血栓前体蛋白与同型半胱氨酸在血栓前状态中的价值

【关键词】  同型半胱氨酸

    Diagnostic value of thrombus precursor protein and homocysteine in prethrombotic state

　　【Abstract】 AIM: To explore the diagnostic value of prethrombotic thrombus precursor protein (TpP) and homocysteine (tHcy) in patients with heart and brain diseases who are suspected of cardiac and cerebral embolism. METHODS:  Plasma vWF, GMP140, tPA, PAI, TAT, TpP, DDimer and tHcy were measured by ELISA. Plasma PT, APTT and Fg were measured by autoinstrument ACL2000. RESULTS:  Among the 60 patients under study, the plasma levels of vWF, GMP140, tPA, PAI, TAT, DDimer, TpP and tHcy in prethrombotic state with heart and brain diseases were significantly higher than those in controls (P0.001). TpP and tHcy were more sensitive than other parameters. No significant difference was found in plasma PT, APTT and Fg before and after cardiac embolism and cerebral embolism (P>0.05). CONCLUSION:  vWF, GMP140, tPA, PAI TAT, PAP, DDimer, TpP, tHcy are good biomarkers in assessing the prethrombotic state of patients with heart and brain diseases. High level of TpP and tHcy are helpful to predict the cardiac and cerebral embolism.

　　【Keywords】     prethrombotic state;  precursor protein, thromb; homocysteine

　　【摘要】 目的： 探讨缺血性心、脑血管疾病血浆中血栓前体蛋白（TpP）、同型半胱氨酸（tHcy）水平在早期诊断血栓前状态中的价值. 方法： 采用ELISA法测定60例患者及20 例正常人血浆中血管性血友病因子(vWF)、P选择素（GMP140）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）、凝血酶抗凝血酶复合物（TAT）、纤溶酶抗纤溶酶复合物（PAP）、DD二聚体(DDimer)、血栓前体蛋白（TpP）、tHcy含量. 全自动血凝仪检测血浆凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和血浆纤维蛋白原（Fg），分析各项指标在诊断血栓前状态时的特异性及敏感性并进行比较. 结果： ① 60例患者血浆中vWF，GMP140， tPA， PAI， TAT， TpP， tHcy均显著高于正常对照（P0.001）；TpP， Hcy异常升高患者通过跟踪随访更易成为心肌梗死(AMI)、脑梗死. ② TpP， tHcy与其他指标相比，具有很高的敏感性与特异性. ③ PT， APTT在心、脑血栓形成前后无显著变化（P0.05）. 结论： vWF， tPA， PAI， GMP140， TAT， PAP， DDimer， Fg， TpP， tHcy均可以作为早期诊断心、脑血管血栓形成前状态的分子标志物，而TpP， tHcy灵敏度、特异性高于其他各项，在早期判断血栓前状态时具有较高临床价值.

　　【关键词】 血栓前状态；前体蛋白，血栓；同型半胱氨酸

　　0引言
 
　　血栓前状态（prethrombotic  state）是指血液有形成分和无形成分的化学和流变学发生某些变化、血管内皮细胞受损、血小板激活、抗凝血和纤溶系统有关因子发生变化等多种因素的综合作用. 已有报道，通过对止血血栓分子标志物的实验室检测可识别患者是否存在血栓前状态，近年来国内外对于止血血栓分子标志物与血栓前状态之间的关系已有研究［1］,我们探讨了TpP及Hcy在血栓前状态时的早期诊断价值.

　　1对象和方法

　　1.1对象

　　选择2000/2004兰州大学第二的30（男16，女14）例患者为冠心病组，均在有胸痛症状后行动态心电图及心肌酶检查确诊；选择头晕、头痛、面部或肢体麻木、焦虑、疲乏等并经头颅CT检查及多普勒检查确诊的脑血管病变30（男16，女14）例患者为脑血管病组，分别排除其他系统疾病；正常对照组选择性别和年龄与病例组相对应的非心血管疾病、非脑卒中人群20（男12，女8）例.  采用美国库尔特ACL2000型全自动血凝仪及配套试剂和上海太阳生物有限公司提供的进口分装试剂以及EX18000全自动酶标仪.

　　1.2方法

　　空腹抽静脉血，枸橼酸钠抗凝，标准BD管中抽血，3000 r/min离心10 min，立即测试常规项PT， APTT， Fg，随后收集血浆置于-30℃冰箱保存待测，采用ELISA法检测血浆中血管性血友病因子(vWF)、P选择素（GMP140）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）、凝血酶抗凝血酶复合物（TAT）、纤溶酶抗纤溶酶复合物（PAP）、DD二聚体(DDimer)、血栓前体蛋白（TpP）、同型半胱氨酸（tHcy）含量.

　　统计学处理：   计量资料描述采用x±s，各指标组间比较采用方差分析，对方差不齐者采用非参数秩和检验，PT和APTT的结果比较采用独立样本的t检验，P<0.05表示有统计学意义. 采用敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值对这些指标进行效能评价. 灵敏度 (%)=a/(a+c)×100%, 特异度（%）=d/(b+d)×100%,阳性结果的预测值= a/(a+b),阴性结果的预测值= d/(c+d).   a(真阳性)，b(假阳性)，c(假阴性)，d(真阴性).

