检测支气管灌洗液中抗酸杆菌的方法学研究

【关键词】  抗酸杆菌；支气管灌洗液；检测方法

　　【摘要】 目的  探讨检测支气管灌洗液中抗酸杆菌的最佳方法。 方法  对155例痰涂片阴性疑似肺结核患者的支气管灌洗液采用涂片、集菌、改良罗氏培养法及Bactec培养法4种不同的检测方法检测抗酸杆菌。 结果  阳性检出率直接涂片法为2.6%，集菌法为11.6%，改良罗氏培养法为18.1%，Bactec培养法为31.6%；集菌、培养法与直接涂片法抗酸杆菌的阳性检出率比较均有显著性差异（P<0.05）。 结论  对疑似肺结核患者支气管灌洗液进行抗酸杆菌检测时，最好采用集菌和培养法同时进行，才能为临床诊治提供最有价值的资料。

　　【关键词】 抗酸杆菌；支气管灌洗液；检测方法

　　Methodological studies on detecting acidfast bacilli in bronchial perfusate

　　【Abstract】 Objective  To explore the best method of detecting acidfast bacilli in bronchial perfusate. Methods  Acidfast bacilli in bronchial perfusate of 155 smearnegative patients with borderline pulmonary tuberculosis were detected with 4 different methods as smear technique，condensing method，modified Rosenbach's culture and Bactec culture to detect acidfast bacilli. Results  Positive detectable rates of the 4 methods were 2.6% of direct smear technique，11.6% of condensing method, 18.1% of  modified Rosenbach's culture and 31.6% of Bactec culture repectively. There were significant differences in positive detectable rates between the smear technique and the other 3 methods(P<0.05). Conclusion  Combinations of condensing method and cultures detecting acidfast bacilli in bronchial perfusate could provide value data for clinical diagnosis and treatment for patients with borderline pulmonary tuberculosis.

　　【Keywords】 Acidfast bacilli; bronchial perfusate; detection method

　　抗酸分枝杆菌是一种缓慢生长菌，国内外学者一直在寻找快速、敏感、简便的实验室检测方法［1］。为了提高疑似肺结核患者痰涂片阴性的抗酸杆菌检出率，可采用支气管灌洗液检测抗酸杆菌来帮助诊断。为此，作者采用四种不同的检测方法对支气管灌洗液进行检查，以探讨检测支气管灌洗液中抗酸杆菌的最佳方法。报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本  选用我院155例痰涂片阴性疑似肺结核患者的支气管灌洗液为检测标本。

　　1.2 标本处理  将支气管灌洗液直接涂片2张后，移到2支无菌离心管内，10000转・min-1，离心15min，一管弃去上清液，用沉淀制作涂片2张，4张涂片一起荧光染色，镜检；另一管弃去上清液，留约1ml，加入等量4%NaOH振荡15min，10000转・min-1，离心15min，弃去上清液，用生理盐水洗三次后加入0.7ml生理盐水，混匀取0.2ml接种于改良罗氏培养基中0.1ml，放入37℃恒温箱培养。

　　1.3 方法  直接涂片法和沉淀集菌法均用荧光染色，涂片，集菌，染色方法，改良罗氏培养法和所有试剂配制，均按常规进行。Bactec快速培养法按说明书操作。

　　2 结果

　　155例痰涂片阴性疑似肺结核患者支气管灌洗液检测抗酸杆菌的四种不同方法检测结果比较，见表1。

　　表1  支气管灌洗液四种不同方法检测结果比较（略）

　　表1显示，155例支气管灌洗液标本，直接涂片法阳性4例，阳性率2.6%；沉淀集菌法阳性18例，阳性率11.6%；改良罗氏培养法阳性28例，阳性率18.1%；Bactec快速培养法阳性49例；阳性率31.6%。

　　3 讨论

　　影响抗酸杆菌检出率因素较多，如个体差异，标本采取部位，标本前处理，标本中药物残留量，培养基选择，检验方法及试剂批号等。本研究显示，直接涂片法阳生率较低（2.6%），可能因为标本虽然来自病变部位，但有大量液体稀释，含菌量较小。集菌法阳性率（11.6%）比直接涂片法高4.5倍（P<0.05），提示支气管灌洗液经离心沉淀后抗酸杆菌浓集在一起，菌量相对增加，集菌阳性检出率显著升高，能为临床诊断提供更有力的依据。由于支气管灌洗液标本来之不易，诊断价值高，这就要求检验人员对支气管灌洗液标本检测抗酸杆菌时要认真对待，不能草草直接涂片了事，一定要高速离心后涂片检查才更有意义。改良罗氏培养法阳性率（18.4%）与集菌法比较差异无显著性。集菌法快速简便，所反映的是病灶的排菌情况；改良罗氏培养法是传统的抗酸分枝杆菌培养法，结果可靠但耗时长［2］，它反映的是抗酸杆菌的生长能力，同时不可以检测抗酸杆菌的药物敏感性，所以两种方法不能互相替代，可以同时定期检测。Bactec快速培养法阳性率为31.6%，比改良罗氏培养法阳性率高，说明液体培养基有利于抗酸杆菌生长，尤其适用于含菌量少，化疗后抗酸杆菌生长力低下的标本。据统计资料显示，Bactec快速培养法检出阳性最少需要2天，而改良罗氏培养法检出阳性最少9天，虽然Bactec法检测速度快，检出阳性率高，但由于仪器和试剂价格昂贵，受到一定限制。

　　本研究还显示，集菌法阳性，直接涂片法，改良罗氏培养法，Bactec法均为阴性者，提示可能是因患者长期用药影响了抗酸杆菌的生长能力，培养法也不能检出全部阳性标本。所以对疑似肺结核患者支气管灌洗液进行抗酸杆菌检测时，一定要集菌和培养同时进行，才能为临床诊治提供最有价值的资料。

　　［1］ 庄玉辉.直接杂交法检测痰液中结核分枝杆菌［J］.临床检验杂志，2001，19（1）：1

　　［2］ 刘正华.结核分枝杆菌快速培养灾光检测法［J］.临床检验杂志，2001，19（6）：347