞中的表达与临床病理分期密切相关，Ⅰ、Ⅱ期患者外周血淋巴细胞中CCR7的表达率明显高于Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者（P＜0.05）。结论 趋化因子受体CCR7在胃癌患者外周血淋巴细胞中的表达明显降低，其表达水平与胃癌的临床病理分期相关。

【关键词】  胃肿瘤；受体；趋化因子；淋巴细胞；T细胞亚群

　　To investigate the expression of chemokine receptor CCR7 in peripheral lymphocytes of gastric carcinoma and its relationship with clinicopathological characteristics. Methods  Peripheral blood was collected from 20 healthy persons and 35 patients who underwent curative gastrectomies. The expression of CCR7 in the lymphocytes was determined  by flow cytometry after red cells had died and labeled with fluorescence mAb. Results  Compared with the control group, the expression of CCR7 in the gastric carcinoma group was  significantly decreased. After curative gastrectomies, the expression level of CCR7  was increased and correlated with the TNM stage (P＜0.05). Conclusions  The expression of CCR7 is down?regulated in gastric carcinoma peripheral lymphocytes and relates to the clinical TNM stage.

　　Key words: Gastric tumor； Receptor； Chemokine； Lymphocytes； T lymphocyte subsets  

　　趋化因子受体是G蛋白偶连的跨膜受体，选择性地表达在靶细胞表面。趋化因子及其受体结合后与细胞骨架重排、内皮细胞黏附和细胞定向游动有关，在肿瘤中，趋化因子及其受体与肿瘤细胞的生长、血管生成及靶向转移有关［1］。目前对于趋化因子及其受体在肿瘤发生中作用的报道大多局限于肿瘤局部趋化因子及其受体的表达［2?3］。趋化因子及其受体在引导免疫细胞迁移至特定炎症组织及淋巴器官，诱发初级免疫应答产生的过程中也发挥了重要作用。本研究采用流式细胞仪技术检测了胃癌患者外周血各淋巴细胞亚群中CCR7的表达，并分析了其与临床病理分期之间的相关性，初步了解外周血趋化因子受体与胃癌发生发展的关系。

　　1  资料与方法

　　1.1  临床资料

　　胃癌患者共35例，为2007年4～10月在山东大学齐鲁普外科住院患者，年龄45～74岁，中位年龄为54岁。常规根治手术后按照国际抗癌联盟UICC1977年胃癌PTNM分期法进行分期，其中Ⅰ期患者6例，Ⅱ期8例，Ⅲ期14例，Ⅳ期7例，均经病理确诊。健康人组20例，为2007年4～10月在山东大学齐鲁医院体检中心进行健康体检者，年龄40～70岁，中位年龄为51岁。所有血样均于清晨空腹采集。

　　1.2  主要试剂和仪器

　　红细胞裂解液，FITC?、PE?、PE?Cy5?荧光标记的抗体CD3、CD4、CD8、CCR7、CD19及其同型，流式细胞仪（FACSCalibur）均为BD公司产品。

　　1.3  样品处理与检测

　　在流式细胞仪检测管中加入相应的荧光标记抗体后，分别加入100?μL健康人组、胃癌患者术前和术后的血样，室温孵育30?min后每管加入1?mL1×红细胞裂解液裂解红细胞。PBS洗涤3次，流式细胞仪检测细胞。Cellquest软件获取分析细胞，每个检测获取10?000个细胞。分组比较健康人、胃癌患者术前和术后的外周血中CD3+T细胞和CD19+B细胞的比例、CD3+CD4+T淋巴细胞中CCR7的表达以及CD3+CD8+T淋巴细胞中CCR7的表达。

　　1.4  统计学处理

　　应用SPSS11.0统计软件对实验数据进行处理，检测指标在不同组间的表达用χ2检验，检测指标与临床病理分期之间的相关性分析采用t检验。

　　2  结  果

　　2.1  外周血T细胞和B细胞检测结果

　　胃癌患者术前外周血中CD3+T淋巴细胞所占的比例为67.62%，CD19+B淋巴细胞所占的比例为10.8%，与健康人组相比（CD3+T：67.62% vs 65.69%；CD19+B：10.8% vs　10.44%）差异无统计学意义(P＞0.05)。胃癌患者术前和术后的外周血中CD3+T淋巴细胞和CD19+B淋巴细胞所占的比例也无明显变化（CD3+T：67.62% vs 67.79%； CD19+B：10.8% vs 10.35%）。

　　2.2  外周血淋巴细胞CD3+CD4+T细胞中CCR7的表达结果

　　见表1。由表1可见，外周血CD3+CD4+T细胞亚群中CCR7的表达在胃癌患者明显降低，与健康人组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。胃癌患者术后外周血CD3+CD4+T细胞中CCR7的表达明显升高，与术前相比较差异具有统计学意义（P＜0.05），但是与健康人组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。表１表达率（CD3+CD4+/CCR7）健康组（略）

    胃癌是临床常见的恶性肿瘤之一，是消化系统发病率最高的肿瘤，在发达国家，胃癌的发病率处于第四位，而家为第二位。我国是胃癌的高发区，其发病率和死亡率均超过世界平均水平的两倍。在近几年对胃癌的研究发现，趋化因子及其受体与胃癌的恶性程度密切相关，尤其是趋化因子受体CCR7成为近几年研究的热点。研究表明胃癌组织细胞高表达CCR7，且CCR7在分化型胃癌中的表达明显高于未分化胃癌的表达［4?5］。但是以前的报道大部分都是针对胃癌组织进行的研究。趋化因子及其受体同时也在淋巴细胞发挥免疫功能的过程中发挥重要作用［6?8］。

    本研究结果显示，与健康人相比，胃癌患者外周血淋巴细胞中T细胞和B细胞所占的比例没有明显变化，手术不能明显改变T细胞和B细胞的比例，提示胃癌的发病及进展不能够显著影响T细胞和B细胞在外周血的比例。但是T细胞各亚群中，CCR7的表达在各组之间存在明显的差别。与健康人组相比，胃癌患者CD3+CD4+T细胞以及CD3+CD8+T细胞中CCR7的阳性表达率明显降低。胃癌根治手术后，CD3+CD4+T细胞以及CD3+CD8+T细胞中CCR7的表达明显升高。提示CCR7的表达与胃癌的发病相关。研究报道，CCR7在T细胞表面的表达能够明显抑制免疫细胞的凋亡，从而促进免疫应答［9?10］。本研究结果表明，胃癌患者外周血淋巴细胞CCR7的表达明显下降，提示在胃癌的发生、发展过程中，外周血淋巴细胞的抗凋亡能力显著下降，同时由于趋化因子受体的降低，其向淋巴器官迁移的能力也会受到影响，从而影响抗肿瘤免疫应答的效应。
   
　　另外，本研究初步显示，CCR7在胃癌外周血淋巴细胞中的表达与胃癌的临床病理分期密切相关。表现为CCR7在外周血淋巴细胞各亚群中的表达随着胃癌临床病理分期的进展而降低。推测随着胃癌的进展，机体的抗肿瘤免疫效应进一步受到了抑制。

    趋化因子受体CCR7能够增强T细胞的抗凋亡能力，与配体结合后促进T细胞向炎症部位以及淋巴器官迁移，胃癌患者外周血淋巴细胞CCR7 表达的降低使其抗肿瘤免疫功能下降，这可能是肿瘤细胞逃逸免疫监视的机制之一。

【】
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