乌索酸固体分散体胶囊的制备及体外溶出度研究

【摘要】  目的评价乌索酸固体分散体胶囊等3种制剂的体外溶出度及其质量。方法以PVP-K30为水溶性载体，采用溶剂法制备乌索酸固体分散体胶囊；选择0.5 %十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质，建立高效液相色谱法测定乌索酸固体分散体胶囊等3种制剂的体外溶出度，并检测分析了乌索酸在制剂中的存在状态。结果高效液相色谱法测定乌索酸的溶出度，结果准确、可靠、稳定、无载体的干扰。45 min之内，乌索酸固体分散体胶囊的体外溶出度比片剂提高2.3倍，比物理混合物胶囊提高1.1倍。结论 选择PVP-K30为载体制备乌索酸固体分散体胶囊可显著提高乌索酸的体外溶出速度。

【关键词】  乌索酸 聚乙烯吡咯烷酮 固体分散体 胶囊 溶出度 高效液相色谱

　　Abstract：ObjectiveTo evaluate the dissolution in vitro and quality of three kinds of preparations. MethodsUsing PVP?K30 as water soluble carrier, ursolic acid solid dispersion capsule was prepared by a solvent method. The HPLC method for determination of the dissolution in vitro of ursolic acid preparations was established. The existed form of ursolic acid in preparations was detected. ResultsHPLC method was accurate and reliable, and no interference occurred from carriers. The dissolution rate in vitro of ursolic acid solid dispersion capsule increased 2.3 and 1.1 times than tablet and mixture capsule within 45 min, respectively. ConclusionThe solid dispersion capsule with PVP?K30 remarkably improves the dissolution rate of ursolic acid.

　　Key words：Ursolic acid;   PVP-K30;   Solid dispersion system;   Capsules;  Dissolution;   HPLC
   
　　乌索酸(ursolic acid，UA)为五环三萜类化合物，无色针状结晶，不溶于水和石油醚，可溶于乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、醋酸乙酯和丙酮，熔点285～287℃。乌索酸具有抗肝炎、抗肿瘤、抗炎抑菌及增强免疫等药理效应，且毒性低，副作用少，具有较广泛的开发前景［1］。但乌索酸在水中的溶解度极小，溶出速度很慢，生物利用度低，影响其药效的发挥。为提高乌索酸的溶出度和生物利用度，我们采用固体分散技术制备成乌索酸固体分散体胶囊［2，3］，建立了HPLC测定其制剂含量的方法，考察了乌索酸固体分散体胶囊、乌索酸物理混合物胶囊和乌索酸片剂的体外溶出度［4］，并通过色谱峰纯度、紫外光谱及红外光谱分析，鉴别乌索酸在载体中的存在状态，为评价和控制制剂质量提供实验依据。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器  ZRS?8G智能溶出试验仪(天津大学天发科技有限公司)；Waters高效液相色谱仪(2996光电二极管矩阵检测器，Empower色谱工作站)。CP225D分析天平（德国Sartorius公司）。

　　1.2  试药  乌索酸片(本所药化室提供)；乌索酸对照品(药品生物制品检定所，批号：110742?200314，供含量测定用)； PVP?K30（上海化学试剂公司)；十二烷基硫酸钠(武汉市化学试剂厂)；甲醇（色谱纯，上海陆忠试剂厂）。

　　2  方法与结果

　　2.1  样品的制备

　　2.1.1   乌索酸固体分散体胶囊的制备将乌索酸与PVP?K30以1∶5的比例混合，加入无水乙醇完全溶解，经减压蒸馏除去乙醇，固形物干燥，研细过孔径0.15 mm药筛，装胶囊即得，含乌索酸20 mg/粒。

　　2.1.2  物理混合物胶囊的制备  将乌索酸与PVP?K30以1∶5的比例混合，研细过孔径0.15 mm药筛，装胶囊备用，含乌索酸20mg/粒。

　　2.2  检测波长的选择  取乌索酸对照品和样品溶液进样，在190～500 nm波长范围用二极管阵列检测器进行光谱扫描，组分峰最大吸收波长均为202.2 nm（图1，但由于流动相在短波长处有末端吸收，为了减少干扰，提高信噪比，提取不同波长的色谱图进行比较。选择210 nm为检测波长检测器响应值大，基线平稳，峰形好）。

