川芎嗪对严重烫伤大鼠肝组织脂质过氧化影响的探讨
【摘要】 目的:探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine，TMP）对烫伤大鼠肝组织脂质过氧化的影响及保护作用。方法:采用大鼠40%体表面积（TBSA）Ⅲ度烫伤模型，通过检测大鼠严重烫伤后肝组织内丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）和超氧化物歧化酶（SOD）的改变，观察川芎嗪对烫伤大鼠的保护作用。结果:40% TBSAⅢ度烫伤后大鼠肝组织内MDA显著升高，GSH-PX和SOD活力显著降低，川芎嗪组大鼠肝组织内MDA含量显著降低，GSH-PX和SOD活力显著升高，与单烫伤组比较各指标均有显著性差异。结论:烫伤后肝组织内脂质过氧化增强，抗氧化能力减弱，川芎嗪具有较强的抗氧化、抗自由基损伤的保护作用。
【关键词】 肝组织; 脂质过氧化反应
严重烫伤后，毛细胞血管通透性增加，大量血浆样体液渗出，致使循环血量不足，造成广泛的组织器官缺血缺氧，从而引起一系列病理生理改变。 近年来，自由基在细胞损伤中的作用日益受到重视，本研究拟通过腹腔注射川芎嗪，以观察其对烫伤大鼠肝脂质过氧化的影响及保护作用。
1材料和方法
1.1动物模型制作和取材选用Wistar大鼠90只，雌雄兼用，体重（250±30）g，由湖北省医学院实验动物中心提供。随机分为对照组（10只）、单烫伤组（40只）、治疗组（40只）。单烫伤组和治疗组用8%硫化钡脱去背部约40%体表面积（TBSA）的毛，洗净擦干，以10%水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉大鼠后浸入沸水中烫伤16s，造成大鼠背部40% TBSA Ⅲ 度烫伤。单烫伤组烫伤后以生理盐水代替药液于腹腔注射，以后每8g注射一次。治疗组在大鼠烫伤后补给生理盐水抗休克的同时，于腹腔注射川芎嗪注射液40mg/kg，以后每8g给药1次。各组分别于烫伤后4h、8h、24h和48h活杀大鼠留取标本。立即取肝组织，置于4℃冷生理盐水中，洗去表面的残血，滤纸吸干，准确称取1g，在组织均浆器中制成10%组织匀浆生理盐水液备用［1］。
1.2方法 GSH-PX测定采用DTNB直接法［2］，MDA测定采用比色法（体外法）［3］，SOD测定采用邻苯三酚法［4］。
1.3统计学处理应用SAS统计软件包进行 t 检验。
2结果
2.1GSH-PX的变化单烫伤组大鼠GSH-PX在烫伤后4h开始降低，与对照组相比有显著性差异 （P <0.01）; 川芎嗪组与单烫伤组各时相点相比GSH-PX逐渐升高，有显著性差异（ P <0.01）。结果见表1。
2.2MDA的变化单烫伤组大鼠MDA在烫伤后4h开始升高，48h达到高峰;与对照组比较有显著性差异（ P <0.01）;川芎嗪治疗组与单烫伤组各时相点比MDA均显著性降低（ P <0.01）。见 表2。
2.3SOD的变化单烫伤组大鼠伤后4h肝匀浆SOD活性开始降低，48h后降到最低，与对照组相比有显著性差异（ P <0.01）;川芎嗪治疗组与单烫伤组相比， SOD活性在伤后各时相点均显著高于单烫伤组（ P <0.01）。见表3。
表1 实验大鼠肝组织匀浆GSH-PX的变化（略）
注: * 与对照组比较， P<0.01; ** 与单烫伤组同时相点比较，P<0.01。
表2 实验大鼠肝组织匀浆MDA的变化（略）
注: * 与对照组比较， P<0.01; ** 与单烫伤组同时相点比较，P <0.01。
表3 实验大鼠肝组织匀浆SOD的变化（略）
注: * 与对照组比较， P<0.01; ** 与单烫伤组同时相点比较，P <0.01。
3讨论
严重烧伤后，血液灌注不良， 造成广泛的组织器官缺血缺氧， 引起一系列病理生理改变。缺血时，ATP代谢障碍、大量ATP分解导致黄嘌呤氧化酶和次黄嘌呤在缺血组织中聚积，缺血缺氧组织中氧张力突然增加，产生大量自由基，进而消耗机体抗自由基的SOD、GSH-PX，出现SOD、GSH-PX活性呈进行性下降。同时大量·O2 与H2 O反应形成氧化活性极强的·OH，·OH作用于组织细胞膜性结构中的膜脂不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化反应，致使烫伤后组织MDA含量增多。有研究表明，脂质过氧化产物MDA也可与氨基酸反应和蛋白质交联而损伤蛋白［5］。MDA是自由基与生物膜多聚不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物，其产生的量与自由基的量相平衡，因而测定MDA的量可反映自由基的水平。自由基的产生大于清除系统的清除能力，造成体内自由基的累积增多，从而诱发生物膜中不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，使其对Ca2+的屏障作用减弱，导致Ca2+内流，肝细胞浆Ca2+超载，导致细胞内Ca2+依赖酶激活下降，细胞损伤，因此，体内脂质过氧化增强在脏器损害中起重要的作用［5～7］。而GSH-PX是组织细胞内抗脂质过氧化的重要成份，它与SOD一起抑制脂质过氧化的发生和清除自由基。川芎嗪是从川芎的生物碱中分离得到的有效单体，具有典型的钙离子拮抗剂的特性，有较强的扩张微血管、改善微循环、降低血黏度、改善血液流变学、调节血小板功能和抗凝等作用［6］，可通过提高SOD的活性而加强自由基的清除。本研究结果表明，烫伤后肝组织MDA显著升高， SOD、GSH-PX显著降低，说明烫伤后肝组织脂质过氧 化反应增强，抗氧化酶消耗过多，自由基的产生超过清除能力，氧化和抗氧化失衡。本研究利用川芎嗪注射液治疗大鼠40% TBSAⅢ度烫伤，结果表明， 川芎嗪注射液有降低肝组织MDA的含量，减缓对SOD、GSH-PX的损伤，促进SOD、GSH-PX抗氧化酶的生成和活性提高，提示川芎嗪注射液具有较强的抗氧化、抗自由基的损伤作用。综上所述，这些作用可能与川芎嗪有明显川芎嗪可扩张痉挛血管，降低血管对某些微血管物质的敏感性，改善微循环状态，从而提高机体对内毒素的耐受力有关。因此川芎嗪注射液是临床治疗烫伤很有应用前景的药物。
【】
1 陈勤，主编.抗衰老研究实验方法.北京:医药科技出版社，1996，490.
2 夏奕明，朱连珍.血和组织中谷胱甘肽过氧化物酶活性测定. 卫生研究，1987，16（4）:29～33.
3 向荣，王鼎年.过氧化脂硫代巴比妥酸分光光度法的改进.生物化学与生物物理进展，1990，1（3）:241～242.
4 邓碧云，彭勤生，李文杰.改良的邻苯三自由氧化测定超氧化物歧化酶活性的方法.生物化学与生物学进展，1991，18（2）:163～164.
5 邵洪，汪代良，尢忠义，等.氧自由基与蛋白质代谢.国外医学分子生物学分册，1990，12（1）:42.
6 吴建红，陕 光，张端莲，等. 川芎嗪治疗后肝纤维化组织中I型胶原平均光密度表达的比较. 数理医药学杂志，2006，19（2）:134～135.
