五加双参片对辐射和化学物质损伤细胞的影响

　　　作者：肖引，陈崇尚，华君，白娟，马勇智

【关键词】  五加双参片；药；辐射损伤；化学损伤

    【Abstract】 AIM: To study the protective effects of WUJIASHUANGSHEN tablets (WJSST)  on cells against radiation damage and chemical injury. METHODS:  The radiation damage models in rats were induced by 60Co as the radiant substance. We counted the numbers of  the peripheral blood leucocytes,  medullary cells and   the micronuleated cells and measured the content of DNA in thymocytes. The models of hypocytosis were  induced by cyclophosphamide and the numbers of the leucocytes and thrombocytes were counted. RESULTS: When WJSST were administered after radiation damage by 60Co, the numbers of the leucocytes and medullary cells were  obviously increased as compared with blank group and leucogen control group (P<0.01). The percentage of the micronuleated cells in the  WJSST  groups was markedly lower than that in  model group (P<0.01). As to  the content of DNA in the thymocytes, the  WJSST  groups were significantly higher than that in the model  group (P<0.01). When WJSST were administered after chemical injury by cyclophosphamide, the numbers of the leucocytes and thrombocytes were markedly increased as compared with  those of the blank  group and control groups (P<0.01). CONCLUSION: WJSST have the protective effects against the radiation damage and chemical injury such as the increasing  peripheral blood leucocytes  and medullary cells, the decreasing  the number of micronucleated cells, the increasing the content of DNA in thrombocytes.

    【Keywords】  WUJIASHUANGSHEN tablet; pharmacology; radiation injuries; chemical injuries

    【摘要】  目的： 研究五加双参片对60Co辐射损伤细胞的影响. 方法： 采用健康小鼠作为实验对象，五加双参片灌胃给药，使用60Co作为辐射物制备辐射损伤模型，采血记数外周血白细胞及骨髓造血细胞数、骨髓微核细胞数并测定胸腺DNA含量；环磷酰胺（CY）制备低血细胞模型，采血测定白细胞和血小板总数；观察五加双参片对辐射损伤和化学物质损伤的保护作用. 结果： 对保护辐射损伤外周血白细胞与骨髓造血细胞，五加双参片能使损伤细胞得到恢复，加速其增殖与激活，与空白组比较（P＜0.01），优于利血生对照组（P＜0.01）；五加双参片组骨髓微核细胞千分率低于模型对照组（P＜0.01）；同时五加双参片组辐射小鼠胸腺DNA含量明显高于模型对照组（P＜0.01）；五加双参片还能防治CY所致的白细胞和血小板减少，与空白组比较P＜0.01，优于对照组（P＜0.05）.  结论： 五加双参片对辐射损伤细胞与骨髓造血细胞和对防治CY所致的白细胞和血小板减少症均有保护作用. 五加双参片能保护骨髓细胞，减轻60Co辐射对骨髓细胞的损害；对胸腺细胞DNA有保护作用.

    【关键词】 五加双参片；药理学；辐射损伤；化学损伤

      五加双参片为临床应用多年的纯中药制剂，由刺五加、当归、玄参、党参等多味中药精制而成. 具有扶正固本、益气补血之功效. 主要用于肿瘤患者放化疗后出现的气血两虚证及白细胞减少者的辅助［1］. 研究表明，本品能促进造血干细胞的增殖和分化；对辐射损伤的脾组织结构恢复有明显的促进作用；对环磷酰胺（CY）与60Co辐射引起的外周血细胞减少有明显升高作用. 为进一步深入探讨五加双参片对放疗患者的辅助治疗作用机制，我们采用健康小鼠作为实验对象，使用60Co作为辐射物制备辐射损伤模型，CY作为化学物质制备骨髓抑制和低血细胞模型，观察了五加双参片对辐射损伤和化学物质损伤的保护作用.

    1材料和方法

    1.1材料五加双参片 (西安中药厂生产，030901，每片相当生药材0.69 g)；芪枣冲剂对照品［厦门中药厂，批号（86）20749］. 昆明种小鼠（第四军医大学实验动物中心提供），体质量18～22 g.

    1.2方法

    1.2.1五加双参片对60Co辐射损伤模型小鼠外周血细胞和骨髓细胞的影响［2］取雄性小鼠36只，适应1 wk后，尾部采血测定正常血细胞值，放入辐射盒内，采用60Co 6.0 Gy全身辐射1次. 辐射当日随机分为生理盐水组、五加双参片组（4.5 g/kg）和利血生对照组（40 mg/kg），每组12只，灌胃给药，共25 d. 于辐射后1, 5, 10, 15, 20和25 d分别采血，并记数外周血白细胞及骨髓造血细胞.

