脾虚湿盛型异位性皮炎和支气管哮喘患者的细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA的表达

            作者：张玉环，陈保疆，焦振山

【摘要】  目的  探讨脾虚湿盛型异位性皮炎(AD)和支气管哮喘(AS)患者外周血细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA表达的临床意义。方法  对102例(AD 61例， AS 41例)患者的外周血5ml应用反转录系统试剂盒及核酸测定仪进行吸光度测定。结果  两组患者IFN-γ mRNA阳性表达显著低于对照组(P<0.01)，但IL-4 mRNA与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。AD和AS IFN-γ mRNA阳性表达率，IL -4 mRNA阳性表达率比较两组之间差异无显著性(P>0.05)。结论  异病同证指几种不同疾病，在疾病过程中出现了大致相同的病理，大致相同的证，脾虚湿盛型的AD与AS均显示免疫失衡状态。

    【关键词】  异位性皮炎  支气管哮喘  干扰素γ  白细胞介素4

    mRNA expression of IFN-γ and IL-4 in patients with atopic dermatitis and asthma

       【Abstract】  Objective  To investigate the significance of the mRNA expression of IFN-γ and IL-4 in the atopic dermatitis(AD) and asthma(AS) patients who were diagnosed deffciency of spleen with overabundance of damp according to the traditional Chinese medicine theory.Methods  The peripheral blood was collected in 102 cases(AD 61 cases，AS 41 cases)， analyzed the mRNA expression of these cytokine using RT-PCR system kit.Results  Compared with the control group， the mRNA expression of IFN-γ in AD and AS patients were both significantly decreased (P<0.01)，and IL-4 had no statistical significance(P>0.05) .However， the expression of IL-4 and IFN-γ had no significant difference between AD and AS (P>0.05).Conclusion  There are both immune imbalance in AD and AS， the abnormal mRNA expression of IL-4 and IFN-γ are part of immune profile in AD and AS patients who were diagnosed deficiency of spleen with overabundance of damp.

    【Key words】  atopic dermatitis  asthma  IFN-γ  IL-4

    异位性皮炎(atopic dermatitis，AD)和支气管哮喘(asthma，AS)均属于Ⅰ型变态反应性疾病，脾虚湿盛是两种疾病临床常见的中医证型，临床表现的“证候”大多相同，中医病机一致。本文对102例(AD 61例，AS 41例)患者的外周血细胞因子IFN-γ和IL-4的mRNA表达进行检测，探讨中医脾虚湿盛型AD与AS mRNA在细胞因子表达的临床意义。

    1  资料与方法

    1.1  临床资料  102例患者来自2002年1月～2004年2月天津市长征变态反应科门诊，AD患者61例，其中男35例，女26例，年龄4～24岁，平均(13.6±9.8)岁，病程(1.5～ 11.5)年，平均(5.4±3.7)年；AS患者41例，其中男24例，女17例，年龄12～38岁，平均(16.4±8.3)岁，病程1～10.5年，平均(6.5±3.6)年。对照组20例，为志愿献血者，其中男12例，女8例，年龄18～23岁，平均(20.7±4.3)岁。

    1.2  诊断标准  AD诊断标准参照1994年美国Williams等提出的AD诊断标准［1］。AS诊断标准参照中华医学会呼吸病学分会1997年《支气管哮喘防治指南》［2］。脾虚湿盛证参照中医诊断学标准［3］。

    1.3  主要仪器与试剂

    1.3.1  主要仪器  PCR仪(PTC-200型MJ Research公司，美国)；超净工作台(苏净公司，苏州)；台式高速离心机(Eppendorf公司，德国)；核酸自动测定仪(Eppendorf公司，德国)；电泳仪(北京六一仪器厂)；凝胶自动成像系统(UVP，美国)。

    1.3.2  主要试剂  反转录系统试剂盒(美国PROMEGA公司)；DEPC液(Sigma公司)；氯仿，异丙醇(天津化学试剂厂)；引物序列来源于［3］。

    1.4  实验方法  单个核细胞总RNA提取：取患者和正常对照组空腹静脉血5ml，肝素抗凝，在5ml淋巴细胞分离液面上加入等量处理后的血液样本，离心，分离单个核细胞。采用核酸测定仪在260nm和280nm波长下对样品进行吸光度测定，以确定RNA提取的质量，OD260／280在1.8～2.0视为提取的RNA纯度较高。

    2  结果

    2.1  外周血单个核细胞总RNA提取结果  琼脂糖凝胶电泳后可以清楚地看到所提取的总RNA的28S和18S两条清晰的 rRNA条带，这说明提取的总RNA完整，无明显降解，见图1。

