胎膜组织氧化应激状态与胎膜早破的相关性

【关键词】  氧化应激；胎膜早破；超氧化物歧化酶；丙二醛；维生素E

　　摘要：目的  通过对胎膜早破孕妇胎膜组织中的氧化应激指标――超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及维生素E(Vit E)的测定，探讨胎膜组织的氧化应激与胎膜早破的关系。方法  用化学比色法对30例胎膜早破孕妇和30例正常孕足月妇女胎膜组织中SOD、MDA及Vit E进行测定。结果  与正常孕足月妇女相比，胎膜早破孕妇胎膜组织中MDA水平均升高 (P<0.05)，而SOD、Vit E水平均下降(P<0.05, P<0.05)。结论  胎膜组织的氧化应激与胎膜早破具有相关性。

　　关键词：氧化应激；胎膜早破；超氧化物歧化酶；丙二醛；维生素E

　　胎膜早破(PROM)是指临产前胎膜破裂，其中妊娠满37周后的胎膜早破发生率为10%，妊娠不满37周的胎膜早破发生率为2.0%-3.5%[1]。胎膜早破是产科常见的并发症，对母儿威胁较大。近年来，国内外学者主要从感染、内分泌、免疫等方面进行研究，但其确切的病因及发病机制尚不十分清楚。本研究旨在从氧化/抗氧化角度研究胎膜早破的病因及发病机制。

　　1  材料与方法

　　1.1  研究对象  随机选取2004年6月至2005年3月我院产科病房孕妇60例，分为两组：胎膜早破组30例，年龄22-32岁，孕周28-41周。对照组为30例正常足月孕妇，年龄24-31岁，孕周37-41周。 两组均为单胎初产孕妇，无妊娠并发症及内外科合并症，无宫内感染及其他临床发热征象，既往均未服用Vit E等药物。胎膜早破诊断标准：临产前孕妇突感较多液体自阴道流出，窥器检查见阴道后穹隆有液池且有胎脂样物自宫口流出，硝嗪试纸/pH试纸测阴道液阳性(pH>7)，阴道液涂片可见羊齿状结晶(6版《妇产》)[1]。

　　1.2  方法

　　1.2.1  胎膜组织标本制备  于剖宫产或阴道分娩后，取胎膜组织0.05-0.5g，以冷生理盐水漂洗至内含血块洗净，吸干水分，称重，置-70℃冰箱备用。

　　1.2.2  实验步骤  ①胎膜组织匀浆制备:将己称重的胎膜组织加9倍生理盐水，倒入放置于冰块中的玻璃匀浆管内，充分磨碎，使组织匀浆化，然后将匀浆以2000r/min离心5min，其上清液即为10%组织匀浆。根据不同要求加生理盐水配成不同浓度的胎膜组织匀浆，以进行组织SOD、MDA、VitE测定。②MDA、SOD和Vit E测定：MDA浓度测定采用硫代巴比妥酸法；SOD活力测定用黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶反应系统,以化学发光分析法测定；Vit E用比色法测定。 所用试剂由南京建成生物制品公司提供。仪器用722分光光度计，并按所给公式出各实验结果。
　　1.3  统计学处理  各项测定值以〖WTB1〗(〖AKx-D〗±s)表示，检验方法采用方差齐性检验、t检验及直线相关分析。