    1.2.2五加双参片对60Co辐射小鼠骨髓细胞微核率及胸腺DNA含量的影响

    1.2.2.1对小鼠骨髓细胞微核的影响［3-4］取雄性小鼠48只，随机分为正常对照组、模型对照组和五加双参片4.5和2.5 g/kg 2个剂量组，每组12只，灌胃给药，除正常对照组外，其余组放入辐射盒内，60Co 4.0 Gy全身辐射1次. 照射后连续给药 7 d，末次给药24 h后处死小鼠，取双侧股骨，滴加一滴小牛血清，将骨髓挤出，清除骨渣，用推片在载玻片上研匀后推成一薄膜，甲醇中固定10 min，Giemsa溶液染色5 min，以常水冲洗，在油镜下选择细胞分散好、形态完整、染色良好的部位，按照一定顺序进行计数. 计数嗜多染红细胞（PCE为蓝灰色）及带微核的细胞共1000个，计数微核细胞的千分率.

    1.2.2.2对小鼠胸腺DNA含量的影响以上小鼠处死后立即取出胸腺，准确称质量，标号，然后分别置于玻璃匀浆器中，加入生理盐水2 mL，以1000 r/min的速度研磨1 min，将匀浆转入试管中，分别用5 mL乙醚提取2次，弃乙醚液. 残渣干燥后，加入20 mL/L冷过氯酸5 mL，置4℃冰箱中2 min后3000 r/min离心，取上清液，加蒸馏水1.5 mL，二苯胺溶液4 mL，混匀，置60℃水浴保温1 h，冷却后于600 nm波长处测定A值，然后按照工作曲线求出DNA的含量.

    DNA的含量={［测定液中DNA的含量(μg)×提取液总量(mL)］/［胸腺质量(g) ×106×测定所用提取液量(mL)］}×100%

    1.2.3五加双参片对由CY导致的白细胞和血小板减少模型小鼠白细胞和血小板的影响［5］取健康小鼠48只，雌雄各半，体质量18～22 g，适应1 wk后，随机分成空白对照组（给淀粉片3.75 g/kg）、芪枣冲剂对照组（7.5 g/kg）和五加双参片组（3.75 g/kg, 0.8 g/kg）2个剂量组，每组12只，分组后由尾部采血测定给药前白细胞和血小板的正常值，随后各组小鼠一次腹腔注射CY 100 mg/kg，造成低血细胞模型. 按以上剂量每天灌胃给药一次，连续给药8 d，分别于2, 4, 6, 8 d采血测定白细胞和血小板总数.

    统计学处理：  实验数据用x±s表示，进行单因素方差分析及Dunnett' t检验，运用SPSS11.5统计软件包处理数据，检验水准α=0.05，以P<0.05为有显著性差异.

    2结果

    2.1五加双参片对60Co辐射小鼠外周血细胞和骨髓造血细胞的影响五加双参片对辐射损伤细胞与骨髓造血细胞有一定的保护作用，能使损伤脾细胞得到恢复，加速粒细胞增殖与激活. 第15日和第20日五加双参片组外周血白细胞和骨髓造血细胞数明显增多，与生理盐水组比较P<0.05，优于利血生组（P<0.05）；第25日与生理盐水组比较P＜0.01，优于利血生组（P＜0.01）； 且五加双参片组被辐射后血细胞回升较其他组快（表1，2）. 表1五加双参片对60Co辐射小鼠外周血白细胞的影响

    2.2五加双参片对60Co辐射小鼠骨髓细胞微核率及胸腺DNA含量的影响五加双参片2个剂量组骨髓微核细胞千分率低于模型对照组(P＜0.01),说明五加双参片可保护骨髓细胞，减轻60Co辐射对骨髓细胞的损害（表3）. 五加双参片2个剂量组的DNA含量明显高于模型对照组(P＜0.01)，表明五加双参片对DNA有保护作用（表3）.表2五加双参片对60Co辐射小鼠骨髓造血细胞的影响(表3五加双参片对60Co辐射小鼠胸腺DNA含量的影响

    2.3五加双参片对CY所致小鼠白细胞和血小板减少的影响五加双参片对防治CY所致的白细胞和血小板减少症有明显保护作用，与空白对照组比较P＜0.01，优于芪枣冲剂组(P＜0.01，表4,5）.

