Ncadherin在非小细胞肺癌组织中的表达及临床生物学意义
作者：张卫强 王云杰 林华 周勇安 程庆书 刘锟 李小飞 王小平
【关键词】 钙黏着糖蛋白类
Expression of Ncadherin in patients with primary nonsmall cell lung cancer and its clinical significance
【Abstract】 AIM： To explore the expression level of Ncadherin gene in patients with primary nonsmall cell lung cancer (NSCLC). METHODS: The expression of Ncadherin protein was detected in 90 NSCLC tissues by immunohistochemistry. RESULTS: The positive rate of Ncadherin expression in NSCLC tissues was 333%(30/90). No significant difference of Ncadherin expression was found in NSCLC tissues of squamous cell carcinoma (30%) and adenocarcinoma (35%)（P>005）. The positive rate of Ncadherin expression (4706%) in the NSCLC tissues of Ⅲ stage was significantly higher than that in NSCLC tissues ofⅠandⅡstages (25%) (P<005). The positive rate of Ncadherin expression (4231%) in the NSCLC tissues of N1, 2 and 3 groups was significantly higher than that in the NSCLC tissues of N0 group (2105%) (P<005). Ncadherin expression rate was related to the lymph node metastasis (P<005) and TNM stages of lung cancer (P<005), but not to the histological classification. CONCLUSION: Ncadherin protein expression may be associated with the invasion and progression of NSCLC.
【Keywords】 cadherins; carcinoma,nonsmallcell lung;imunohistochemistry;lymphatic metastasis
【摘要】 目的： 研究N cadherin（神经性钙黏附分子）在非小细胞肺癌组织中的表达及临床生物学意义.方法： 常规石蜡包埋切片行免疫组织化学检测90例非小细胞肺癌组织中N cadherin的表达.结果： 90例非小细胞肺癌组织中N cadherin表达阳性的例数为30例（333％）；34例Ⅲ期患者中Ncadherin阳性率4706％，56例Ⅰ、Ⅱ期患者中Ncadherin阳性率25％，差异具有显著性意义（P<005）.有淋巴结转移的患者中Ncadherin阳性率4231％，无淋巴结转移的患者中N－cadherin阳性率2105％，差异具有显著性意义（P<005）.Ncadherin在肺腺癌和鳞癌中的表达无显著性差异（P>005）.N cadherin在非小细胞肺癌组织中的表达与其分期、淋巴结转移有关.结论： Ncadherin可能参与非小细胞肺癌侵袭和转移.
【关键词】 钙黏着糖蛋白类; 癌，非小细胞肺，免疫组织化学；淋巴转移
0引言
恶性肿瘤的侵袭和转移严重威胁着患者的生命.钙黏附分子家族（cadherin family）和肿瘤的侵袭和转移有密切的关系，其中以上皮性钙黏附分子（Ecadherin）和神经性钙黏附分子（Ncadherin）分布最为广泛.Ecadherin已经被认为是肿瘤转移的抑制因子，在恶性肿瘤组织中的表达减少.最近研究表明，N－cadherin在前列腺癌的表达增多，并且在引起肿瘤的浸润和转移方面有比Ecadherin的减少更为重要的作用［1］.本试验研究非小细胞肺癌组织中Ncadherin的表达及其转移的关系.
1材料和方法
11组织标本和临床资料标本取自2003-06/2004-05在我院胸外科住院手术切除的肺癌组织90（男60，女30）例.年龄40～74（平均555±85）岁.所有患者术前均未行化疗和放疗.所有标本均经病理证实，其中鳞癌50例，腺癌40例.按1997年UICC标准进行TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期 36例，Ⅲ期34例.每例标本于手术切下后立即取癌组织3 cm3大小，标本均经40 g/L甲醛固定，常规制作石蜡包埋切片，连续4 μm切片.另取同期需手术切除肺良性疾病的正常肺组织30例作为对照组.
12方法
121主要试剂鼠抗人Ncadherin单克隆抗体为美国Transduction Laboratories公司产品，辣根过氧化酶标记兔抗鼠IgG（Dako Envision）购自丹麦Dako公司.
122免疫组化染色常规脱蜡、水化，30 g/L双氧水，微波抗原修复，100 mL/L正常羊血清封闭.分别滴加1∶150 Ncadherin抗体，4℃过夜，滴加辣根过氧化酶标记兔抗鼠IgG,37℃ 1 h, DAB显色，苏木素复染，透明树胶封片.阴性对照用PBS代替一抗，阳性对照为已知的阳性胃癌组织.
