肿瘤组织库的建立与管理
作者：万美容，刘福民，刘小云
【摘要】 目的 探讨各种肿瘤组织标本的采集和保存以及肿瘤组织库的建立和信息化管理方法。方法 收集手术切除的肿瘤组织、癌旁组织、远端正常组织及患者的血清、血浆以及从肿瘤组织中提取的核酸，分别保存组织块、核酸、血清、血浆、淋巴细胞、干细胞等，液氮或-80℃冷冻保存；同时建立一套信息系统用于肿瘤组织库的管理，包括标本存放位置、标本使用、实验结果、综合查询、标本废除管理等。结果 收集标本55 例，其中良性肿瘤2例，恶性肿瘤53例，共400份标本，一年来肿瘤组织库运转良好。结论 建立肿瘤组织库可以对标本进行质量控制及信息化管理，保存少见、罕见标本，达到资源保存和共享的目的。
【关键词】 肿瘤；组织库；分子生物学；管理
Abstract:Objective To investigate the collection and conservation of tumor tissue specimens, and the approaches of information-based management of tumor database.Methods The tumor tissues, tumor-adjacent tissues, distal normal tissues removed from surgery and patient serum and extracted nucleic acids from tumor tissues were collected. Specimens of the tissue fragments, nucleic acids, serum, plasma, lymphocyte and stem cells, etc. were respectively conserved in liquid nitrogen or -80℃ refrigerator. Meanwhile, a database of information management of tumor tissue bank was established, including positions of sample placement, specimen use, lab results, comprehensive query, management of specimen disposal, etc.Results Specimens of 55 cases, including relevant specimens of 2 cases of benign tumors and 53 cases of malignant tumors, were collected. The tumor tissue database was established and managed according to the above-mentioned methods, which functioned with good results in the past 1 year.Conclusion The establishment of tumor tissue database enables the quantity control of the specimens and information-based management, as well as conservation of infrequent specimens and resource share.
20世纪末期，为满足医学研究的需要，国内外先后建立了多个单肿瘤组织库和多病种肿瘤组织库，使资源共享，实现资源的充分、合理利用。
肿瘤组织库的建立为肿瘤基础和临床研究提供了大量的标本来源，可开展肿瘤突变基因筛选、基因诊疗、肿瘤高危人群遗传咨询、恶性肿瘤流行特征及动态分析等工作［1-2］,并能通过病理资料库的建立,为肿瘤患者的个性化和随访提供帮助［3］。
本研究尝试建立各种肿瘤组织相关标本库并进行信息化管理，现报道如下。
1 材料和方法
1.1 标本留取、提取和保存方法
1.1.1 标本留取 术前由医生填写标本入库登记表，留取患者抗凝血和不抗凝血各2 ml，分离血浆和血清。手术中切下的肿瘤组织除留做病理检查标本外，剩余部分取黄豆大小组织块迅速放入已准备好的无菌容器，同时留取癌旁和正常组织各5 mm×10 mm，置入小液氮罐中。将肿瘤组织、癌旁组织和正常组织标本切成2 mm×5 mm，放入冻存管中，转移至液氮罐冻存，另留取100 mg肿瘤组织用于RNA的提取［4-5］。
1.1.2 RNA提取 试剂盒选用上海捷瑞生物工程有限公司高纯度总RNA快速提取试剂盒（离心柱型），按试剂盒说明书进行RNA提取。得到的RNA可立即使用，也可存放于－80℃备用。
1.1.3 血清、血浆的提取 术前留取的抗凝血和不抗凝血3000 r/min离心10 min，取上清放入冻存管中，-80℃冷冻保存。
1.2 标本的标记和储存 标本分装入带有橡皮垫圈的冻存管，旋紧盖子，防止冷冻后爆管。在冻存管上作好标记，包括编号、患者姓名、住院号、疾病种类、组织部位(或血清、血浆)。冻存管编号由存放位置坐标确定，包括存放设备编号、在液氮罐或冰箱中的位置坐标、在标本盒中的位置坐标。冻存管存放于标本盒中，侧面标记有按上述存放位置坐标确定的标本盒编号和标本存放日期。
1.3 信息化管理
1.3.1 患者信息录入 包括姓名、性别、年龄、随访联系方式、住院号、疾病种类、组织部位、病理诊断、病理号、样本数量、送样单位、送样医生、入库时间、出库时间、使用单位、使用人等。
1.3.2 标本信息录入 包括入库编号、入库类别、病变部位、组织部位、保存方式、预处理、收集人、收集方式、入库时间、送样单位、送样医生等。
1.3.3 标本使用管理 包括使用登记、出库编号、出库日期、入库号、标本原始位置、使用单位、使用人、经手人等。1.3.4 标本废除管理 包括废除编号、入库编号、标本原始位置、废除日期、废除原因、审批人等。
1.3.5 综合查询 可根据上述各种信息进行综合查询，做到单一或多个查询项目的不同组合查询［6-7］。
2 结 果
本研究共收集了良性肿瘤2例，包括肿瘤组织、癌旁组织、正常组织、RNA、血浆和血清共16份标本；共收集了恶性肿瘤53例，包括上述标本共400份。
提取了肿瘤组织、癌旁组织的RNA，均通过0.8%的琼脂糖凝胶电泳鉴定，证明所存储的标本适用于分子生物学研究。
建立了肿瘤组织库管理的一系列方法，以EXCEL软件统计肿瘤组织库的标本信息，一年来肿瘤组织库运转良好。
3 讨 论
长期以来我院始终没有建立起规范的科研型肿瘤组织库，未形成规范的标本保存方法。建立肿瘤组织库的目的是采集、保存和利用人类常见肿瘤的组织和血液标本,并对其进行的管理和质量控制，以充分利用现有的肿瘤资源,为人类疾病的基础和临床研究提供原始资料。建立肿瘤组织库的注意事项是：①进一步建立常见肿瘤的标准化肿瘤组织库以及高效而低损耗的肿瘤组织标本使用管理体系。标准化的肿瘤组织库中每个单独病例的资源都应该包括每次时的血清、肿瘤组织以及正常组织、病历记录以及病理结果,甚至随访资料, 能满足高水平、多层次研究的需要。②研究者进行研究后，适当提供结果，动态地完善相关病例的背景资料，此举可以使多项研究课题之间有关联性，同时也有效地减少重复性研究。③针对目前组织标本较多使用的领域（肿瘤组织DNA、RNA、蛋白）的研究，肿瘤组织库负责采用标准方法提取上述产物，提供高质量的产物，以减少标本损耗并充分利用，加快研究工作的进程。
为满足研究的需要，应尽量保证肿瘤组织库标本的完整性，避免DNA、RNA和蛋白的降解。应特别注意在取材、冻存和复苏的过程中，尽量避免RNA的污染以及细胞损伤。
肿瘤组织库的建立，为罕见肿瘤和一些家族性遗传病提供了标本来源，可通过肿瘤组织库开展对这些疾病的突变基因的筛选、基因诊疗及其流行病学特征和动态分析等，为科研工作节省时间，有效地利用资源。
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