子宫内膜异位症sICAM

【关键词】  子宫内膜异位症

    Changes of sICAM1 and sHLAⅠin endometriosis and its significance

　　【Abstract】 AIM: To investigate the relationship between endometriosis (EMs) and the levels of soluble intercellular adhesion molecule1 (sICAM1) and soluble human leucocyte antigen1 (sHLAⅠ). METHODS:  Thirty serum and 30  peritoneal fluid (PF) of patients with EMs (test group) and 30 serum and 30 peritoneal fluid of patients without EMs (control group) were studied. The levels of sICAM1 and sHLAⅠwere detected by enzymelinked immunosorbent assay  (ELISA). RESULTS:  ① Significantly higher levels of sICAM1 in serum and PF were observed in patients with EMs compared with those in controls (P0.05). ② The levels of sICAM1 in serum and PF were significantly different and the levels in earlystage EMs group were higher than those in advanced group (P0.05). ③ Serum sHLAⅠ cevel was lower in EMs group (P0.05) but the level in earlystage EMs group was higher than that in advanced group (P0.05). ④ There were no statistically significant differences in the levels of sHLAⅠin PF between the patients and the controls (P0.05). CONCLUSION:  Changes of sICAM1and sHLAⅠmay play a role in the genesis of endometriosis.

　　【Keywords】 endometriosis; HLA antigens;  intercellular adhesion molecule1; enzymelinked  immunosorbent assay

　　【摘要】 目的： 探讨盆腔子宫内膜异位症（内异症）患者血清和腹腔液中可溶性细胞间粘附分子1(sICAM1)、可溶性人类白细胞抗原Ⅰ(sHLAⅠ)的水平与该病的发病关系. 方法： 以ELISA法定量检测sICAM1的水平、半定量检测sHLAⅠ水平. 结果： 内异症组血清和腹腔液中sICAM1和sHLAⅠ水平明显高于对照组(P<0.05). 结论： sICAM1，sHLAⅠ的变化可能与盆腔内异症发病有关，对sICAM1和sHLAⅠ的研究有利于了解内异症的发病机制和分期.
 
　　【关键词】 子宫内膜异位症；HLA抗原；胞间粘附分子1；酶联免疫吸附测定

　　0引言
 
　　子宫内膜异位症(内异症)是育龄妇女的常见妇科病,至今病因尚不十分清楚. 目前免疫机制被认为在其发病中起重要作用. 部分学者观察到，内异症患者ICAM1, HLAⅠ表达异常［1,2］. 本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测内异症患者血清和腹腔液中sICAM1, sHLAⅠ的水平，并探讨它们与疾病发生的关系.

　　1对象和方法
 
　　1.1对象

　　选取200409/200502我科行手术的内异症患者30例，年龄25～48（39±9）岁. 按RAFS标准，早期（Ⅰ～Ⅱ期）14例,晚期（Ⅲ～Ⅳ期）16例. 对照组为同期就诊的卵巢良性上皮性肿瘤患者30例，年龄22～44（36±7）岁. 实验组和对照组均经术后病检证实,月经周期正常,术前3 mo未使用激素类药物，无盆腔炎症,无自身免疫异常,无其他内、外科疾病，两组年龄无差异，均为汉族,来自湖北省.

　　1.2方法
   
　　1.2.1采样患者入院后抽肘静脉血3 mL，分离血清储于-70℃冰箱中. 腹腔镜下或开腹手术中抽取腹腔液3 mL(血染腹腔液不收集)，以2000 r/min离心15 min，取上清液于-70℃保存. 共留取血清标本60份，腹腔液标本60份.
 
　　1.2.2sICAM1的测定标本中sICAM1的水平用ABSELISA法定量检测，试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供 (德国R&D公司)，操作方法严格按照试剂盒说明进行. 用Biocell2010型酶标仪（澳大利亚生产）在450 nm处读数.

　　1.2.3sHLAⅠ的测定采用ELISA法检测［3］. 主要试剂包括鼠抗人HLAABC单克隆抗体（英国Serotec公司）和兔抗人β2微球蛋白辣根过氧化物酶(德国DAKO公司).

　　将96孔酶标板每孔加鼠抗人HLAABC单抗(pH 9.6碳酸盐缓冲液稀释，蛋白浓度10 μg/mL)100 μL包被，置4℃作用24 h，再以洗涤液（PBS: pH 7.4, 5 g/L Tween20, 0.02 mol/L）冲洗（自动洗板机完成，洗板5次），每孔加10 g/L牛白蛋白(BSA)PBS，室温封闭1 h，再冲洗后备用. 以稀释液（2.5 g/L BSAPBS）作空白对照，每孔加样（被检血清和腹腔液用2.5 g/L BSAPBS作1∶20稀释）100 μL, 37℃保温2 h后弃上清液并洗涤，再加兔抗人β2HRP(2.5 g/L BSAPBS 1∶1000稀释) 100 μL, 37℃保温1 h，弃上清液并洗涤，加底物应用液(含OPD) 100 μL, 37℃保温30 min ，加2 mol/L硫酸50 μL终止反应，在5 min内用相同酶标仪在490 nm处测定A值.
 
