卵巢上皮性癌PTEN和PCNA的表达

        作者：何茵芳，吴智玉，韩钦玮

【关键词】  卵巢肿瘤

    Expression and significance of PTEN and PCNA in ovarian epithelial carcinoma

　　【Abstract】 AIM: To investigate the expression of PTEN and PCNA in ovarian epithelial carcinoma and their relationship with clinicopathology. METHODS:  The expression of PTEN and PCNA in 128 cases of ovarian epithelial carcinoma, 46 cases of benign tumors and 20 cases of normal ovarian tissue were determined and compared by SABC immunohistochemical method. RESULTS:  The positive rate of PTEN in ovarian carcinoma tissues was lower than that in benign tumor tissues and normal ovarian tissues and the expression trend of PCNA was opposite to that of PTEN (P<0.05). In ovarian carcinoma, a negative correlation between expression PTEN and PCNA was observed (r=-0.511, P=0.000). The expression of PTEN and PCNA was relative to the pathological stages and clinical stages. CONCLUSION:  The downregulation of PTEN expression in ovarian carcinoma is associated with the genesis and development of ovarian carcinoma and the upregulation of PCNA expression is associated with the proliferation and pathological differentiation of the tumor tissues.

　　【Keywords】 ovarian neoplasms; PTEN; PCNA; expression

　　【摘要】 目的: 探讨卵巢上皮性癌中PTEN和PCNA蛋白的表达及相关性.  方法: 采用免疫组织化学SABC法检测了128例卵巢上皮性癌，46例卵巢良性肿瘤和20例正常卵巢组织中PTEN和PCNA的蛋白表达，分析不同组织中PTEN及PCNA表达的差异及二者的相关性. 结果: 卵巢上皮性恶性肿瘤中PTEN蛋白表达水平明显低于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织，而PCNA蛋白表达水平与PTEN相反，随正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤和卵巢恶性上皮性肿瘤顺序依次增，两者表现出明显的负相关(r=-0.511, P=0.000)，且PTEN和PCNA蛋白表达与病理分化程度及临床分期有关(P<0.05).  结论: PTEN蛋白的表达下降与卵巢癌的发生、相关，而PCNA蛋白的表达增强则与卵巢癌组织的增殖及恶性程度有关.

　　【关键词】 卵巢肿瘤；PTEN基因；增殖细胞核抗原；表达

　　0引言

　　PTEN (phosphatase and tensinhomology deleted on chromosome ten, PTEN)作为一种抑癌基因在许多研究中已被证实. 人们发现由于PTEN基因的突变和缺失导致组织中PTEN蛋白表达的异常，并与肿瘤的发生、发展及肿瘤的组织分化相联系［1-4］. 但在卵巢癌中有关PTEN的研究很少，结果不一. 我们利用SABC免疫组织化学方法检测卵巢上皮性癌及正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤中PTEN及PCNA (proliferating cell nuclear antigen)的表达，探讨不同卵巢组织中PTEN和PCNA的表达差异及意义，并分析PTEN及PCNA蛋白表达之间的相关性.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　卵巢上皮性肿瘤128例、卵巢良性肿瘤46例和20例正常卵巢组织为陕西省商洛地区中心妇产科、陕西省西安市兵器部521医院妇产科、第四军医大学西京医院妇产科199801/200406手术切除之组织标本. 128例卵巢上皮性肿瘤患者年龄25~68（中位数54.3）岁. 128例卵巢上皮性肿瘤患者中，初发97例，二次手术(第1次手术在初诊医院完成) 31例，组织标本切取前未行化疗. 正常卵巢组织于子宫肌瘤患者切除卵巢中获取. 全部标本均有明确的病理诊断. 卵巢上皮性肿瘤按FIGO分期标准分期：Ⅰ期26例;Ⅱ期47例;Ⅲ期37例;Ⅳ期18例. 浆液性囊腺癌77例;黏液性囊腺癌41例，其他类型上皮癌10例. 病理分化：高分化35例，中分化39例，低分化54例.

　　1.2方法

　　全部组织标本均用40 g/L甲醛浸泡固定，常规石蜡包埋，4 μm连续切片. PTEN鼠源性mAb购于北京中山生物技术公司; PCNA mAb 购于美国Sigma公司;生物素化mAb及SABC(strept avidinbiotin complex method)免疫组化试剂盒购于博士德生物技术公司.
石蜡组织切片常规脱蜡至水，室温孵育，消除内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗，PBS浸泡. 抗PTEN,PCNA mAb的工作浓度1∶100, 生物素化mAb和SABC试剂的工作浓度1∶100和1∶100. 方法如下： 石蜡切片经抗原修复后, 滴加1∶100 抗PTEN 或PCNA抗体, 4℃ 过夜, 次日滴加1∶100生物素标记的山羊抗小鼠IgG及HIGH2 SABC, DAB显色, 苏木素复染. 以不加一抗的组织切片作阴性对照, 以已知阳性反应片作阳性对照. 胞质中出现明显棕黄色颗粒为PTEN蛋白阳性. 无阳性或阳性细胞<10%为(-)，阳性细胞10%~50%为(+)，>50%为(). 核内出现明显棕黄色颗粒为PCNA蛋白阳性. 细胞核内无染色颗粒为(-)，阳性细胞＜25%为(+)，25%~50%为()，＞50%为().

　　统计学处理: 采用SPSS 11.5软件包处理实验数据. 采用χ2检验和精确概率法及相关分析方法进行分析，以P<0.05为有统计学意义.

