灵芝水煎剂对应激小鼠血清胰岛素样生长因子

                          作者：左永昌，唐和生，彭菲，刘宗生，文安华，刘继志

【关键词】  灵芝；束缚应激；胰岛素样生长因子

　　Effect of aqueous extract from Ganoderma Lucidum on levels of serum insulinlike growth factorI in restraint stressed mice

　　【Abstract】 AIM: To investigate the effect of aqueous extract from Ganoderma Lucidum on levels of serum insulinlike growth factorI (IGFI) in restraint stressed mice. METHODS: The different doses of aqueous extract from Ganoderma Lucidum were given orally for 10 d in mice before restraint stress, and its serum IGFI was assayed by using the radioimmunoassay (RIA) after restraint stress for 20 h. RESULTS: The level of serum IGFI in restraint stressed mice given aqueous extract from 8 g/（kg・d）Ganoderma Lucidum before restraint stress was increased by  32% as compared with that in restraint stress control group (P<0.01). CONCLUSION: Taking orally aqueous extract from Ganoderma Lucidum could resist the decrease of serum IGFI due to restraint stress in mice, and could prevent or alleviate damages aroused by the restraint stress in mice.
 
　　【Keywords】 Ganoderma Lucidum; restraint stress; insulinlike growth factorI

　　【摘要】 目的： 探讨灵芝水煎剂对束缚应激小鼠血清胰岛素样生长因子I(IGFI)含量的影响. 方法： 以不同剂量的灵芝水煎剂给应激前的小鼠灌胃10 d，应激20 h后用放射免疫分析法（RIA）测定其血清IGFI的含量. 结果： 束缚应激前以8 g/（kg・d）灵芝水煎剂灌胃的小鼠，束缚应激期间血清IGFI含量比单纯应激小鼠增加了32% (P<0.01). 结论： 口服灵芝水煎剂有对抗应激所致的血清IGFI含量下降的作用，能预防或减轻应激给机体带来的危害.
 
　　【关键词】  灵芝；束缚应激；胰岛素样生长因子I

　　0引言
　　
　　灵芝自古被列为“扶正固本”、“滋补强壮”的精品药物，医学研究也证实灵芝对机体生理功能的影响有“扶正固本”式的调节作用，如平衡机体过强或过低的免疫功能［1］. 显然，这种调节作用对以激素失衡和生理功能紊乱为主要特征的应激来说，可谓针锋相对、对症下药. 我们曾观察到束缚应激小鼠血清胰岛素样生长因子I（IGFI）含量明显减少［2-3］，本实验我们观察了灵芝水煎剂对应激小鼠血清IGFI含量的影响.
 
　　1材料和方法

　　1.1材料Balb/c纯系雌、雄性小鼠，鼠龄6~8 wk，体质量22~26 g，北京大学医学部动物中心提供. 羊抗兔IgG为北京大学医学部免疫研究中心自制品，人基因重组胰岛素样生长因子I(rhIGFI)和多克隆IGFI抗血清购自Promega公司，Na125I为中科院上海原子能研究所产品，硫酸鲱鱼精蛋白（纯度100%, Prolamine）和Iodogen购自Sigma公司. 灵芝（赤芝）购自北京同仁堂，产地山东，常规水煎2次，两次药液经纱布过滤后混合并浓缩至1 g生药/1 mL, 4℃保存，用时以生理盐水稀释.
 
　　1.2方法

　　1.2.1动物分组实验小鼠随机分成17组，每组10只. 正常对照组小鼠饲养方法不变；单纯应激组小鼠不喂药，但每天加喂生理盐水1次，每次0.4 mL，连续10 d；应激前喂药组和喂药后不应激组分别以4 g/（kg・d）, 8 g/（kg・d）, 16 g/（kg・d）三个不同剂量的灵芝煎剂灌胃，1次/d，每次0.4 mL，连续10 d. 应激前喂药组小鼠分别于应激期和应激后第3日、第6日、第12日进行血清IGFI含量测定，分析其变化情况.
 
　　1.2.2小鼠应激与血清制备灵芝灌胃10 d后分别将小鼠束缚于特制笼中20 h，眶静脉取血，血液置4℃冰箱中凝固4~6 h后低速离心分离血清.
 
