川芎嗪对青霉素致痫大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量的变化

【摘要】  目的: 探讨川芎嗪(TMP)对青霉素致痫大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量的变化。方法： 使用青霉素致痫大鼠模型, 采用BL?410生物机能实验系统记录双侧大脑皮层痫样放电, 待癫痫样放电稳定后, 腹腔注射不同剂量的TMP, 待其抑制作用最明显时,采血检测血小板聚集率和去甲肾上腺素含量,观察川芎嗪对青霉素致痫大鼠血液中血小板聚集率和去甲肾上腺素含量的变化，并采用统计学分析。结果： TMP组与青霉素致痫组血小板聚集率和去甲肾上腺素含量比较差异有显著性 (P<0.01)。结论：川芎嗪对青霉素致痫大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量有明显的影响。

【关键词】  川芎嗪； 癫痫； 血小板聚集率； 去甲肾上腺素

　　癫痫包括一组疾病和综合症，是大脑神经元突发性异常放电，导致短暂的大脑功能障碍的一种慢性疾病。由于异常放电的神经元的部位以及放电扩散的范围不同，可表现为发作的运动、感觉、植物神经、意识及精神障碍。它是多种原因引起的临床常见的症状之一。神经系统具有复杂的兴奋?抑制反馈机制，以维持神经细胞膜的稳定性。癫痫即是兴奋过程的增强，抑制过程的减弱。正常情况下，每一种神经元都有节律性的自发放电活动，但频率较低。在癫痫病灶的周围部分，其神经元的膜电位与正常神经元有所不同，在每次动作电位发生之后出现阵发性去极化偏移，并产生高幅高频的棘波放电，在历时数十至数百毫秒之后转入超极化状态。癫痫的病因和病理机制非常复杂, 但各种癫痫发作的本质都是大脑皮质神经元的过度同步放电, 异常放电的确切机制尚未完全阐明。川芎嗪(Ligustrazin,LGT) 是中药川芎的有效成分之一, 有活血化淤作用。有资料表明, 川芎嗪常用于心脑血管疾病、糖尿病等多种高粘滞综合征的治疗［1~3］。情绪紧张、激动可引起高血压等心血管疾病,与交感肾上腺系统的激活有关。TMP对癫痫血液流变学作用的研究目前国内外尚无报道, 本实验主要目的在于研究TMP对青霉素致痫大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量的变化,为临床治疗癫痫病人,改善血液流变性,提高大脑血流量具有一定的临床意义。

　　1  材料与方法

　　1?1  材料

　　1?1?1  实验动物  SD大鼠由武汉大学医学院实验动物中心提供, 雌雄不拘,体重200～ 250g。

　　1?1?2  实验药品及试剂  盐酸川芎嗪注射液(批号0107001),常州制药厂生产；注射用青霉素钠(批号00109306), 华北制药股份有限公司生产。

　　1?1?3  实验仪器  BL?410 生物机能实验系统, 成都泰盟有限公司生产；江湾I?C型立体定向器, 第二军医大学器材处生产。自动血液黏度计、LBY?NJ 血小板聚集仪；全自动血凝仪及配套试剂；奥地利产安托斯三型酶标仪；日本产MEK?6108 型全自动血细胞分析仪。

　　1?2  方法

　　1?2?1  癫痫动物模型  实验选用健康SD大鼠，用10%乌拉坦以10m l·kg-1体重腹腔注射(ip ) 麻醉, 将动物固定在江湾I?2C 型立体定向器上,于大脑左、右两侧前卤后3mm , 矢状缝旁开3mm行开颅手术, 暴露大脑皮层记录区域(2mm×2mm),将银球电极置于左、右两侧的记录部位,信号输入置BL?410生物机能实验系统,进行左、右两侧脑电记录。用浸有青霉素溶液的明胶海绵(200u/mm3)置于左侧大脑皮层表面, 诱发大鼠大脑皮层癫痫样放电, 待癫痫放电稳定后, 移去明胶海绵, 用浸有温热生理盐水棉球盖住创口。

　　1?2?2  试验分组及取材  将实验大鼠随机分为3组, 每组8只: A组(生理盐水对照组) , 待癫痫放电基本稳定后，腹腔注射生理盐水; B组(青霉素致痫组),青霉素诱发癫痫1h后取材； C组 (TMP40mg·kg-1治疗组),青霉素诱发癫痫放电稳定后,再腹腔注射TMP(40mg·kg-1),待抑制作用最明显时取材。3组同时心脏采血8ml, 立即分三管抗凝。在含有0. 4 ml(109mmol/L) 枸橼酸钠抗凝管中加入全血3.6ml, 按操作规程提富含血小板血浆(PRP)和乏血小板血浆(PPP);在血细胞分析上计数PRP血小板, 调整其血小板数至150×109/L 左右;以3.0 Lmol/L的ADP作为血小板聚集诱导剂, 在血小板聚集仪上测定PAG(1)、PAG(5)、PAG(M)血小板聚集率。取全血1.8 ml, 加入含有109mmol/L枸橼酸钠(1∶9)的抗凝管中,颠倒混匀,在血凝仪上测定血浆纤维蛋白原含量;取第二管剩余血浆,在酶标仪上用德国IBL公司ELISA试剂测定血浆去甲肾上腺素含量。