　　2结果

　　2.1PTEN蛋白的表达PTEN蛋白在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及卵巢上皮性癌组织中的表达阳性率依次分别为95.0%,78.3%和52.3%. 卵巢上皮性癌组织中PTEN的表达与正常卵巢组织和良性卵巢组织相比均有显著性差异(P=0.000). 而正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织PTEN表达阳性率相比则差异不明显(P=1.000). 在卵巢上皮性癌组织中的表达水平在不同上皮病理组织类型中未表现出差异性(P=0.797)；而在病理分级中，G1G2级组和G3级组分别为71.6%和25.9%，两组PTEN表达水平比较有明显差异(P=0.001). 而在不同临床分期中，Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期PTEN表达水平分别为65.8%和34.4%，两组比较则差异十分显著(P=0.000，Tab1).表1PTEN蛋白表达与卵巢癌临床分期和分化程度的关系（略）

　　2.2PCNA蛋白的表达PCNA蛋白在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及卵巢上皮性癌组织中的表达阳性率依次分别为5.0%，7.0%和89.1%. 卵巢上皮性癌组织中PCNA的表达与正常卵巢组织、良性卵巢组织相比均有显著性差异(P=0.000). 而正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织PCNA表达阳性率相比则差异不明显(P=1.000). PCNA蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达水平在不同上皮病理组织类型中分别为浆浆液性上皮癌89.6%，黏液性87.8%，其他上皮类型为87.8%，未表现出差异性(P>0.05)；而在病理分级中，G1,G2级组和G3级组分别为88.6%,89.7%和88.9%. 在不同临床分期中，Ⅰ~Ⅳ期PCNA表达水平分别为88.5%，87.2%，89.2%和94.4%，组内比较均无显著性差异(P>0.05，Tab 2). 卵巢上皮癌PTEN及PCNA蛋白表达的水平有明显的负相关关系（r=-0.511, P=0.000）.表2不同临床分期卵巢上皮性癌PCNA蛋白的表达（略）

　　3讨论

　　PTEN 基因定位于染色体10q23.3，全长21 kb，由9个外显子和8个内含子组成，共计1209个核苷酸，编码403个氨基酸组成的蛋白质［3］. PTEN蛋白包括氨基酸的磷酸酶结构域，脂质结合C2结构域和一个50个氨基酸组成的羧基端结构域. PTEN蛋白是一个多功能蛋白，在细胞生命过程中起着重要作用［3-5］.

　　PTEN蛋白在卵巢上皮性肿瘤的表达及表达水平变化，目前研究结果不一. 一些学者认为［6］卵巢上皮性癌中不存在PTEN基因的突变，或突变比例很低，但该基因突变在卵巢上皮性癌的发生中无重要作用. 而另一些学者的研究则显示，卵巢上皮性癌中存在着较为普遍的杂合性缺失. 认为PTEN表达缺失可能在卵巢癌的发病中仅是一个晚发事件. 本研究显示，在卵巢上皮性肿瘤中PTEN表达明显低于正常卵巢组织及良性卵巢上皮性肿瘤，且有明显的统计学意义. 卵巢上皮性癌各种组织类型中均有PTEN蛋白的表达缺失. 表达水平、比率与肿瘤组织类型无关. 但与临床分期、病理分级有关. 随临床期别、病理分级的增加，PTEN表达下降. 提示对PTEN蛋白的检测可能间接反映肿瘤的恶性程度，从而判断患者的预后.

　　PCNA是目前公认的反映核增殖水平的标志性基因. PCNA蛋白检测可直接反映细胞合成代谢及增殖状态，众多研究都客观一致地显示了这一点. 本研究中PTEN与PCNA的表达表现出明显的负相关关系. 提示在卵巢上皮性癌发生发展过程中，PTEN蛋白表达的缺失和减少可能增加了肿瘤的增殖活性，从而使PCNA表达增加.

　　【】

　　［1］ Hirai Y, Tanaka N, Furuta R,et al. Somatic mutations of the PTEN/MMAC1 gene associated with frequent chromosomal loss detected using comparative genomic hybridization in endometrial cancer［J］. Gynecol Oncol, 2001;83(1):81-88.

　　［2］ Nakako S, Hajime T, Masato N. Loss of heterozygosity on 10q 23.3 and mutation of the tumor suppressor gene PTEN in benign endometrial cyst of the ovary: Possible sequence progression from benign endometrial cyst to endometrial carcinoma and clear cell carcinoma of ovary［J］. Cancer Res, 2000; 60(18):7052-7056.

　　［3］ Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast and prostate cancer［J］. Science, 1997;275(8):1943-1949.

　　［4］ Steck PA, Pershouse MA, Jasser SA,et al. Identification of a candidate tumor suppressor gene, MMAC1, at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancer［J］. Nat Genet, 1997; 15(2):356-362.

　　［5］ Li DM, Sun H. Encoded by a candidate tumor suppressor locus, is a novel protein tyrosine phosphatase regulated by transforming growth factorβ［J］. Cancer Res,1997;57(9):2124-2130.

　　［6］ Kurose K, Zhou XP, Araki T, et al. Frequent loss of PTEN expression is linked to elevated phosphorylated Akt levels, but not associated with p27 and cyclin D1 expression, in primary epithelial ovarian carcinoma［J］. Am J Pathol, 2001;158(9):2097-2106.