　　1.2.3小鼠血清IGFI含量放射免疫分析Iodogen法制备125IrhIGFI,标记率45%，比放射性125147 uCi/ug. 实验参照Mohan等［4］描述的方法，以logitB/BO法作标准曲线并求出各样品IGFI的含量. 抗清和方法学的质量控制:抗体特异性经双向免疫扩散法测定，与家兔血清无交叉反应；BO变异系数分析结果为批内CV 2.31%，批间CV 3.90%；最小可测剂量按零标准平均B%减去两倍批内CV，最小检出值为7.50 pg/ml；回收试验： 按标准曲线制作程序，将不同量标准品加入反应体系中的5次回收试验，回收率平均为96%. 此外，RIA 缓冲液配制中以Tween20代替小牛血清，以避免血清中含有IGFI. 实验和γ计数使用北京大学医学部免疫研究中心603室、北京大学医学部人类疾病基因研究中心的现有设备.
 
　　统计学处理： 用统计软件SPSS10.0进行统计分析，计量数据以x±s表示，两两比较用t检验，P<0.05有统计学意义.
 
　　2结果

　　2.1灵芝对应激期间小鼠IGFI含量的影响单纯应激组小鼠血清IGFI含量（68.0±3.3 ng）比正常对照组小鼠（129.0±2.6 ng）减少了47%（表1）；应激前每天每只用8 g/kg以上灵芝灌胃的小鼠，应激后的血清IGFI含量均比单纯应激小鼠的血清IGFI含量明显增加，其中应激前每天每只用8 g/kg灵芝灌胃的应激小鼠血清IGFI含量（90.0±2.9 ng）比单纯应激的小鼠血清IGFI含量增加了32%（P<0.01）；给予灵芝灌胃而不进行应激的小鼠血清IGFI含量比正常小鼠略有增加，但无统计学差异（P<0.05).
 

　　表1灵芝对小鼠应激期间血清IGFI含量(ng)的影响(略)

　　2.2灵芝对恢复期小鼠IGFI含量的影响应激后的第3日，应激前10 d内每天每只喂药8 g/kg的应激小鼠其血清IGFI含量（122.0±2.9）比没有喂灵芝煎剂的单纯应激小鼠血清IGFI含量（89.0±3.0）增加了37%（P<0.01），接近正常小鼠的水平. 应激后的第6天，血清IGFI含量则恢复到正常水平（表2）.
 
