胃癌的分化程度与细胞凋亡及增殖关系的研究

             作者：丁洪基，吴起嵩，董艳光，常峰，徐志秀，王东关

【摘要】  目的  通过研究不同分化程度的胃癌与细胞凋亡及增殖的关系，探讨细胞凋亡在胃癌发生中的作用。方法  应用原位细胞凋亡TUNEL检测方法结合免疫组织化学染色方法对81例胃癌患者进行了细胞凋亡及增殖的原位观察和比较。结果  高中分化腺癌的凋亡指数明显高于低分化腺癌组，高中分化腺癌与低分化腺癌之间，高中分化腺癌与印戒细胞癌之间，低分化腺癌与黏液腺癌之间，印戒细胞癌与黏液腺癌之间，凋亡指数差异有非常显著性（P<0.01）。结论  分化差的胃癌细胞有逃避细胞凋亡的机制。细胞凋亡受抑制可能在胃癌的浸润和转移中发挥重要作用。高中分化腺癌的凋亡指数高于低分化腺癌，这可能是高中分化腺癌生长较缓慢，预后较好的原因之一。
   
    【关键词】  胃癌；分化程度；细胞凋亡
    
      
    【Abstract】  Objective  To investigate action of apoptosis in gastric carcinogenesis by study the relationship between apoptosis and proliferation in gastric cancer.Methods  TUNEL method was used to detect apoptotic cells，immunohistochemical staining was used to detect the expression of Ki-67 in 81 gastric carcinoma.Results  In well and moderately differentiated adenocarcinomas the  apoptotic indexes(AI)was significantly higher than poorly differentiated adenocarcinomas.The difference of AI was remarkably between well and moderately differentiated adenocarcinomas and poorly differentiated adenocarcinomas and signet-ring cell carcinomas，poorly differentiated adenocarcinomas and mucinous adenocaecinomas，signet-ring cell carcinomas and mucinous adenocarcinomas.Conclusion  The poorly differentiated gastric carcinomas have a escape apoptosis mechanism.Apoptosis inhibited may exert important role in invasion and metastasis of gastric carcinomas.
   
    【Key words】  gastric carcinoma； differentiation；  apoptosis
   
    肿瘤的发生与不仅决定于肿瘤细胞的增殖，而且与肿瘤细胞的凋亡密切相关［1］。细胞凋亡是由基因调控的细胞主动死亡的过程，在肿瘤的发生中起着重要作用［2］。目前国内外对胃癌细胞增殖与凋亡的研究报道较少，且结果多不尽一致［3，4］。为了深入研究不同分化程度的胃癌与细胞凋亡及增殖的关系，探讨细胞凋亡在胃癌发生与发展中的作用，阐明胃癌的发生机制，我们应用原位细胞凋亡TUNEL检测方法结合Ki-67免疫组织化学染色方法对81例胃癌患者进行了原位观察，旨在揭示细胞凋亡与增殖在胃癌发生中的变化。
   
    1  资料与方法
   
    1.1  一般资料  收集胜利石油管理局中心自1993年1月～1994年11月间，临床及病理资料较完整的81例胃癌手术切除标本作研究对象。男69例，女12例，年龄29～83岁，平均57.1岁。所有病例手术前均未接受化疗、放疗或免疫。
   
    1.2  方法  标本经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，制成4μm厚连续切片。分别作HE染色、TUNEL原位细胞凋亡检测和免疫组化S-P法染色。所用第一抗体Ki-67为美国Maxim公司生产的单克隆抗体，S-P染色试剂盒为Maxim公司产品（购自福州迈新公司）。用不加一抗的切片作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照，用DAB显色，苏木素复染。
   
    1.3  结果判断
   
    1.3.1  凋亡指数（apoptosis index，AI）  光镜下选凋亡细胞最多的5个每高倍视野，每个视野计数100个细胞中凋亡细胞数，取其平均值为凋亡指数AI。用半定量表示：（-）AI＜5%；（＋）AI 5%～10%；（++）AI 11%～15%；（+++）AI＞15%。凋亡细胞核固缩呈圆形或椭圆形、蓝黑色，染色体沿核膜形成半月状或新月状。
   
    1.3.2  增殖指数(proliferation index，PI)  以Ki-67阳性细胞数表示细胞的增殖状况。 选择阳性细胞分布均匀的区域，以目镜测微网为观察单位，在400倍视野下计数网格中的阳性细胞数，每例计数10个网格，取其均值以百分数表示，作为细胞增殖指数PI。
   
