慢性肾小球肾炎患者血清β1和M2受体自身抗体的变化

                    作者：赵林双，廖玉华，王敏，向光大，候洁，乐岭，兰天飚，王旭，王平

【关键词】  肾小球

    Changes of autoantibodies against β1 adrenergic receptor and M2 cholinergic receptor in chronic glomerulonephritis with renal failur

    【Abstract】 AIM: To explore the role of autoantibodies against M2 muscarinic cholinergic receptor（M2 receptor） and β1 adrenergic receptor（β1 receptor）in the development of chronic glomerulonephritis (CGN) with renal failure. METHODS:  The epitopes of the second extracellular loop of M2  receptor (169-191) and β1 receptor (197-222) were synthesized and used respectively to screen serum autoantibodies from patients with CGN with renal failure (n=66), hypertension patients without renal failure (n=58) and healthy blood donors (n=40, control) by ELISA. RESULTS:  In CGN patients with renal failure, the positive rates of the autoantibodies against β1 receptor and M2 receptor were 62.1% and 48.5% respectively, which were both higher than those in the hypertension patients without renal failure (19.0% and 20.7% respectively) and the healthy donors (17.5% and 15.0% respectively) (P<0.01). CONCLUSION:  These autoantibodies against β1 receptor and M2 receptor may play some important roles in the pathogenesis of CGN with renal failure.

    【Keywords】 chronic glomerulonephritis;  receptors;   autoantibodies

    【摘要】 目的：探讨M2受体和β1受体自身抗体与慢性肾小球肾炎（CGN）发病的关系. 方法：以合成的M2受体和β1 受体多肽片段为抗原，用ELISA技术检测66例CGN患者、 58例高血压无肾损害患者及40例正常人血清中M2和β1受体自身抗体. 结果：CGN组β1和M2受体抗体阳性率分别为62.1%和48.5%，明显高于高血压无肾损害组（19.0%和20.7%）及正常对照组（17.5%和15.0%）（P<0.01）. 结论：血清中M2和β1受体自身抗体可能与CGN发病有关.

    【关键词】 慢性肾小球肾炎； 受体； 自身抗体

    0引言

    近来研究发现在难治性高血压患者血清中，检出抗AT1和α1受体自身抗体，这些患者合并肾损害频率明显增高［1］ . 我们拟检测慢性肾小球肾炎（chronic glomerulo nephritis, CGN）及高血压无肾损害以及正常人血清中抗M2胆碱能受体（M2受体）和β1肾上腺素受体（β1受体）自身抗体，探讨其与CGN肾损害的关系.

    1对象和方法

    1.1对象200101/200211确诊CGN 66（男30，女36）例，年龄（40.4±5.2）岁，均按照慢性原发性肾小球肾炎诊断标准［2］确诊. 排除继发性肾小球疾病，原发性高血压及肾囊肿、泌尿系结石. 高血压无肾损害患者58（男41，女17）例，年龄（59.4±10.5）岁，诊断参照1999 WHO/ISH高血压防治指南［3］. 健康对照组40（男22，女18）例，平均年龄（44.9±7.4）岁，来自健康体检者，胸部正侧位片、心电图、生化检查正常；肝肾功能、血清电解质、心肌酶及血常规、尿常规等检查正常. 以上3组均排除内分泌及自身免疫性疾病. 所有病例记录患者的临床情况及试验室检查资料. 采集受检查者清晨空腹静脉血5 mL，离心取血浆后-40℃贮存备用.