　　表2灵芝对小鼠恢复期血清IGFI含量的影响［略］

　　3讨论
　　
　　应激是一种常见的现象，恐惧、悲伤、高度精神紧张或严重疾患、身体伤害等均可诱发机体处于应激状态. 应激时机体的内环境会发生很多变化，神经内分泌免疫系统功能紊乱尤为突出，体内激素、细胞因子间显著失衡，如生长激素（GH）减少和固醇类激素、儿茶酚胺类激素增多，血清IGFI含量也明显减少. 本实验沿用建立了多年的IGFI放免分析法检测束缚应激小鼠血清IGFI含量，得到与以前一致的结果. 现已知IGFI有广泛的生物学效应，神经细胞、免疫细胞、生殖细胞、内分泌细胞以及许多组织上分布了IGFI的受体，应激时体内IGFI如此减少无疑会严重影响这些组织细胞的功能或生长. 因此，设法提高血清IGFI浓度对预防或应激带来的损害有积极意义. 本实验的结果表明灵芝能对抗小鼠应激期间的血清IGFI含量下降和促进小鼠应激后血清IGFI浓度的恢复.
 　　
　　血清IGFI浓度的稳定取决于IGFI的合成、分泌、消耗和与血清IGFs结合蛋白（IGFBP）结合情况等因素的变化，任何一个因素的变化都将引起血清IGFI含量的改变. 应激时生长激素（GH）的减少和固醇类激素、儿茶酚胺类激素的增多是引起血清IGFI含量减少的原因之一. 固醇类激素能促进IGFBP1生成，而更多的IGFI与IGFBP1结合后其生物活性也随之下降；儿茶酚胺类激素能通过降低葡萄糖转运蛋白转运能力抑制胰岛细胞分泌胰岛素［5］而使血清IGFI减少. 有研究证明胰岛素可刺激肝脏分泌IGFI［6］，另据Peter等［7］报道，给手术应激者输入胰岛素后明显增强了体内IGFBP3的水解活性，使组织、血液中的游离IGFI升高. 正常情况下血清IGFI约有75%与IGFBP3呈结合状态. 较早的研究证明灵芝有促进胰岛素分泌作用，最近研究发现灵芝可通过促进胰岛细胞葡萄糖转运蛋白的表达而增强胰岛细胞分泌胰岛素［8］. 由此可见，灵芝促进胰岛素分泌是提高应激小鼠血清IGFI浓度的一条重要途径. 目前还没有证据表明灵芝对固醇类激素、儿茶酚胺类激素的分泌有调节作用. 许多资料显示灵芝提高应激小鼠血清IGFI浓度是多途径的，灵芝能保护肝脏和促进白细胞DNA、RNA的合成，而肝细胞是IGFI的主要合成细胞，T, B淋巴细胞也是IGFI的潜在来源［9］. 我们在研究应激状态下的T, B淋巴细胞体外自分泌或旁分泌IGFI的机制时（待另文报道），却未观察到灵芝有直接诱导T, B淋巴细胞的IGFI mRNA表达. 灵芝究竟如何作用于这些靶细胞和有哪些途径调节体内IGFI水平还需要做很多工作，同时我们以为在对灵芝药效机制的研究中把中医的“整体性、调节性和多成分参与”的主要药理特点考虑进去可能会有助于了解这些“谜”. 从对灵芝多糖的研究看，灵芝的主要生物活性成分是β1, 3键的葡聚糖，实际上人体肠道内无法酶解β1, 3键的葡聚糖，但研究证明口服灵芝多糖同样能发挥它的生物活性作用. 总之，本实验根据中医药理特点，口服灵芝水煎剂，提高了应激机体的血清IGFI浓度，有利于诸如考生、航空员、消防员、有关患者等广大人群预防或减轻应激的危害，且方法简便、有效.
 
　　【】

　　［1］ 王坤，吴光，戴盛明. 广西灵芝对小鼠免疫功能的实验研究［J］. 广西医科大学学报，2003,20（6）:871.

　　［2］ Zuo YC, Li YF, Mei L, et al. Brain interleukin1 is involved in generation of the serum suppressive factor induced by restraint stress in mice［J］. Neuroimmunomodulation, 1995, 2: 82-87.
 
　　［3］ 左永昌，朱玉珍，李文，等. 束缚应激小鼠血清胰岛素样生长因子I含量的影响［J］. 井冈山医专学报，2000,7（3）:1-2.

　　［4］ Mohan S, Bautista CM, Herring ST, et al. Development of valid methods to measure insulinlike growth factor I and II in bone cell conditioned medium［J］. Endocrinology, 1990,126:2534-2540.

　　［5］ Kuroda M, Honnor RC, Cushman SW, et al. Regulation of insulinstimulated glucose transport in the isolated rat adipocyte cAMPindependent effects of lipolytic and antilipolytic agents［J］. J Boil Chem, 1987,262:245-253.

　　［6］ Bondy CA, Underwood LE, Clemmons DR, et al. Clinical uses of insulinlike growth factor I ［J］. Ann Intern Med, 1994,120:593.

　　［7］ Bang P, Nygren J, Christine CS, et al. Postopertive induction of insulinlike growth factor binding protein3 protelytic activity: Relation to insulin and insulin sensitivity［J］. J Clin Endocrinol Metab, 1998,83:2509-2515.

　　［8］ 张慧娜，林志彬. 灵芝多糖对大鼠胰岛细胞分泌胰岛素功能的影响［J］. 临床药与治疗学，2003，8(3)：265-268.

　　［9］ Baxter JB, Blalock BJ, Weigent DA, et al. Characterization of immunoreactive insulinlike growth factor I from leukocytes and its regulation by grwth homone［J］. Endocrinology, 1991,129:1727-1734.