　　统计学处理： 所有数据用x±s表示，采用SPSS11.5软件进行两样本t检验，P<0.05为有统计学差异.

　　2结果
 
　　内异症组血清和腹腔液中sICAM1水平高于对照组，且内异症早期组高于晚期组；内异症组血清sHLAⅠ水平低于对照组，但内异症早期组高于晚期组（Tab 1）.表1血清和腹腔液中sICAM1和sHLAⅠ水平（略）

　　3讨论

　　根据双信号活化理论，HLAAg肽复合物与TCRCD8复合物的结合，启动T细胞活化信号1, LFA1与ICAM1的结合，作为协同刺激信号. 若无粘附分子的协同刺激,则引起T 细胞无能. sICAM1, sHLAⅠ分别是膜ICAM1、膜HLAⅠ的脱落部分，已知ICAM和HLA分子在盆腔组织广泛表达，无疑对内异症的发生有潜在性影响.

　　异位内膜引起炎症反应，使白细胞分裂增殖，其分泌的sICAM1必然增多，故血清sICAM1上升，本实验结果正是如此. 升高的sICAM1与内皮细胞膜上ICAM1竞争，影响白细胞附壁，使其无法移动到炎症反应部位来发挥杀伤异位内膜细胞的作用；另一方面，腹腔液中升高的sICAM1阻断ICAM1/LFA1，影响了NK细胞或CTL与异位内膜细胞的结合，从而有利于异位内膜逃避免疫监视.

　　许多人类肿瘤细胞表面有HLAⅠ类抗原的减少或丢失［4］，这可能代表肿瘤细胞逃逸CTL介导的识别途径之一. 本实验内异症组腹腔液sHLAⅠ的A值低于对照组（P<0.05），反推异位内膜细胞上HLAⅠ含量降低，说明内异症的发生可能具有与肿瘤细胞相似的机制，这与Matalliotakis等［5］的报道一致. 也有相反观点，Amirghofran等［6］发现内异症患者腹腔液sHLAⅠ升高.
 
　　本实验中sHLAⅠ的A值在内异症组与对照组有区别（P<0.05）. 有学者发现，内异症患者NK细胞活性和功能下降，内异症越严重，NK细胞活性下降越明显［1］. 从本实验结果分析，可能是升高的sICAM1抑制了NK细胞的活性，再加上HLAⅠ的表达降低而引起的sHLAⅠ下降，通过实验我们推测，sICAM1和sHLAⅠ主要以影响抗原刺激信号的方式参与调节CTL和NK细胞的功能，二者的变化可能与盆腔内异症发病有关，对sICAM1和sHLAⅠ的研究有利于了解内异症的发病机制和分期.

　　【】

　　［1］ Nagamasa M, Chiaki I, Hiroyoshi O, et al. Aberrant expression of intercellular adhesion molecule1 and killer inhibitory receptors induces immune tolerance in women with pelvic endometriosis ［J］. Fertil Steril, 2002;77(4):679-683.

　　［2］ Jo K, Hiroshi O, Noriko K, et al. Association of HLA class I and class II alleles with susceptibility to endometriosis ［J］. Hum Immunol, 2002;63(11):1033-1038.
 
　　［3］兰炯采,石宁,郑世荣,等. 可溶性HLAⅠ的检测及人正常值［J］. 中国免疫学杂志,1999;15(5):228-230.

　　Lan JC, Shi N, Zheng SR, et al. Quantification of serum soluble HLA class  Ⅰ  antigens ［J］. J Chin Immunol, 1999;15(5):228-230.

　　［4］ Chang CC, Campoli M, Ferrone S. HLA class I antigen expression in malignant cells: Why does it not always correlate with CTLmediated lysis  ［J］?  Curr Opin Immunol, 2004;16:644-650.

　　［5］ Matalliotakis IM, Goumenou AG, Koumantakis GE, et al. Expression of serum human leukocyte antigen and growth factor levels in a Greek family with familial endometriosis ［J］. J Soc Gynecol Investig, 2003;10(2):118-121.

　　［6］ Amirghofran Z, Sheikhi AK, Kumar PV, et al. Soluble HLA class I molecules in malignant pleural and peritoneal effusions and its possible role on NK and LAK cytotoxicity ［J］. J Cancer Res Clin Oncol, 2002;128(8): 443-448.