　　图1  乌索酸对照品和乌索酸固体分散体紫外光谱（略）

　　2.3  色谱条件  色谱柱为Nova-Pak C18柱(3.9 mm×150 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(88∶12，体积比)；柱温25℃；流速1.0 ml/min；检测波长210 nm；外标法定量。溶出介质、乌索酸对照品和样品的HPLC色谱见图2。

　　2.4  色谱峰纯度分析 采用Empower色谱软件适应性模块对色谱峰纯度分析，对照品和样品中乌索酸色谱峰的纯度角值小于阈值，纯度角线均位于自动阈值线下方（图3），证实色谱峰为单一组分吸收峰。

　　a?溶出介质  b?对照品  c?样品

　　图2  溶出介质、乌索酸对照品和样品的HPLC色谱图（略）

　　a?对照品  b?物理混合物胶囊  c?固体分散体胶囊

　　图3  乌索酸对照品和样品峰纯度分析（略）

　　2.5  溶液的配制

　　2.5.1  乌索酸对照品溶液的配制  精密称取乌索酸对照品2.02 mg，置于25 ml量瓶中，加甲醇溶解后定容，摇匀，得含乌索酸0.080 8 mg/ml的对照品溶液。

　　2.5.2  样品溶液的配制  分别取乌索酸片剂或胶囊各20粒，精密称定其内容物重量，并计算出每粒片剂和胶囊内容物的平均重量。精密称取样品适量，置50 ml量瓶中，加入40 ml甲醇，超声提取30 min，放冷后甲醇定容，0.45 μm滤膜过滤，得样品溶液。

　　2.6  标准曲线的绘制　分别准确吸取乌索酸对照品溶液2，6，10，14，18 μl进样分析，平行3次，以峰面积(μV.s)平均值对进样量(μg)进行线性拟合，得一元线性回归方程为Y=2.53×105 m+1.73×103，r=0.999 95，表明当乌索酸进样量在0.161 6～1.454 4 μg之间时，线性关系良好。

　　2.7  精密度实验　精密吸取乌索酸对照品溶液，平行进样5次，每次进样量20 μl，乌索酸峰面积RSD为0.5 %，仪器和进样精密度良好。

　　2.8  重现性实验精密称取同一批乌索酸固体分散体胶囊样品6份，制备样品溶液，各吸取20 μl进样分析，外标法乌索酸含量。乌索酸含量的RSD为1.5 %。结果表明，本方法重现性良好。

　　2.9  加样回收率实验精密称取同一批已知乌索酸含量的乌索酸固体分散体胶囊样品5份，加入对照品适量，按“2.5”项制备样品溶液，进样测定含量，乌索酸的平均加样回收率为98.9%，RSD为2.1%。

　　2.10  样品含量测定  精密吸取“2.5”项样品溶液各20 μl，进样，记录峰面积，按外标法计算样品中的乌索酸含量，结果片剂乌索酸21.16 mg/片，物理混合物和固体分散体胶囊含乌索酸分别为20.61 mg /粒和21.31 mg /粒，并以此含量作为100 %溶出时的参照值。

　　2.11  乌索酸体外溶出实验取乌索酸固体分散体胶囊、物理混合体胶囊或片剂各6粒（片），分别按《药典》2005年版附录溶出度测定法（转篮法）测定，以0.5%十二烷基硫酸钠水溶液900 ml 为溶出介质，转速100 r·min-1，温度37 ℃。依法操作，分别于15，30，45，60，75，90，105，120 min取样5 ml，经孔径0.8 μm滤膜过滤，取续滤液0.2 ml，加入甲醇0.2 ml混匀后取20 μl进样分析。每次取样后补充相同介质5 ml。精密吸取不同溶出时间的溶出介质滤液20 μl，注入高效液相色谱仪分析测定，外标法计算溶出介质中的乌索酸含量，计算溶出量百分比。3种制剂的溶出曲线见图4。

