乳腺癌组织中PCNA、bcl-2与p53基因蛋白表达
作者：宾晓农 谭敏 何青莲 赵虹 刘鹏熙
【摘要】 ［目的］ 探讨乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织中PCNA、bcl-2与p53基因蛋白表达的差异及其在乳腺癌变中的意义。［方法］ 用免疫组化法检测46例乳腺癌、癌旁组织和33例正常乳腺组织中PCNA、bcl-2与p53基因蛋白表达。［结果］ ①PCNA指数：乳腺癌与癌旁组织差异无显著性；乳腺癌和正常乳腺组织(46.03±8.76与32.13±6.78)，乳腺癌旁和正常乳腺组织(42.90±7.92与32.13±6.78)差异均有显著性(P<0.01)。②bcl-2基因蛋白表达分值：乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织分别为：0.62±0.47，0.91±0.58，1.56±0.84；分值大小顺序呈表达上升趋势。③p53基因蛋白表达分值：乳腺癌、癌旁组织和正常乳腺组织分别为：2.21±0.96，1.86±0.87，0.87±0.57；分值大小顺序表达呈下降趋势。④在乳腺癌组织PCNA指数与bcl-2呈中度负相关(rs=-0.537)，与p53呈中度正相关(rs=0.628)，bcl-2与p53呈中度负相关(rs=-0.476)。［结论］ 乳腺癌的发生、过程中PCNA和p53分值增大，bcl-2分值变小，预示组织恶性程度可能增加，对判定乳腺组织的良、恶性及预后具有重要临床价值。
【关键词】 乳腺肿瘤 增殖细胞核抗原 bcl-2 p53
Expression of PCNA, bcl-2 and p53 Proteins in Breast Cancer
Abstract: ［Purpose］ To explore difference of expression of PCNA, bcl-2 and p53 proteins among breast carcinoma, para-carcinoma tissue and normal breast tissue and its value in development of breast carcinoma. ［Method］ PCNA, bcl-2 and p53 proteins in carcinoma tissue and para-carcinoma tissue in 46 patients with breast cancer and in 33 samples of normal breast tissue were detected by immunohistochemical S-P method. ［Results］ ①PCNA-PI showed no significant difference between breast carcinoma and para-carcinoma tissue (P>0.05), but significant differences were found between breast carcinoma and the normal breast tissue (46.03±8.76 vs. 32.13±6.78), and between para-carcinoma tissue and the normal breast tissue (42.90±7.92 vs. 32.13±6.78, P<0.01). ②The expression score of bcl-2 was 0.62±0.47 in breast carcinoma, 0.91±0.58 in para-carcinoma tissue and 1.56±0.84 in normal breast tissue, with a increasing trend from cancer to normal tissue. ③The expression score of p53 was 2.21±0.96, 1.86±0.87 and 0.87±0.57 in breast carcinoma tissue, para-carcinoma tissue and the normal breast tissue, with a decreasing trend from cancer to normal tissue. ④PCNA-PI showed moderately negative correlation with bcl-2 (rs=-0.537) and moderately positive correlation with p53 (rs=0.628), and bcl-2, moderately negative correlation with p53 (rs=-0.476) in breast carcinoma tissue. ［Conclusion］ Increases of PCNA and p53, decrease of bcl-2 predict the tissue malignant potential during occurrence and development of breast carcinoma, which play an important role for diagnosis and prognosis.
Key words: breast neoplasms; proliferative cell nuclear antigen; bcl-2; p53