　　1?3  统计学处理将检测到的所有数据采用SPSS统计软件处理，结果以均数±标准差(±s)表示，检验水准α为0.05。

　　2  结果

　　表1  川芎嗪对青霉素致痫大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量变化的比较（略）

　　注: * 癫痫组与对照组和TMP组比较,P<0.01;     ** 对照组与TMP治疗组比较,P>0.05。
             
　　3  讨论

　　癫痫是一种反复发作的临床症候群，发作期间脑电可记录到棘波、棘?慢复合波等癫样放电，关于癫痫的发病机理目前尚不清楚。有研究结果表明，癫痫大鼠海马及皮层神经细胞外Ca2+活度下降，证实有Ca2+内流存在［4，5］  ，致痫剂可引起神经细胞Na+、Ca2+内流增多，从而出现异常放电并迅速传播导致各种形式的癫痫发作［6］。癫痫病患者血液流变学与正常人比较差异有显著性。一方面表现为红细胞的Hct 、全血黏度、血浆黏度高于正常健康人。影响血液黏度有许多内在的因素,其中影响最大的是红细胞压积,红细胞压积是影响血液黏度的主要要素。血液是非牛顿液体，在同一剪变率下,红细胞压积愈大,血黏度愈大,特别是红细胞的压积>45%时血液的黏度随红细胞压积的增高而呈指数增高，因此红细胞的压积升高是癫痫患者血液呈高黏滞性的主要原因,癫痫病人的血液具有较高的黏滞性是无疑的。另一方面患者脑血流量(CBF) 则明显降低。癫痫病人发作时,由于强烈的应激反应,可使儿茶酚胺和5?羟色胺的分泌增加,从而引起小动脉痉挛和小静脉无力,以致血液瘀滞,血液流速减慢,脑血流量下降。同时由于血液粘滞性升高,红细胞刚性增大,使红细胞变形性降低,红细胞的正常生理功能受到影响,进一步加重癫痫患者大脑的缺氧缺血。川芎嗪是中药川芎中提取的生物碱, 是一种新型的钙离子拮抗剂［7，8］, 拮抗内皮素、去甲肾上腺素释放, 对抗血管紧张素Ｅ及血管加压素等体液因子的缩血管效应, 抑制小血管平滑肌痉挛, 扩张小动脉改善微循环作用。有资料表明, 川芎嗪有降低血液黏度和抑制ADP诱导的血小板聚集作用, 对已聚集的血小板有解聚作用［9，10］。本实验结果显示, 川芎嗪能显著降低致痫大鼠血小板聚集率和去甲肾上腺素含量，具有降低红细胞刚性和聚集性, 增强红细胞的变形能力, 使红细胞由聚集状态成为相对分散状态, 使血浆中纤维蛋白原分解, 因而降低了全血黏度。有资料表明, 川芎嗪有降低血液黏度和抑制ADP诱导的血小板聚集作用, 对已聚集的血小板有解聚作用［11］。我们的实验结果也证明了这个观点。实验结果提示川芎嗪在血液流变性方面起着重要作用。

【】
  　　1 李树廷, 王成秀. 川芎嗪治疗流行性出血热少尿期39 例疗效观察?临床荟萃, 2003,18 (22) : 1306~1306.

　　2 何荣杰,刁统美.川芎嗪的临床新应用. 误诊学杂志, 2001,1(2):307.

　　3 程先超,刘新泳,徐文方.川芎嗪心脑血管药研究进展. 中国药学杂志, 2005,25(7) : 661~663.

　　4 谢虹，郭文武，王阿敏，等. 马桑内酯致癫痫大鼠大脑皮层及海马神经元钙离子活度的变化. 同济医科大学学报，1996：25（4）：253.

　　5 Willmott IV ,Sethi JK, Walseth TF, et al. Nitric oxide?induced mobilization of intracellular calcium Via the cyclic ADP?ribose signaling Pathway. J Biol chem， 1996, 271:3699?

　　6 李树廷, 王成秀. 川芎嗪治疗流行性出血热少尿期39例疗效观察. 临床荟萃, 2003, 18 (22) : 1306~1306.

　　7 何荣杰, 刁统美. 川芎嗪的临床新应用. 中国误诊学杂志, 2001,1 (2): 307.

　　8 程先超, 刘新泳, 徐文方. 川芎嗪心脑血管药理学研究进展. 中国医院药学杂志, 2005, 25(7): 661~663.

　　9 陈灏珠. 内. 第3版. 北京: 人民卫生出版社, 1993， 597.

　　10 马中富, 李天木, 黎湛兴, 等. 慢性肺心病急性加重期血小板内Ca2+、cAMP和TXB含量关系的探讨, 中国急救医学,1998,18(5): 15.

　　11 彭伟, 段生福, 崔利萍. 磷酸川芎嗪缓释胶囊对肺心病血液流变学的影响. 中华内科杂志, 1993,31(1): 37.