反相高效液相色谱法测定人血浆中拉呋替丁药物浓度

             作者：郑永，陈梅，赵春景，刘彬

【关键词】  拉呋替丁;血药浓度;反相高效液相色谱法

　　［摘要］目的: 建立拉呋替丁血药浓度的反相高效液相色谱测定方法。 方法: 采用Symmetry C18 色谱柱（54μm，4.6mm×150mm）;固定进样环20μL;流动相:甲醇∶0.005mol.L磷酸氢二铵=50∶50（V∶V）;流速:1mL.min;紫外检测波长:218nm;柱温:25℃。 结果: 拉呋替丁在0.506～0.01265mg.L范围内有良好的线性关系，其506.00、50.60、12.65μg.L的三个浓度的回收率分别为（99.05±3.31）%、（101.21±3.30）%、（94.87±3.18）%;日内RSD分别为3.44%、3.75%、4.67%，日间RSD分别为4.68%、6.98%、9.42%。 结论: 该方法简单、快速、准确，灵敏度高，可用于拉呋替丁的血药浓度测定及药动学研究。

　　［关键词］ 拉呋替丁;血药浓度;反相高效液相色谱法
    
　　Determination of lafutidine in serum with reverse high performance liquid chromatography
         
　　［Abstract］ Objective:To establish the method for measuring lafutidine pharmacal concentration in blood with reverse high performance liquid chromatography（HPLC）.Methods:HPLC was equipped with Symmetry C 18 column（54μm，4.6mm×150mm）.The mobile phase was meth-anol-0.005mol.L（NH4） 2 HPO 4 =50∶50（V.V），flow speed was1.0mL.min，column temperature was25℃，ultraviolet wavelength was218nm.Results:Within the range of0.506～0.01265mg.L，lafutidine showed a good linear relation in HPLC.The recoveries of three concentration506.00，50.60，12.65μg.L were（99.05±3.31）%，（101.21±3.30）%，（94.87±3.18）%，respectively.The RSD of inter-day variation of lafutidine were3.44%，3.75%，4.67%and the intra-day variation were4.68%，6.98%，9.42%.Conclusions:This method is simple，quick，accurate and of high sensitivity.It can be used for assay of lafutidine pharmacal concentration in blood and for the research of the pharmacokinetics of lafutidine.
   
　　［Key words］Lafutidine;Serum pharmacal concentration;Reverse high performance liquid chromatography
      
　　拉呋替丁是日本2000年4月上市的同时具有抑制胃酸分泌和增强粘膜防护因子作用的新型组胺H 2 受体拮抗药［1］ ，商品名为Pro-tecadin。拉呋替丁含量测定多采用HPLC法［2-5］ ，但尚未见血药浓度测定方法报道。本文建立了人体血浆中拉呋替丁的HPLC测定方法，为研究拉呋替丁药代动力学，指导临床设计合理用药方案，安全有效用药提供了依据。

　　1 仪器和试药

　　1.1 仪器
    
　　Waters高效液相色谱仪、Waters1525泵、Waters2487紫外可变波长检测器;Waters Breeze工作站。
    
　　1.2 试药
    
　　拉呋替丁标准品（成都英创科技有限责任公司，批号:031201）;磷酸氢二铵（分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号:20011023）;甲醇、乙酸乙酯均为色谱纯，重蒸馏水（本院制剂室生产）。

　　2 方法和结果
   
　　2.1 色谱条件
     
　　色谱柱:Symmetry C 18 柱（54μm，4.6mm×150mm）;固定进样环:20μL;流动相:甲醇∶0.005mol.L磷酸氢二铵=50∶50（V∶V）;流速:1mL.min;紫外检测波长:218nm;柱温:25℃。

　　2.2 对照品溶液的制备
    
　　精密称取干燥恒重的拉呋替丁标准品25.30mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得浓度为0.506mg.mL的拉呋替丁贮备液。将拉呋替丁贮备液稀释，配制成浓度分别为15.180、7.590、3.795、1.898、0.949、0.474μg.mL的拉呋替丁标准液，上述溶液均置冰箱中（5～10℃）保存备用。