   
图1  提取RNA电泳图

    2.2  RT-PCR结果  用图像分析仪对胶片上每一泳带进行光密度扫描，结果用各细胞因子检出阳性率表示。见图2，图3。

  
  图3  IFN-γ mRNA表达电泳图电泳从左到右依次是DNA-Marker、β-actin和IFN-γ

    2.3  3组人群IFN-γ和IL-4 mRNA RT-PCR 产物检出情况  见表1。

　   表1  3组人群IFN-γ和IL-4 mRNA RT-PCR产物检出情况  例(％)

                                          注：3组人群IFN-γ和IL-4 mRNA阳性表达率间比较，*P<0.01

    两组患者IFN-γ mRNA阳性表达率均显著低于对照组(P<0.01)，3组IL- 4 mRNA阳性表达率间比较差异无显著性(P>0.05)。

    AD组与AS组IFN-γ mRNA阳性表达率之间比较差异无显著性(P>0.05)；并且AD组与AS组IL-4 mRNA阳性表达率比较差异无显著性(P>0.05)，结果提示 AD、AS患者IL-4 mRNA表达水平低于正常人。

    2.4  统计学方法  数据经SPSS10.0统计软件处理，各组间进行率的χ2检验。

    3  讨论

    异病同证是指几种不同的疾病，在疾病过程出现了大致相同的病机，大致相同的证，疾病在其自身过程中出现了病因同源，病机吻合，它以一组相关的症状和体征，不同程度地揭示病因、病机、病位、病性、病势。AD与AS同属Ⅰ型变态反应性疾病，免疫功能的失衡是AD和AS发生的主要原因，均属TH2优势疾病，两病均存在着T细胞亚群，体液免疫血清总IgE值升高，CD4+T细胞分泌的IL-4和IFN-γ的表现异常。本文对脾虚湿盛证的102例AD和AS患者进行了IFN-γ和IL-4 mRNA表达的检测，检测结果显示：61例AD患者外周血单一核细胞IFN-γ 17例(27.9%)，IL-4 37例(60.6%)；41例AS患者外周血单一核细胞IFN-γ 11例(26.8%)，IL-4 24例(58.5%)；而20例对照组IFN-γ 18例(90.0%)，IL-4 10例(50.0%)，AD和AS的IFN-γ均低于正常对照组(P＜0.05)，差异有显著性；而IL-4 AD与AS组均高于正常对照组，但差异无显著性(P均>0.05)。

    本文AD和AS两组患者外周血IFN-γ CD4+细胞比率均低于正常组，而外周血 IL-4 CD4+细胞比率明显高于正常组。IFN-γ是一种由TH1产生的重要的CD4+／CD8+平衡调节因子，可抑制IL-4和IL-4介导的IgE生成。TH1细胞和TH2细胞在体内通过分泌不同的细胞因子促进自身的发展，抑制对方的发展。TH1细胞分泌IFN-γ可抑制TH2的增殖［4］，促进自身的增殖，TH2细胞分泌IL-4，称为TH2型细胞因子，介导体液免疫，如激活β细胞和嗜酸粒细胞［5］。这些细胞因子积极参与各种生理及病理过程，在正常情况下TH1／TH2维护着动态平衡。目前判断TH1／TH2细胞水平主要是通过分别测定IFN -γ和IL-4来间接反映其体内水平和功能。本文对102例AD与AS分别测定后发现， IFN-γ低于正常对照组，经比较差异有显著性(P<0.05)，而IL-4高于正常对照组，经比较差异无显著性(P>0.05)。本文研究进一步证明了脾虚湿盛型的AD和AS细胞因子表达的一致性，从分子生物学基础进一步证实两病异病同证的理论依据。

    【】

    1  顾恒，陈祥生，陈崑.特应性皮炎诊断标准的评价中.华皮肤科杂志，2000，33(4)：222-226.
    2  第二届全国支气管哮喘学术会议纪要.中华结核和呼吸杂志，1997，20(5)：265.
    3  朱文锋.中医诊断学.北京:中医药出版社，1997，167.
    4  Gajew Skit，Fitch F.Anti Protiferative effect of IFN-C in immune regulation，IFN-gama inhibits the proliferation of TH2 but anti TH1 murine helper T lymphocyte clones.J Immunol，1998，140：4245-4252.
    5  Coffman RL，Carty J A.T-cell activity that enhances polyclonal IgE production and its inhibition by interferon gama.J Immunol，1986，136：949.