　　2结果

　　2.1冠心病组与正常对照组血栓分子标志物检测结果比较冠心病组(包括心梗)与正常组进行对照比较，血栓分子标志物检测结果显著高于对照组（P0.001, Tab 1），冠心病组中13例心绞痛患者最终发展成为心肌梗死. 冠心病组的这些血栓倾向指标都有不同程度升高（除tPA异常减少外），与正常对照组相比，有统计学意义（P0.001），其中发展成为心梗的病例指标异常高. 表1正常对照组与冠心病组血栓分子标志物检测结果比较（略）

　　2.2脑血管病组与正常对照组血栓分子标志物检测结果比较 脑血管病组有12例因脑血栓形成成为脑梗死. 脑血管病组中的血栓倾向指标都有不同程度升高（除tPA异常减少外），与正常对照组相比，有统计学意义（P0.001, Tab 2），其中发展成为脑梗死的病例指标异常高.
表2正常对照组与脑血管病变组血栓分子标志物检测结果比较（略）

　　2.3心、脑血栓形成前后PT ,APTT检测结果比较PT,  APTT在心、脑血栓形成前后,无显著性变化（P0.05, Tab 3）. 表3PT, APTT在心、脑血栓形成前后检测结果比较（略）

　　2.4分子标志物在心、脑血栓前状态诊断中的阳性率各指标诊断的阳性率不同，TpP, Hcy诊断血栓前状态阳性率较高(Tab 4). 表4患者分子标志物在心、脑血栓前状态诊断中的阳性率（略）

　　2.5单项指标在血栓前状态中的效能评价各项指标效能不同，其中指标TpP, Hcy敏感性和特异性均较高(Tab 5).表5单项指标在血栓前状态中的效能评价（略）

　　3讨论
 
　　本研究显示，各项分子指标都有不同程度的升高，病例组的TpP， Hcy水平明显高于对照组，其敏感性和特异性也好，TpP， Hcy对于早期确定血栓形成有较好诊断价值，不至于发展到心肌梗死和脑梗死.
 
　　血管内皮一旦发生损伤，进而血小板被激活、功能亢进，凝血成分含量增高或被活化，血液凝固调节蛋白含量减少或结构异常，在这种状态下，血液很有可能形成血栓或血栓栓塞性疾病［2，3］. 本结果显示，心、脑血管疾病时，血管内皮损伤标志物vWF增高，血小板进一步被激活或功能亢进，血浆中血小板活化标志物GMP140水平升高，凝血成分含量增高或被活化，TAT升高，血栓前状态TpP开始升高，血栓性疾病时TpP异常升高，并且是特异性和敏感性均高的分子标志物. 在一组针对115例有胸痛症状患者的研究中发现，TpP 值升高，结果胸痛发作6 h内的早期AMI占88%，发作6 h后的晚期AMI占25%，不稳定性心绞痛患者占63%，心绞痛者50%，房颤者占60%，心衰者占67%，非心脏病胸痛者占50%，因此，TpP可以作为诊断血栓早期敏感而特异的指标［4，5］. 本结果还显示，Hcy也是缺血性心、脑血管病变有效指标，在脑卒中和心肌梗死者，tHcy水平更是异常增高（100~450 μmol/L），可作为血栓形成的特异性检测［6］. 当心、脑血栓形成时，纤溶活化标志物DDimer也显著升高，血浆Fg含量升高是血栓形成的高危因素，冠心病患者Fg水平升高，敏感性和特异性却较低［7，8］.

　　研究表明12项参数中，在心、脑血栓前状态诊断中，阳性率各不相同，TpP阳性率达100%， tHcy阳性率达94%~100%；单项指标在血栓前状态中的5种效能评价，敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值中显示TpP， tHcy特异性、敏感性均高于一般.

　　综上所述，为防止梗死发生或扩大， TpP， Hcy在血栓性疾病中异常升高并表现出较高的特异性和敏感性，具有重要临床价值. 在今后的工作中，结合常规项目，增加此类项目来过筛血栓性疾病，对于止血血栓试验的普及组合选择提供了一个前瞻性的研究，使导致危害生命的疾病于早期阶段.

　　【】

　　［1］Adams FS, Abendschein DR, Jaffe AS. Biochemical markers of myocardial injury ［J］.Circulation, 2001;88:750-752.

　　［2］Richard L, John L.Wintrobes Conical Hematology 10th edition Balltimore ［J］.Willams Willkines, 1999;10:1781-1820.

　　［3］ Donnan GA, Davis SM, Chambers BR, et al. Trial of streptokinase in severe acute iscbemic stork ［J］. Lancet,1995;345:578-579.

　　［4］Carville DGM, Dimitrijevic N, Walsh M, et al. Thrombus precursor protein (TpP):Marker of thrombosis early in the pathogenesis of myocardial infarction  ［J］.Clin Chem, 2001;42:1537-1538 .

　　［5］Hantson L, Deweerdt W, Dekeyser J, et al. The European Stroke Scale［J］. Stroke, 1994;25:2215-2219.

　　［6］Boushey CJ, Beresford SAA, Omenn BS, et al. A quantitative assessment of plasma homocysteine as a risk factor for vascular disease ［J］. JAMA,1995;274:1049-1057.

　　［7］ Bick RL, Kaplan H. Hybticoagulation state ［J］. Med Clin North Am, 1998;82(3):409-447.

　　［8］ Lowe GD. How to search for the role and prevalence of defective fibrinolytic states as triggers of myocardial infarction ? The haemostasis epidemiologistsiew ［J］. Ital Heart J, 2001;9:656-657