　　2.3 方法可行性考察
    
　　取1mL空白人血浆，精密加入1mol.L的氢氧化钠溶液0.5mL，乙酸乙酯4mL，涡旋震荡2min，5000r.min离心3min，精密吸取乙酸乙酯层3mL，乙酸乙酯层于60℃水浴氮气下吹干，残留物用50μL甲醇溶解后进样分析，结果见图1。由图可见，拉呋替丁的保留时间约为5.8min，最低检测限为6.4μg.L，血浆中的内源性物质不干扰样品的测定。
         
　　A空白血浆          B空白血浆+拉夫替丁标准品          C拉夫替丁标准品
    
　　图1 拉呋替丁色谱图 （略）

　　2.4 线性关系考察
    
　　在空白血浆中分别加入拉呋替丁标准液，使血药浓度分别为506.00、253.00、101.50、50.60、25.30、12.65μg.L，分别取上述标准血样1mL，精密加入1mol.L的氢氧化钠溶液0.5mL，乙酸乙酯4mL，旋涡震荡2min，5000r.min离心3min，精密吸取乙酸乙酯层3mL，乙酸乙酯层于60℃水浴氮气下吹干，残留物用50μL甲醇溶解后进样分析，以浓度（X）与峰面积（Y）进行线性回归，得直线回归方程为:Y=1453.292+759.729X（r=0.99946），线性范围为12.65～506.00μg.L。
    
　　2.5 精密度和回收率实验
    
　　选拉呋替丁506.00、50.60、12.65μg.L的三个浓度的血浆，每个浓度各5个样品进行血浆中的精密度和回收率测定，结果见表1。
    
　　表1 拉呋替丁血浆样品的回收率和精密度（略）
    
　　表2 标准血样稳定性试验结果（略）
   
　　2.6 稳定性考察
    
　　（1）将浓度为50.60μg.L的标准血浆样品常温放置8h，按“方法可行性考察”项下操作，测定0、8h的血药浓度;（2）将浓度为50.60μg.L的标准血浆样品放置于-20℃冰箱中保存，于0、7、14d取出，常温下融冻后，按“方法可行性考察”项下操作测定血药浓度，血浆样品测定完后放回冰箱保存，下次融冻再测浓 度，结果见表2。
    
　　3 讨论
    
　　本文建立了测定人血浆中拉呋替丁浓度的反相HPLC方法。结果表明此方法是一个灵敏、简便、可靠的方法，完全可以满足临床药代动力学研究和血药浓度监测的要求。
   
　　在试验中，我们曾尝试用WATERS OASIS小柱提取、净化、采集血浆中的拉呋替丁，结果在拉呋替丁保留时间附近始终有无法去除的内源性物质干扰峰，严重干扰了拉呋替丁的测定。用本文的提取方法则能很好的排除内源性物质的干扰，而且此预处理方法简单快捷，线性范围广，处理成本低，为拉呋替丁的临床药代动力学研究和血药浓度监测提供了一种方法。由于该方法为体外药物测定，关于拉呋替丁进入人体，经人体的生物转化和药代动力学过程后，其中间代谢产物的分离和是否干扰测定的结果，以及该方法是否可用于其他体液或组织中拉呋替丁的浓度测定，我们将进一步研究。

　　:
    
　　［1］陈伟强，许德义.新型消化性溃疡药拉呋替丁［J］.新药与临床杂志，2003，22（4）:247-250.
   
　　［2］上官盈盈，施 菁，何贤晨，等.高效液相色谱法测定拉呋替丁中的有关物质［J］.中国应用药学，2005，22（4）:304-306.
   
　　［3］娄艳红，李小青，谢剑炜.梯度洗脱反相高效液相色谱法测定拉呋替丁纯度及含量［J］.药物分析杂志，2005，25（7）:831-834.
   
　　［4］潘春秀，徐秀珠，蔡小军，等.液相色谱-质谱联用分离拉呋替丁的顺反异构体［J］.分析化学，2005，33（3）:434-434.
   
　　［5］叶兴法，韩 鹏.HPLC法测定拉呋替丁及其片剂的含量［J］.西北药学杂志，2003，18（6）:243-244.