　　2  结果

　　与正常孕足月组比较， 胎膜早破组胎膜组织中SOD、Vit E含量下降(P<0.05，P<0.05)，而MDA浓度升高(P<0.05，表1)。

　　表1  两组孕妇胎膜组织中SOD、MDA、Vit E测定结果（略）

　　Table 1  Results of SOD, MDA and Vit E in fetal membranes of two groups

　　*P<0.05 vs. control group

　　3  讨论

　　氧化应激是指活性氧(ROS)生成和抗氧化防御系统之间的不平衡状态。这种不平衡状态可在活性氧的生成超过抗氧化防御系统时或者在抗氧化剂活性降低或减少时发生。生理状态下，细胞在代谢过程中可产生少量处于自由状态的活性氧，包括氧自由基(OH・ 和 O2・-)和非氧自由基(单线氧-O2和H2O2)；但同时也存在着抗氧化物质，可以及时清除活性氧，使活性氧的生成和降解处于平衡状态，因而对机体并无有害影响。这些抗氧化物质包括低分子自由基清除剂和酶性自由基清除剂，前者包括细胞脂质部分的清除剂如抗坏血酸、Vit E、还原型谷胱甘肽等，后者包括过氧化氢酶(CAT)和SOD。在病理状态下，如缺血、缺氧或炎症时，由于活性氧生成过多或抗氧化物质含量减少和(或)活性降低，机体内可蓄积过多的活性氧，使氧化/抗氧化平衡状态受到破坏，从而引发氧化应激。而过多的活性氧可对机体造成有害影响：它们可以逸入细胞浆内，从而对DNA、蛋白、脂质及其他重要的生物分子造成氧损伤[2], 并且在此过程中形成了许多代谢产物，包括氧化硫醇，过氧化脂质和异丙前列腺素[35]。 MDA是细胞膜磷脂中的多不饱和脂肪酸受到活性氧攻击后发生脂质过氧化反应的最终产物，其水平高低可直接反映体内脂质受到过氧化损伤的程度，也可间接反映体内的活性氧水平。

　　胎膜是由绒毛膜和羊膜组成。从其大体结构上可分为细胞和细胞基质，从化学成分上则包括脂质 、核酸、胶原、蛋白聚糖和糖蛋白等。胎膜破裂可以单独由细胞外基质的降解引起，也可单独由胎膜细胞的坏死或凋亡引起，也可由二者同时起作用而引起。Wall[6]通过研究表明，胎膜早破伴随着胎膜胶原的广泛降解。Plessinger[7]对离体胎膜暴露于活性氧(次氯酸)中的胶原变化进行研究：将正常妊娠孕妇的胎膜暴露于次氯酸中4h，然后用免疫组化法测定Ⅰ型和Ⅳ型胶原活性。结果显示，暴露于次氯酸中羊膜上皮细胞和Ⅰ型胶原(而不是Ⅳ型胶原)受到强烈损伤。因此，认为次氯酸(一种活性氧)可以损伤羊膜上皮细胞和Ⅰ型胶原而引起胎膜早破。本研究结果显示，与正常孕足月组妇女相比，胎膜早破组妇女胎膜中的SOD、V it E含量下降，而MDA浓度升高。这说明胎膜早破孕妇胎膜组织中的脂质过氧化增多，同时也间接说明其中的活性氧含量增多，超过组织的抗氧化能力，处于氧化应激状态。因而我们推测胎膜早破可能是由于过量的活性氧使细胞膜中的多不饱和脂肪酸过度氧化，从而使膜蛋白变性，脆性增加，使细胞受到破坏而引起；也可能是由于过量的活性氧使细胞外基质的胶原蛋白质发生交联、变性，使细胞外基质降解而发生；还可能是由于过量的活性氧使DNA断裂、交联、碱基羟基化，从而对DNA造成损伤而引起；也可能是上述因素一种或几种同时起作用的结果。

　　本研究说明胎膜早破孕妇胎膜组织处于氧化应激状态中。由于胎膜组织无血管，其营养来源主要依赖于外周，而胎膜又与羊水、蜕膜紧密接触，故有关胎膜组织的氧化应激是否与蜕膜、羊水的氧化应激有关，尚待进一步研究。

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　　[1]乐杰. 妇产 [M]. 第6版. 北京：人民卫生出版社, 2004:145.

　　[2]Butterfield DA, Koppal T, Howard B ,et al. Structural and functional changes in proteins induced by free radicalmediated oxidative stress and protective action of the antioxidants Ntertbutylalphaphenylnitrone and vitamin E [J]. Ann N Y Acad Sci, 1998,854:448462.

　　[3]Raijmakers MT, Zusterzeel PL, Roes EM, et al. Oxidized and free whole blood thiols in preeclampsia [J]. Obstet Gynecol ,2001,97(2):272276.

　　[4]MutluTurkoglu U, AykacToker G, Ibrahimoglu L, et al. Plasma nitric oxide metabolites and lipid peroxide levels in preeclamptic pregnant women before and after delivery [J]. Gynecol Obstet Invest,1999,48(4):247250.

　　[5]Walsh SW,Vaughan JE,Wang Y, et al. Placental isoprostane is significantly increased in preeclampsia [J]. Faseb J, 2000,14:12891296.

　　[6]Wall PD, Pressman EK, Woods JR JrPreterm premature rupture of the membranes and antioxidants: the free radical connection [J]. J Perinat Med, 2002,30(6):447457.

　　[7]Plessinger MA, Woods JJ, Miller RK. Pretreatment of human amnionchorion with vitamin C and E prevents hypochlorions acidinduced damage [J]. Am J Obstet Gynecol, 2000, 183(4):979985.