    3讨论

    临床应用已证实，五加双参片对肿瘤患者放疗后 表4五加双参片对CY所致低血细胞模型白细胞（×109/L）的影响5五加双参片对CY所致低血细胞模型血小板（×109/L）的影响出现的气血两虚证及白细胞减少者的辅助作用，实验中我们也观察到了五加双参片对辐射损伤模型小鼠的细胞与骨髓造血细胞损伤有一定的保护作用，能使损伤脾细胞得到恢复，加速粒细胞增殖与激活. 而且五加双参片组被辐射后血细胞回升较其他组快. 五加双参片对60Co辐射所致的大鼠的细胞与骨髓造血细胞损伤有较好的保护作用，是一种很好 的“适应原药”，能增强机体的抗病能力，可预防辐射损伤［6］.

    细胞微核化是染色体损伤的一种表现形式，是由染色体断裂遗落下来的断片演化而来的. 当染色体遭到60Co辐射损伤后，染色体断片到末期时被子细胞排除而形成次核，游离于细胞质中，成为一个或几个圆形结构，比正常细胞核小得多，故称为微核细胞［7］. 实验证明，五加双参片能降低细胞的微核率，与模型对照组比较，P<0.01. 五加双参片组骨髓微核细胞千分率低于模型对照组，说明五加双参片可保护骨髓细胞，减轻了60Co辐射对骨髓细胞的损害. 小鼠被60Co辐射后，体内分子发生电离、激发，产生能量转移，首先使体内一些重要的大分子物质，如DNA、蛋白质等受到破坏，从而产生组织细胞一系列生理功能的障碍［8］. 核辐射对生物大分子的破坏有两条途径，一是直接作用于生物大分子，把能量转移给大分子，使其发生变化，可使DNA分子上的长链发生断裂，可以使单链断裂，也可以使双链断裂；二是作用于细胞内水分子，产生一些活性基团（包括H+， OH-自由基等），这些自由基再作用于生物大分子，使其发生变化，破坏DNA. 五加双参片的多糖成分可促进DNA的合成，而且有增强体内SOD的活性，清除体内自由基，保护DNA不受损害［9-10］. 五加双参片组的DNA含量明显高于模型对照组，证明五加双参片对DNA有保护作用. 该药对DNA的保护作用可能是通过以下两个途径，一是促进DNA的合成；二是提高了体内SOD的活性，清除体内自由基，使DNA少受损伤.

    实验中我们还观察到五加双参片对防治CY所致的白细胞和血小板减少症有明显保护作用，充分验证了五加双参片的药理作用和治疗效果. 五加双参片不仅对60Co辐射所致的大鼠辐射损伤模型的细胞与骨髓造血细胞损伤有较好的保护作用，对化学物质导致的骨髓抑制白细胞和血小板减少症也有明显保护作用，能明显增强机体的抗病能力，对各种原因引起的血小板、白细胞减少有较好的防治作用.

    【】

    ［1］  朱颜. 中药的药理与应用［M］. 北京: 人民卫生出版社，1958:247-248.

    ［2］  王筠默. 中药药［M］. 上海： 上海技术出版社，1985: 110-111.

    ［3］  李新田，林昱，朱学莉，等. 五加双参片对60Co辐射小鼠外周血细胞及骨髓三系细胞的影响［J］. 中华医药学杂志，2004,3（1）:22-24.

    ［4］  韩淑亚，张笑峥. 五加双参片对自身免疫性甲状腺炎TGA, TMA的影响［J］. 甘肃中医，2001,14（3）:88-90.

    ［5］  沈映君. 中药药理学［M］. 北京： 人民卫生出版社，2000:875-894.

    ［6］  李新田，林昱，朱学莉，等. 五加双参片对60Co辐射小鼠骨髓细胞微核及胸腺DNA含量的影响［J］. 新兴医药研究杂志，2004,14（2）:69-71.

    ［7］  张瑞钧，微波. 放射线有害作用及药物治疗［M］. 北京： 航天出版社， 1987:10-11.

    ［8］  林昱，李新田. 五加双参片对环磷酰胺损害动物机体造血机能的保护作用［J］. 中华医药学杂志，2003,2（8）:81-83.

    ［9］  陈奇. 中药药理研究方法学［M］. 北京： 人民卫生出版社，1993:774-775.

    ［10］ 李新田，林昱. 五加双参片对辐射损伤动物机体造血功能的影响［J］. 中华医药学杂志，2003,3（11）:997-998.