三种夏枯草对结核分枝杆菌的药物敏感性研究

【关键词】  ,,H37Rv菌株；中草药；夏枯草

　　摘要   目的：探讨夏枯草对结核分枝杆菌的药物敏感性。方法：对结核分枝杆菌H37Rv菌株，用三种夏枯草水煎剂作药物敏感试验。结果：“硬毛夏枯草水煎剂”对H37Rv菌株敏感性最好，而“山菠菜夏枯草水煎剂”与“夏枯草水煎剂”相对依次较差。结论：中药夏枯草对结核分枝杆菌具有较好的抑菌作用。

　　关键词   H37Rv菌株；中草药；夏枯草

　　Search after the Effect of Drug Sensitivity of the Three Chinese Medical Material Prunella for M.Tuberculosis 
　　Abstract   Objective：Approach the effect of drug sensitivity of the three Chinese medical material prunella for M.tuberculosis. Methods：Takes aqueous solution“P.hispid”，“P.asiatica” and “P.vulgaris” as the reagent to H37RV strain for drug sensitivity.Results：Aqueous solution“P.hispid”is the best one for drug sensitivity to H37RV strain，while aqueous solution “P.asiatica” is better than that of “P.vulgaris”.Conclusion：Chinese medical materiaal prunella have better antibacterial activity for M.tuberculosis.

　　Key words   H37RV strain；Chinese herbal medicine;Prunella

　　结核病是严重危害人类健康的传染病之一。随着抗结核药的广泛应用，临床耐药菌及药物副作用逐渐增多，寻求新的抗痨药物，尤其是从中草药中开发疗效好、副反应小的抗结核药物来解决肺结核病人在过程中因抗痨药物产生过敏反应和肝损害，是近年来学术界探索和研究的热点。为此，我们用中草药“夏枯草”对结核分枝杆菌H37Rv株进行抑菌试验，实验证明中草药“夏枯草”对结核分枝杆菌具有较好的抑菌作用。

　　1   材料与方法

　　1.1   材料(1)结核分枝杆菌H37Rv菌株，卫生部结核病控制中心提供，使用时配成105 CFU/mL。(2)豆浸液罗氏改良培养基，按《结核病诊断细菌学检验规程》配制并分装试管，分三组管，每组6个管，每组的第1管分装9 mL培养基，其它各管均分装5 mL，待用。(3)中草药：①硬毛夏枯草;②山菠菜夏枯草;③夏枯草，由本药学系综合实验室提供。将上述三中夏枯草称取10 g，置于100 mL蒸馏水中，浸泡过夜，次日在电炉上煮沸30 min，除药渣，然后隔水蒸发成1/10的浓缩药液，待用。

　　1.2   方法将三种中草药夏枯草浓缩液分别加入上述制备好的罗氏培养基中，每种夏枯草取1ml放入第一管中，然后进行对倍稀释，使其培养基中的药物的浓度达到1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160；第6管为空白对照管（不加药物，每种药设一管对照），将加入药液的罗氏培养基摇匀，置血清凝固器中，进行间隙灭菌后，做无菌试验，冰箱保存待用。然后将配置成105 CFU/mL结核分枝杆菌（H37Rv）菌液，分别取0.1 mL接种已含有三种“夏枯草药液”的罗氏培养基试管内，待表面的接种液干燥后，放入37 ℃培养箱内进行培养，1 W后开始观察生长情况，培养5 W，待培养基表面的淡黄色，颗粒性菌落出现时，涂片，抗酸染色镜检，找到抗酸杆菌为阳性；5 W后培养基表面未见菌落生长，涂片，抗酸染色镜检，未见抗酸杆菌为阴性。

　　2   结果     

　　结核分枝杆菌H37Rv菌株在三种含有中草药“夏枯草”培养基内，以1∶80浓度的稀释下，夏枯草水煎剂在培养22 d出现阳性，而硬毛夏枯草水煎剂和山菠菜夏枯草水煎剂在培养23 d出现阳性。以1∶40浓度的稀释下，夏枯草水煎剂在培养23 d出现阳性，而山菠菜夏枯草水剂在培养22 d出现阳性，硬毛夏枯草水煎剂在培养24 d出现阳性。以1∶20浓度稀释下，夏枯草水煎剂在培养25 d出现阳性，而山菠菜夏枯草水煎剂在培养34 d出现阳性，硬毛夏枯草水煎剂为阴性。以1∶10浓度稀释下，夏枯草水煎剂在培养35 d出现阳性，而山菠菜夏枯草水煎剂与硬毛夏枯草水煎剂均阴性。结果证明硬毛夏枯草水煎剂对结核杆菌H37Rv菌株抑制作用最好，而山菠菜夏枯草与夏枯草水煎剂相对较差。见表1。

　　表1   三种夏枯草对结核杆菌（H37Rv）菌株药物敏感试验结果（略）

　　“+”表示生长；“-”表示不生长；数字：表示生长的天数;空白对照在22 d时开始生长

　　3   讨论     

　　由于抗结核分枝杆菌药物对肝脏具有一定的损害影响［１］，给结核病的造成很大的困难。临床上抗-HCV阳性患者肝功能损伤率明显高于阴性患者［2，3］，原有HBV感染者，肝组织已有潜在性损伤，因此在化疗过程中肝细胞再度受到抗结核药物侵害，双重损伤因素可导致严重肝细胞坏死，甚至成爆发性肝炎或称药物性肝炎［3～5］。夏枯草为唇形科植物，具有清热散结、舒肝化痰、消炎驱肿之功效，副作用又小，是用于治疗瘰疬、肝病、淋巴结核等常用中草药［6］。     

　　本次实验结果提示，菌量最终浓度为105 CFU/mL时，空白对照在22 d时结核分枝杆菌形成典型的菌落，而三种夏枯草在1∶160的稀释度时，结核分枝杆菌的生长情况与对照相似，说明在此浓度下三种夏枯草都未有抗菌活性。硬毛夏枯草水煎剂和山菠菜夏枯草水煎剂在1∶40浓度的稀释下，经37 ℃培养箱内进行培养5周后得到的数据显示，前者比后者晚2 d生长，它们之间无明显差异。硬毛夏枯草水煎剂和山菠菜夏枯草水煎剂在1∶20浓度的稀释下，前者未生长而后者34 d生长，它们之间有明显差异。夏枯草水煎剂在几种稀释浓度下均生长。说明硬毛夏枯草水煎剂对结 核分枝杆菌具有较好的抑菌作用。因此，为了能在临床上减少患者对抗结核药物的副作用，采用中西医结合的方法，达到既能治疗结核病同时又具有护肝保肝的功效，提高结核病治疗水平，为此我们将做更进一步的探索。

　　［１］   王异新.异烟肼并利福平导致严重肝损害.防痨杂志，1996，1:35.

　　［２］   韩素霖，蔡   斌.抗结核药物对乙肝病毒标志物阳性者肝功能的影响.中国防痨杂志，1996，16:63.

　　［３］   张敦熔.结核病新概念.北京:中国农业科技出版社，1995，8:172.

　　［４］   蔡雄茂.氧氟沙星治疗肺结核和肝损14例疗效分析.中国防痨杂志，1996，4:174.

　　［５］   郑道武.抗结核药物所致急性肝坏死.中国防痨杂志，1996，4:188.

　　［６］   田   晶.夏枯草皂苷A的结构鉴定.药学学报，2000，35:1.