123结果判定免疫反应染色阳性病例（＋）： 棕色颗粒样，染色均匀，切片中阳性细胞率≥50％.阴性病例（－）： 所有细胞均呈阴性或阳性细胞率＜5％.
统计学处理： 采用χ2检验，P<005有统计学意义.
2结果
21Ncadherin蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达免疫组化染色结果显示，Ncadherin免疫组化阳性产物主要定位于细胞膜／质，偶见定位于细胞核.90例非小细胞肺癌组织中Ncadherin表达的阳性率为333％（30／90），30例正常肺组织中Ncadherin无表达（Fig 1,2).
图1非小细胞肺癌组织中N－cadherin蛋白的表达 略
22Ncadherin蛋白的表达与临床病理特征的关系34例Ⅲ期患者中N－cadherin阳性率4706％，56例Ⅰ、Ⅱ期患者中Ncadherin阳性率25％，差异具有显著性意义（P<005）.有淋巴结转移的患者中Ncadherin阳性率423％，无淋巴结转移的患者中Ncadherin阳性率2105％，差异具有显著性意义（P<005）.Ncadherin在肺腺癌和鳞癌中的表达无显著性差异（P>005,Tab 1）.
图2PBS代替一抗作为阴性对照 略
表1非小细胞肺癌组织中Ncadherin蛋白的表达及与临床病理特征的关系 略
3讨论
Cadherin家族是由一系列结构和功能相似的单链跨膜糖蛋白组成.经典的Cadherin蛋白按其最初来源分为： E（上皮）、N（神经）、P（胎盘）3种，分子量均约为120 ku.主要参与介导钙离子依赖的同型细胞间的黏附.该家族的特点是既可以作为受体，又可以作为配体按嗜同类结合方式而相互结合，在维持正常组织结构方面起着重要的作用.
目前研究认为，Ecadherin是作为一种肿瘤抑制基因而发挥作用，Ecadherin蛋白的表达缺失与肺癌的发生、有密切的关系.在人类肺癌形成过程中，Ecadherin基因的表达减少，淋巴结转移的患者Ecadherin基因的表达明显减少.肿瘤的TNM分期越晚，Ecadherin的表达水平就越低，其预后就越差［2-5］.因此，Ecadherin基因是做为一种抑癌基因而发挥作用的，Ecadherin表达下降，其介导的细胞黏附功能受损，肿瘤细胞连接松散，容易脱落发生转移.
近年来研究发现，Ncadherin对于肿瘤上皮细胞及表达Ncadherin的血管平滑肌细胞和外皮细胞之间的黏附起着重要的作用.在肿瘤形成的过程中，Ncadherin的表达有助于血管形成及上皮细胞－间质细胞的迁移，从而使肿瘤细胞更加富于侵袭性，易于转移［6］.Utsuki等［7］学者发现在脑胶质母细胞瘤和星形细胞瘤中Ncadherin的表达增加并且和肿瘤的病理分级相关，而Ecadherin的表达减少.Makagiansar等［8］发现Ncadherin可以增加恶性T细胞瘤对上皮细胞的黏附力,使其更容易发生转移.Suyama等的研究发现Ncadherin的增加可以通过FGF激活MAPKERK信号转导途径，诱导MMP9 基因表达，有利于肿瘤血管的形成，使肿瘤易于生长和转移［9］.
Tomita等［10］研究认为在前列腺癌中有“cadherin转换现象”, 即在Ecadherin表达减少的区域Ncadherin的表达增多, 并且和肿瘤的分化程度有关.cavallarodeng 认为在恶性肿瘤组织中存在“cadherin转换现象”，即Ecadherin表达减少而Ncadherin的表达增多，其确切机制尚不清楚.可能在恶性肿瘤发展过程中，Ecadherin表达增多可能是早期事件，接下来Ncadherin的表达增多，诱导Ecadherin表达减少，使细胞恶性程度增加，促进肿瘤血管形成和转移［11］.
在我们的研究中，非小细胞肺癌组织中Ncadherin表达的阳性率为333％（30／90），并且和肺癌的分期和转移有密切的关系.Ⅲ期患者Ncadherin阳性率高于Ⅰ、Ⅱ期患者（4706％vs 25％）；有淋巴结转移的患者中Ncadherin阳性率高于无淋巴结转移的患者（423％vs 2105％）.我们的试验也说明，Ncadherin也参与了非小细胞肺癌发展过程中的浸润和转移.
总之，在非小细胞肺癌的发展过程中，Ncadherin的表达增多，可能有利于癌细胞的浸润和转移，其确切机制尚待阐明.
【】
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