关于乳腺癌发生、发展的确切机制尚未完全清楚，因而解决其诊治及预后评估等问题需要通过系统的分析，研究肿瘤组织内在的复杂，以便更快地找到有助于指导乳腺癌诊治的可靠方法，并采用综合分析手段，从单基因、单指标走向多基因指标相互作用的研究方式。本研究通过对乳腺癌、癌旁组织与正常乳腺组织中增殖细胞核抗原（proliferative cell nuclear antigen, PCNA），bcl?鄄2与p53基因蛋白表达三指标的分析，以探讨乳腺癌、癌旁组织与正常乳腺组织不同病变情形下的蛋白表达差异的临床意义。
1 材料与方法
1．1 临床资料
乳腺癌手术标本46例，均为女性，年龄为37岁~73岁。临床分期为Ⅲa~Ⅲb期；病理类型：均为浸润性导管癌，其中伴有淋巴结转移22例。病例均来源于广东省中2000年~2004年部分乳腺癌手术标本。
乳腺癌旁组织为46例乳腺癌边缘外约2cm左右处取材，经常规病理诊断均为增生性病变，并判定为轻、中度增生，石蜡包埋标本。
正常乳腺组织33例，均取自非乳腺肿瘤病人乳腺组织，经常规病理诊断均为非乳腺恶性病变的正常乳腺组织石蜡标本。
1．2 实验方法
PCNA、bcl?鄄2与p53基因蛋白表达免疫组化检测采用SP法。石蜡固定组织块，切片经二甲苯脱蜡，水化，经10min抗原热修复，然后用蛋白阻断液减少非特异性背景染色；加一抗孵育，4℃过夜；接着加二抗及过氧化物酶标记的链霉菌抗生物素蛋白, 其余步骤按SP试剂盒操作进行，DAB显色，苏木素复染。所有单抗及试剂盒均购自福州迈新公司。
1．3 观察指标
①增殖细胞核抗原指数（PCNA?鄄PI）：阳性结果为细胞核中出现棕黄色颗粒，浅黄色不计，1 000个细胞中染色阳性细胞数所占细胞的百分数。
②bcl?鄄2分值：bcl?鄄2为胞浆及胞膜出现棕色颗粒，在高倍视野下计数200个细胞，以阳性颗粒阳性细胞数＜5%为阴性(临床判断常规分级法)，计为0分；阳性细胞数为5%～25%，为 “+”，计为1分，阳性细胞数26%～50%为 “++”，计为2分，阳性细胞数＞50%为 “+++”，计为3分。
③p53分值：p53 为胞核着棕色，在高倍视野下计数200个细胞，以阳性细胞数＜5% 为阴性(临床判断常规分级法)，计为0分，阳性细胞数5%～25%，为“+”，计为1分，阳性细胞数26%～50%为“++”，计为2分，阳性细胞数＞50%为“+++”，计为3分。
1．4 统计学处理
各项检测指标数据运用SPSS11.0统计软件进行分析；计算出PCNA?鄄PI、bcl?鄄2和p53基因蛋白表达强度分值的平均数(x)及标准差(s)，行方差分析；乳腺癌组PCNA?鄄PI、bcl?鄄2和p53基因蛋白表达强度分值行等级相关分析。
2 结 果
2．1 乳腺组织中PCNA?鄄PI、bcl?鄄2与p53基因蛋白
表达分值
高倍视野下观察组织细胞，按检测方法PCNA、bcl?鄄2与p53基因蛋白表达指标的平均数及标准差见表1。
2．2 乳腺癌组织中PCNA?鄄PI、bcl?鄄2与p53基因蛋白表达分值的等级相关
对乳腺癌PCNA?鄄PI、bcl?鄄2与p53基因蛋白表达分值行等级相关分析，由表2可知：46例乳腺癌组织bcl?鄄2分值与PCNA?鄄PI，bcl?鄄2分值与p53分值等级相关系数分别为：-0.537，-0.476，均呈中度负相关（P<0.01）。乳腺癌细胞bcl?鄄2分值降低，PCNA?鄄PI和p53分值均增大。PCNA?鄄PI与p53分值呈中度正相关，等级相关系数为0.628（P<0.01）。
3 讨 论
本研究观察作为反映组织中细胞增殖水平的指标PCNA，在正常乳腺组织中的表达低于乳腺癌旁组织、乳腺癌组织，提示乳腺组织癌变过程伴有细胞增殖活性的提高，细胞增殖速率加快，DNA合成增多。符合乳腺癌变组织发生、的细胞动力学机制[1~3]。
Bcl?鄄2作为凋亡抑制基因可阻断细胞的程序性死亡而不影响细胞的增殖[1，3]。有学者认为bcl?鄄2的过度表达是一个可靠的临床预后好的指标[2~4]。本研究的结果显示，乳腺癌组织中bcl?鄄2表达分值低于乳腺癌旁组织，乳腺癌旁组织bcl?鄄2表达分值低于正常乳腺组织中的表达分值，与上述研究结论一致。
p53作为一种抑癌基因有突变与野生两种亚型，在非恶性细胞中前者处于抑制状态，而后者处于非突变状态，使细胞增殖处于一种动态平衡，保持正常增殖状况，它在肿瘤的发生、发展过程中作用十分重要[5，6]。p53基因突变与多种肿瘤的发生和预后关系密切，当任何原因使得动态平衡改变，就有可能引起细胞恶变或癌变[5~8]。本研究显示，突变型p53基因在乳腺癌和癌旁组织中的表达分值均高于正常乳腺中的分值。提示p53具有判断良、恶性病变的临床价值。
研究认为，野生型p53诱导凋亡，其肿瘤抑制功能是基于诱导G1期停滞和(或)导致细胞凋亡[5，6]，而突变型p53可延迟凋亡[5，7]。p53介导细胞凋亡的机制可能和它的转录调节因子的功能有关，因而可以被其它基因的转录促进剂或抑制剂所介导。突变型p53能够抑制凋亡，在p53表达阳性的裸鼠，各类肿瘤的发生率均较高，其机制可能是细胞对抗凋亡刺激因素的能力有所增高所致[1，2]。本研究结果是：突变型p53基因乳腺癌中的表达分值与bcl?鄄2的表达分值呈中度负相关(rs=-0.476)，PCNA与bcl?鄄2分值亦呈中度负相关(rs=-0.537)，PCNA与p53分值呈中度正相关(rs= 0.628)。提示突变型p53具有下调bcl?鄄2的表达；因p53蛋白的积聚与凋亡活性增加有关，有人提出突变型p53下调bcl?鄄2的表达取决于其突变点，并认为p53突变型是通过下调bcl?鄄2一类基因的作用而调节凋亡的[6~9]。
【】
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