　　图4  乌索酸溶出度曲线（略）

　　3  讨论

　　3.1  制备方法选择  固体分散制剂技术是将药物与载体混合制成高度分散的固体分散体的一项新型制剂技术［5］。本研究以PVP-K30为水溶性载体，采用溶剂法制备乌索酸固体分散体胶囊，将乌索酸在水溶性载体中形成分子分散体系，改善其溶解性能，加快溶出速度［6］。实验结果表明，45 min内乌索酸固体分散体胶囊的体外溶出度比片剂提高2.3倍，比物理混合物胶囊提高1.1倍，溶出度得到了显著提高。这是由于乌索酸在分散体系中以分子态存在，当载体迅速湿润或溶解时，加速了乌索酸的溶出。

　　3.2  溶出介质的确定  口服固体制剂的溶出度测定是预测药物生物有效性的一种重要措施。通常用水、稀盐酸或缓冲液作溶出介质。因乌索酸在水及酸性溶液中几乎不溶，在乙醇中溶解，若用无水乙醇为溶出介质，虽增加了溶解性，但使用乙醇仅适用于少数药物或制剂，故不能可靠地用来预测药物的生物有效性。因此，选择0.5%十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质，在37℃时对乌索酸有较好的溶解性。但溶出液样品在室温放置一段时间后，出现细微的针状结晶。因此取出的溶出液要立即加入等量甲醇混匀，避免乌索酸析出。

　　3.3  乌索酸在制剂中的存在状态  采用Empower色谱软件适应性模块对色谱峰纯度分析，对照品和样品中乌索酸色谱峰的纯度角值小于阈值，纯度角线均位于自动阈值线下方，证实色谱峰为单一组分吸收峰；采用光电二极管阵列检测器对乌索酸对照品和固体分散体溶液在190～450 nm波长范围内进行紫外扫描，紫外光谱经归一化后完全重合，固体分散体中乌索酸的最大吸收波长为202.2 nm，与乌索酸对照品相同；比较乌索酸对照品和固体分散体样品红外光谱，乌索酸的羰基峰位于大约1 711 cm-1处，而在乌索酸固体分散体的红外光谱中羰基的吸收峰有明显变化，在大约1 660 cm-1处有一组峰，说明乌索酸与PVP-K30之间发生了分子间的氢键作用，使羰基峰红移，表明固体分散体中乌索酸和载体分子间除物理作用以外，无化学键生成，仍与单体形式存在，乌索酸分子中的羧基与PVP-K30分子中的氧形成氢键，增加了两者相互间的作用力，从而改善乌索酸的溶解度，提高其溶出速度。证实在制备乌索酸固体分散体胶囊的过程中，乌索酸分子与载体间无化学键生成，分子结构亦无改变。

　　3.4  HPLC方法的建立  采用HPLC法测定制剂和溶出介质中乌索酸的含量，操作简便、快速、精密度高、数据准确。乌索酸在水中的溶解极小，选用0.5 %十二烷基硫酸钠水溶液做溶出介质，能有效增加乌索酸的溶解度，测量中载体PVP-K30和介质十二烷基硫酸钠对乌索酸的测定均无干扰。

【】
  　　［1］ 肖坤福,郑云法,刘成左,等. 熊果酸的研究进展［J］.时珍国医国药,2004,16(12)：1298.

　　［2］ 李宝红,张立坚,庄海旗,等.蛇床子素固体分散体的制备与分析［J］.华东理工大学学报，2004,39(5)：598.

　　［3］ 向大雄,陶昱斐,王 峰,等.齐墩果酸固体分散体形成和增溶机制研究［J］.中草药,2002,33(4)：311.

　　［4］ 顾宜,高苏莉,杨春娥,等.齐墩果酸固体分散体胶囊的溶出度测定及Weibull分析［J］.解放军药学学报，2006,22(1)：58.

　　［5］ 陈 浩, 田景振, 刘继勇,等.固体分散制剂技术［J］.山东中医杂志,2000,19(5)：304.

　　［6］ 何国熙,李娟.固体分散体技术在药剂学上的应用［J］.广东药学院学报,1999, 15(1)：33.