健康人体内乳酸左氧氟沙星片的药代动力学及生物等效性研究

【关键词】  乳酸左氧氟沙星片；药代动力学；色谱法,高压液相；生物等效性

　　【关键词】  乳酸左氧氟沙星片；药代动力学；色谱法，高压液相；生物等效性

    乳酸左氧氟沙星是我国新研制的第三代喹诺酮类抗菌药，为氧氟沙星的旋光异构体，具有抗菌谱广、抗菌作用强等优点. 其抗菌活性是光学对映体D型的8128倍，外消旋体OFLX的2倍. 参照［1-3］，我们建立了用反相高效液相色谱法测定乳酸左氧氟沙星血药浓度的方法，对18名健康志愿者自身交叉口服两种乳酸左氧氟沙星片后的药代动力学和生物利用度进行了分析和比较.

    1材料和方法

    1.1材料参比制剂: 乳酸左氧氟沙星片(来立信片，浙江医药股份有限公司新昌制药厂生产，规格 0.1 g/粒，批号 040478)；受试制剂:乳酸左氧氟沙星片(天津药业集团新郑股份有限公司提供，规格 0.1 g/粒，批号 030928)；乳酸左氧氟沙星对照品:药品生物制品检定所提供，批号130455200202. 甲醇(G.R. 北京化工厂，批号 20020629)，四丁基溴化氨：分析纯，天津市科密欧化学试剂开发中心，批号 20040531，二氯甲烷(AR.北京化工厂，批号 20030319).

    岛津LC10A高效液相色谱仪，包括LC10A高压输液泵、LC10AV紫外可调检测器、CTO10A柱温箱、7125手动进样阀、分析之星色谱工作站.

    1.2方法

    1.2.1分组和血样采集18名健康志愿者(为医学院校在校学生)，男性，年龄21～24岁，体质量51～70 kg，无烟酒嗜好. 受试前经体格检查及心电图、肝、肾功能检查正常. 给药前2 wk至整个试验过程结束未服任何其他药物，试验期间禁忌烟酒及含咖啡饮料，禁做剧烈活动，用统一标准餐. 18名健康志愿者随机分成两组，禁食12 h，于早晨服药前采空白血,7:00开始陆续服用参比制剂或供试制剂，剂量均为0.2 g， 250 mL温开水送服，3 h后可以饮水，4 h后用统一标准低脂餐. 于服药后0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2,  4, 6, 9, 12和24 h，各采集静脉血4 mL，血样置标号塑料试管中，室温放置2 h，3000 r/min离心20 min，分取血清，置-30℃冰箱保存，测定前解冻. 间隔1 wk，自身交叉服用另一制剂.

    1.2.2样品处理与测定取血清0.5  mL，加入0.5 mol/L HCl溶液200 μL混匀,加乙醚5 mL旋涡混匀器萃取2 min， 3000 r/min离心10 min，取上清液3.5 mL于另一尖底试管中，40℃水浴中氮气吹干，100 μL流动相复溶，进样30 μL，按前述色谱条件测定乳酸左氧氟沙星的峰面积，以外标法进行定量.

    1.2.3方法学考察与评价

    1.2.3.1色谱条件色谱柱:Scienhome C18 ODS (ID 4.6 mm × 200 mm,填料粒度5 μm,德国 Kromasil)，流动相:0.01 mol/L磷酸二氢钾甲醇 0.5 mol/L四丁基溴化氨(78:22： 4, V/V/V),流速: 1 mL/min ，柱温:40℃，检测波长:294 nm.

    1.2.3.2标准曲线的制备取健康人混合血清0.5 mL 分别加入乳酸左氧氟沙星系列标准液，配成0.025, 0.125, 0.25, 0.5, 1.5, 3.0 mg/L的血清样品，混匀，以下操作同样品处理与测定项，以峰面积X对浓度C作线性回归，得方程: C=0.002645X +2.782784 (r=0.9997)，乳酸左氧氟沙星在0.025～3.0 mg/L范围内，线性关系良好. 最低检出浓度为0.01 mg/L.

    1.2.3.3精密度和回收率用不同浓度的乳酸左氧氟沙星标准液加健康人混合血清配成0.125,  0.5和3.0 mg/L的血清样品，每个浓度各5份，按样品制备项下处理测定（表1)，提示回收率符合要求. 用不同浓度乳酸左氧氟沙星标准液加健康人混合血清配成0.05, 0.5和1.5 mg/L的血清样品，按样品制备项下，于1 d内处理测定 5次，另按上述操作，每日处理测定1次，连续5 d，得日内和日间相对标准差(表2),提示方法精密度符合要求.表1血清中乳酸左氧氟沙星的回收率表2方法精密度

    1.2.3.4 数据处理与统计分析志愿者的血药浓度时间数据，用“生物利用度和等效性统计软件”求算有关药动学参数. AUC按梯形面积法，时间范围取0～24 h. 相对生物利用度分别由受试制剂与参比制剂的AUC(0-t)和AUC(0-∞)相比而得. 计算公式为：F1=［ AUC(0-t) (受试制剂)/AUC(0-t) (参比制剂)］× 100%；F2=［AUC(0-∞)(受试制剂)/AUC(0-∞)(参比制剂)］× 100%.

    2结果

　　药代动力学参数两种片剂的有关药代动力学参数及生物等效性见表3，经统计学检验，两者之间的差异无显著性意义（P>0.05）. 本研究过程中无严重不良反应事件发生，也未发现与药物有关的不良反应事件.表3乳酸左氧氟沙星的药动学参数及相对生物利用度

    3讨论

　　本实验使用反相高效液相法测定血清中的乳酸左氧氟沙星浓度，其流动相的配制及血样的提取方法均较为简单、，回收率较高，峰形尖锐，血清中杂质峰对药物峰无干扰.

    本实验所有数据经对数转换和不转换后使用双单侧检验法，检验对照药品和受试药品的等效性和置信区间，检验所得结果一致. 相对生物利用度为F1=0.9998，F2=0.9917两种片剂的两组参数中Cmax, tmax, AUC(024 h), AUCinf均经对数转换后进行方差分析和双单侧t检验,其差异无显著性,即两种制剂生物等效.

    【】

    ［1］ 张宏文,邵志高.反相高效液相色谱法测定左旋氧氟沙星血药浓度［J］. 药房，1998,9（1）28:29-31.

    ［2］ Verho M, Malerczyk V, Damm D, et al. Pharmacokinetics of ofloxacin in comparison to the race mic mixture of ofloxacin ［J］. Drug Metabol Drug Interact, 1996,13(1):57-60.

    ［3］张震宇，李雪宁，陈伟力，等. 乳酸左氧氟沙星片人体生物等效性试验［J］.中医药学刊，2004,22（6）1080:1084-1087.