    1.4  统计学方法  计数资料采用χ2检验，计量资料用（x±s）表示。
   
    2  结果
   
    2.1  Ki-67蛋白在胃癌中的表达情况  见表1。Ki-67蛋白阳性表达主要表现为细胞核呈棕黄色反应。在正常胃黏膜及慢性胃炎中，其阳性的增殖细胞多位于腺颈部上皮细胞的基底部。本组81例胃癌患者中，Ki-67表达在患者的性别、年龄、肿瘤的体积、发生部位、浸润深度、有无淋巴结转移及临床分期诸方面增殖指数差异均无显著性(P>0.05)。在组织学类型方面，唯有印戒细胞癌与鳞状细胞癌之间增殖指数差异有显著性（P<0.05），其他组织学类型之间，差异均无显著性(P>0.05)。

表1  不同组织学类型的胃癌细胞凋亡与增殖的关系  （x±s）

    2.2  细胞凋亡在胃癌中的表达情况  在正常胃黏膜及慢性胃炎中，凋亡细胞多位于黏膜表层上皮中，呈簇状分布。本组81例胃癌患者中，凋亡指数在患者的年龄、肿瘤的体积及有无淋巴结转移和临床分期方面差异均无显著性(P>0.05)。高中分化腺癌与黏液腺癌之间，差异无显著性（P>0.05），高中分化腺癌与鳞癌相比，差异有显著性（P<0.05），高中分化腺癌与低分化腺癌及印戒细胞癌之间凋亡指数差异有非常显著性（P<0.01）。低分化腺癌与印戒细胞癌或鳞癌之间，差异无显著性（P>0.05），低分化腺癌与黏液腺癌之间差异有非常显著性（P<0.01）。黏液腺癌与鳞癌之间，差异无显著性（P>0.05），黏液腺癌与印戒细胞癌之间，差异有非常显著性（P<0.01）。印戒细胞癌与鳞癌之间，差异有显著性（P<0.05）。
   
    3  讨论
   
    多细胞生物，在其生长发育的过程中，始终存在着细胞增殖与死亡的平衡，并借此维持机体的稳定性，推动着机体向生、老、病、死不同的方向。正常胃黏膜表面上皮细胞不合成DNA，其寿命大约为2～4天。表面上皮和已分化的腺上皮都是由腺颈部的增殖细胞产生的。上皮细胞的增殖与凋亡共同维持着胃黏膜细胞数量的动态平衡。本课题研究表明，在正常胃黏膜中，凋亡细胞多位于黏膜表层，形成一层“凋亡细胞带”，而增殖细胞多位于胃黏膜腺颈部上皮细胞的基底部，形成“增殖细胞带”。这种分布特征表现了胃黏膜上皮自底部向表层逐渐成熟、衰老、死亡的变化［5］。在胃癌中，其异常结构失去了凋亡带和增殖带的分布特征，表明胃癌存在细胞凋亡和增殖的调节紊乱［6］。
   
    本研究结果发现，高中分化腺癌的凋亡指数（15.42 ± 1.68）明显高于低分化腺癌组（5.52±0.82），高中分化腺癌与低分化腺癌之间，高中分化腺癌与印戒细胞癌之间，低分化腺癌与黏液腺癌之间，印戒细胞癌与黏液腺癌之间，凋亡指数差异均有非常显著性（P<0.01）。这与报道的结果相似［7，8］，提示分化差的胃癌细胞有逃避细胞凋亡的机制。细胞凋亡受抑制可能在胃癌的浸润和转移中发挥重要作用。高中分化腺癌的凋亡指数高于低分化腺癌，这可能是高中分化腺癌生长较缓慢，预后较好的原因之一。目前，已有文献报道，胃癌的预后不仅与肿瘤自身的增殖活性有关，还与肿瘤自身的凋亡活性有关，具有较高细胞凋亡指数的胃癌患者预后较好［9］。

【文献】

    1  王申五，武莎莎.凋亡与肿瘤.中华肿瘤杂志， 1999，21：308-309.    
    2  刘海峰，刘为纹，房殿春，等.胃癌细胞凋亡与胃癌患者临床预后的关系.第三军医大学学报，2000，22：1036-1038.    
    3  Jang TJ，Kim JR.Proliferation and apoptosis in gastric antral epithelial cell of patients infected with Helicobacter pylori.J Gastroenterol， 2000，35：312-314.    
    4  陈晓耕，王清水，施作霖.胃癌细胞凋亡指数的意义.福建医科大学学报，1999，33：286-288.    
    5  甘花田，欧阳钦.细胞凋亡与胃癌.四川医学，2000，21：329-330.    
    6  武忠弼.病，第3版.北京：人民卫生出版社，1995，171-176.    
    7  Kasagi N，Somyo Y，Shirai H，et al.Apoptotic cell death in human gastric carcinoma：analysis by terminal deoxynucleotidyl transferase=mediated duTP-biotin nick end labelling.J Cancer Res，1994，85(9)：939.    
    8  Shinohara T，Ohshima K，Murayama H，et al. Apoptosis and proliteration in gastric carcinoma： the association with histological type.Histopathology，1996，29：123-129.    
    9  许岸高.胃癌细胞凋亡与胃癌新策略.国外医学·肿瘤学分册， 1999，26：231-232.