    1.2方法采用多肽自动合成仪（Shimadzu PSSM8）用固相多肽合成法合成β1和M2受体. β1受体和M2受体多肽片段序列［4-5］：分别合成了相当于人β1与M2受体细胞外第二环氨基酸序列的肽段（β1肽段为197~222位的氨基酸序列：HWWRAESDEARRCYNDPKCCFVTNRC；M2肽段为169~193位的氨基酸序列：VRTVEDGECYIQFFSNAAVFGTAIC）. 高压液相色谱分析合成肽的纯度在95%以上. 按照本实验室建立的方法［6］，检测抗β1受体和M2受体自身抗体. 实验中设置空白对照和阳性、阴性对照，测A值时以空白对照调零，以保证检测结果的可靠性. 以健康人群为参考血清，取A值超出对照健康人群两倍标准差的患者血清标本为阳性对照血清. 研究血清与阴性血清的吸光度之比（［标本A值-空白对照A值］/［阴性对照A值-空白对照A值］）超过2.1倍者判为抗体检测阳性. 血清抗β1和M2受体自身抗体的检出频率: 取已知1∶100, 1∶200, 1∶400, 1∶800稀释度抗β1和M2受体自身抗体阳性、阴性血清作为参考血清. 患者血清在稀释度1∶200和1∶400阳性率较为稳定，我们选择与1∶200作为常规稀释度. 于取血前1 d清晨07：00开始收集24 h尿，加甲苯酸防腐，混匀后记录总量，用酶联免疫吸附法（ELISA）,上海波佳生物技术有限公司提供药盒测定尿微量蛋白.统计学处理：用SPSS 10.0软件进行,数据用x±s表示，计数资料用χ2检验,多组均数间的比较用单因素方差分析，方差不齐组间的比较用非参数检验.

    2结果

    CGN组、高血压无肾损害组血压水平没有显著差异. CGN组肾功能参数明显高于高血压无肾损害及正常对照组(表1,2). CGN组患者血清抗β1受体和M2受体自身抗体阳性率明显高于高血压无肾损害组、正常对照组,有显著差异（P＜0.01），高血压无肾损害组与正常对照组比较无统计学意义(表1,2).

    表1三组临床资料(略)

    表2血浆中抗β1受体 和M2受体自身抗体的比较（略）

    3讨论

    近来研究发现，在难治性高血压患者血清中检出抗AT1和α1受体自身抗体，这些患者合并肾损害频率明显增高［1］，与本研究结果一致. 提示抗β1受体和M2受体自身抗体可能参与了CGN发病，自身免疫机制参与可能是引起CGN患者肾损害的重要因素之一. CGN，包括肾小球和肾实质缺血性损害，肾血流动力学代偿性改变，肾小球高灌注、高滤过状态引起健康肾小球硬化，这种硬化的小动脉可进一步引起肾脏缺血从而加重肾小球损害［2］. 由于病变继续，肾小球毛细血管破坏，导致肾组织严重破坏，造成肾脏损伤，导致隐蔽抗原暴露，在部分易感人群可以诱导机体自身免疫应答，产生抗血管受体自身抗体，从而参与CGN的病理生理过程.G蛋白偶联受体是与GTP调节蛋白相关的跨膜受体分子超家族，包括β1, M2, AT1, α1受体等. G蛋白偶联受体是将胞外信号传导给胞内的通用信号分子，可穿越胞膜并形成胞外3个环肽和胞内3个环肽的空间构象［6］. 扩张型心肌病患者中约1/3存在针对抗β1受体和M2受体胞外第二个环肽的抗自身抗体［7］. Liao等［8］发现，抗β1受体自身抗体也具有β1受体激动活性，并可导致心肌细胞钙超负荷而引起心肌损害. 抗β1受体和M2受体自身抗体的存在及其病理性激动剂样活性可能是扩张型心肌病发病及心力衰竭产生的重要机制［8］. 在CGN患者血清中,测出了高度抗β1受体和M2受体自身抗体,推测这一抗体可与该受体特异性结合,产生受体激动样活性,导致肾组织细胞钙超负荷,从而引起肾组织损伤. 自身抗体通过相应受体引起病理效应可能是CGN肾功能不全发生发展的重要因素，抗β1受体和M2受体自身抗体的存在及其病理激动剂样活性可能是CGN肾损害产生的重要机制，CGN患者β1受体和M2受体自身抗体的产生可能与这一机制有关.

    【】

［1］ Liao YH, Wei YM, Wang M,et al. Autoantibodies against AT1receptor and a1adrenergic receptor in patients  with hypertension［J］. Hypertens Res,2002, 25:641-644.
［2］ 潘缉圣. 慢性肾小球肾炎［A］//王叔咸，吴阶平. 肾脏病学［M］. 北京：人民卫生出版社，1987：323-329.
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［8］ Liao YH, Wei YM, Wang M, et al. Effects of autoantibodies against AT1receptor and angiotensinII on  refractory hypertension［J］.South China J Cardiol, 2001,1：84-88.